豬O型口蹄疫抗體水平檢測與分析

豬O型口蹄疫抗體水平檢測與分析

劉 鴿，于會舉，張培生，張 倩，宋 敏，楊慧敏，吳圓圓，屈勇剛*
(石河子大學動物科技學院，新疆 石河子 832003)

為了解北疆地區(qū)口蹄疫（FMD)的免疫抗體水平，本試驗選擇克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯、奇臺5個不同區(qū)域的19個規(guī)模化豬場進行豬O型口蹄疫ELISA抗體水平檢測并做出初步分析。980份試驗血清中檢出851份陽性血清，陽性率為86.84%（851/980）；5個不同區(qū)域的19個豬場的豬O型口蹄疫抗體陽性率，克拉瑪依85.13%、沙灣85.43%、石河子89.39%、瑪納斯85.63%、奇臺79.19%；19個規(guī)?；i場的豬O型口蹄疫抗體水平在70%（國家規(guī)定水平）以上者達100%，且19個豬場中豬O型口蹄疫抗體陽性率在90.00%及以上者有6個，占31.58%（6/19）；抗體陽性率在80.00%及以上者有16個，占84.21%（16/19）；只有3個豬場的豬O型口蹄疫抗體陽性率低于80.00%。此試驗結(jié)果說明北疆地區(qū)豬O型口蹄疫抗體水平相對較高；豬群不同構(gòu)成成分豬O型口蹄疫抗體水平存在一定差異，3個階段的仔豬的豬O型口蹄疫抗體陽性率隨日齡增大而下降。希望本試驗結(jié)果在一定程度上可為北疆地區(qū)口蹄疫防疫工作提供一定的參考。

口蹄疫；ELISA；抗體水平；陽性率

口蹄疫（food and mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒引起的一種急性、熱性和高度接觸性的偶蹄動物傳染病[1-5]，被國際獸醫(yī)局（OIE)列為必須上報的動物疫病，被我國列為一類動物傳染病[6-8]。FMD屬于小RNA病毒科口蹄疫病毒屬，包括7個血清型（A、O、C、SATI、 SATⅡ、SATⅢ和亞洲I型，其中O型口蹄疫是世界上流行最廣的一種血清型）和80多個血清亞型，并且各血清型之間無交叉免疫現(xiàn)象[9]。1514年，F(xiàn)MD被首次報道，現(xiàn)已在全球蔓延，并嚴重威脅畜牧業(yè)的健康發(fā)展，給畜牧業(yè)造成巨大損失[10-13]。在應對FMD方面，我國采取疫苗免疫接種和撲殺的綜合防治措施，效果明顯[14-16]。近些年，我國強制免疫中廣泛使用豬口蹄疫O型滅活疫苗和豬口蹄疫O型合成肽疫苗。

2015年下半年至今，豬肉價格較高，激發(fā)了養(yǎng)豬單位中畜牧工作者的工作積極性，極大地促進了養(yǎng)豬事業(yè)的發(fā)展。為了解2014年1月—2016年9月北疆地區(qū)口蹄疫（FMD)的免疫抗體水平，本試驗選擇克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯、奇臺5個不同區(qū)域的19個規(guī)?；i場進行豬O型口蹄疫ELISA抗體水平檢測并做出初步分析，在一定程度上可為北疆地區(qū)口蹄疫防疫工作提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 樣品來源

2014年1月至2016年9月采自新疆北疆地區(qū)的克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯、奇臺5個不同區(qū)域的19個規(guī)?；i場不同類型豬群（0～10 d、11～ 20 d、21～30 d仔豬，后備母豬，經(jīng)產(chǎn)母豬，種公豬），共采集血樣980份。

1.1.2 材料和儀器

豬O型口蹄疫病毒 ELISA 抗體檢測試劑盒（武漢科前生物）、自動酶標儀（美國 Bio Tek 儀器有限公司）、一次性5 mL獸用采血器、微量移液器（Eppendorf公司）、若干個移液槍頭（已高壓滅菌）、恒溫培養(yǎng)箱（光明醫(yī)療儀器廠）、平板震蕩儀等。

1.2 試驗方法

1.2.1 采集樣品

在采樣過程中要保證規(guī)范性操作，如此才可保證后續(xù)工作的順利開展。對已選定的豬群一次性從前腔靜脈（左右各有一條，可根據(jù)操作者的優(yōu)勢手的習慣決定從哪側(cè)采血）或耳靜脈采集血液3～5 mL/頭，室溫靜置 30 min左右，待血清析出后，收于采樣箱中（里面放有冰袋）帶回實驗室，每份吸取 1 mL血清于滅菌的1.5 mL EP管中，逐管標記，4 000 r/min ，離心10 min，可立即進行ELISA檢測，亦可放-20 ℃保存?zhèn)溆?，在時間允許的條件下進行檢測，但不能放置過長時間。

1.2.2 間接 ELISA 檢測方法

按照試劑盒使用說明書的步驟測樣品 OD630nm值。首先，將濃縮的洗滌液恢復到室溫（25 ℃），然后按照 1∶20稀釋濃縮的洗滌液，最好是當天用當天配（2～8 ℃，可存放一周時間）。試驗中，在豬O型口蹄疫抗原包被微孔板加入經(jīng) 1∶4倍稀釋的對照血清和1∶32待檢血清，在37 ℃恒溫箱中溫浴30 min，待抗原抗體結(jié)合后，洗滌后加羊抗豬酶標二抗，再次在37 ℃恒溫箱中溫浴30 min，洗滌后加底物A、B，混勻后在室溫下避光顯色 10 min，加終止液終止反應，在10 min內(nèi)，用酶標儀630 nm 波長測定各反應孔中的OD630nm值，據(jù)OD630nm值對抗體水平進行判定。

1.2.3 結(jié)果判定

在酶標儀上測各孔OD630nm值。試驗成立的條件是陽性對照孔平均OD630nm值 ≥ 0.8，陰性對照孔平均OD630nm值必須＜0.3。

樣品OD630nm值 ≥ 0.4，判為陽性；樣品OD630nm值＜0.4，判為陰性。

根據(jù)試劑盒說明書，按表1進行OD630nm值與間接血凝試驗（IHA)的轉(zhuǎn)換。

1.2.4 統(tǒng)計分析

用SPSS 軟件、Excel 軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，OD630nm值結(jié)果用平均值±標準差表示。

2 試驗結(jié)果

2.1 不同地區(qū)不同豬場的豬瘟抗體陽性率及抗體水平

豬場A～E在克拉瑪依區(qū)域，F(xiàn)～I在沙灣區(qū)域，J～M在石河子區(qū)域，N～Q在瑪納斯區(qū)域，R～S在克拉瑪依區(qū)域。980份試驗血清中檢出851份陽性血清，陽性率為86.84%（851/980），A～S豬場的豬O型口蹄疫抗體陽性率依次為90.00%、85.71%、92.25%、75.00%、82.67%、83.33%、76.79%、93.02%、88.57%、91.11%、87.50%、94.74%、84.21%、86.96%、90.48%、82.93%、88.14%、80.00%、78.38%。其中，抗體陽性率在90.00%及以上者有6個，抗體陽性率在80.00%及以上者有16個，只有3個豬場的豬O型口蹄疫抗體陽性率低于80.00%，分別為75.00%、76.79%、78.38%，均高于70%（國家規(guī)定水平）。結(jié)果見表2。

2.2 北疆5個不同區(qū)域豬O型口蹄疫抗體分析結(jié)果

5個不同區(qū)域的19個豬場的豬O型口蹄疫抗體陽性率：克拉瑪依85.13%、沙灣85.43%、石河子89.39%、瑪納斯85.63%、奇臺79.19%；不難發(fā)現(xiàn)，石河子的抗體陽性率最高，為89.39%；奇臺的抗體陽性率最低，為79.19%；克拉瑪依、沙灣、瑪納斯的抗體陽性率相當。19個試驗豬場的豬O型口蹄疫抗體檢測平均OD630nm值：克拉瑪依1.451，沙灣1.542石河子1.395，瑪納斯1.328，奇臺1.096。對19個豬場的采樣血清進行試驗發(fā)現(xiàn)，間接血凝試驗（IHA)均大于等于1∶1024。結(jié)果見表3。

2.3 19個規(guī)模化豬場豬群不同構(gòu)成成分的豬O型抗體水平

分析19個試驗豬場的豬O型抗體水平，0～10 d仔豬、11～20 d仔豬、21～30 d仔豬、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬的豬瘟抗體陽性率分別為 95.79%、91.58%、89.47%、75%、86.34%、98.82%。結(jié)果見表4。

表1 表1 豬O型口蹄疫抗體 ELISA 檢測OD630nm值與間接血凝試驗效價的轉(zhuǎn)換

表2 北疆地區(qū)5個不同區(qū)域的19個豬場豬O型口蹄疫抗體檢測結(jié)果

表3 北疆5個不同區(qū)域豬O型口蹄疫抗體分析結(jié)果

表4 19個規(guī)?；i場不同構(gòu)成成分豬群豬O型口蹄疫抗體水平

3 討論

3.1 北疆地區(qū)豬O型口蹄疫抗體水平相對較高

分析試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，980份試驗血清中檢出851份陽性血清，陽性率為86.84%（851/980）；北疆地區(qū)的克拉瑪依、沙灣、石河子、瑪納斯、奇臺5個不同區(qū)域的19個規(guī)模化豬場的豬O型口蹄疫抗體水平在70%（國家規(guī)定水平）以上者達100%，且19個豬場中豬O型口蹄疫抗體陽性率在90.00%及以上者有6個，占31.58%（6/19）；抗體陽性率在80.00%及以上者有16個，占84.21%（16/19）；只有3個豬場的豬O型口蹄疫抗體陽性率低于80.00%。此試驗結(jié)果說明北疆地區(qū)豬O型口蹄疫抗體水平相對較高，對于那些豬O型口蹄疫抗體水平較低的豬場來說，應引起豬場工作人員的高度重視，從疫苗質(zhì)量、免疫操作、豬群狀況等幾個方面入手，找到真正的原因并盡快解決，保障豬群健康，以求養(yǎng)豬事業(yè)更好更快發(fā)展，為國民提供健康放心豬肉。

3.2 豬群不同構(gòu)成成分豬O型口蹄疫抗體水平存在一定差異

分析0～10 d仔豬、11～20 d仔豬、21～30 d仔豬、后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬和種公豬的豬O型口蹄疫抗體水平發(fā)現(xiàn)，種公豬的抗體陽性率最高，為98.82%，免疫水平較高；后備母豬的抗體陽性率最低，為75%，有待提高；0～10d仔豬、11～20 d仔豬、21～30 d仔豬的抗體陽性率依次為95.79%、91.58%、89.47%，都是較高的免疫水平，3個階段仔豬的豬O型口蹄疫抗體陽性率隨日齡增大而下降，其中仔豬出生10 d后抗體水平有下降增快的趨勢，這可能與母源抗體有一定的關系，提示在仔豬出生后應在適宜的時間及時做好免疫接種工作，并保證飼養(yǎng)環(huán)境良好，采取適當?shù)木C合措施以促進仔豬的健康生長，為仔豬群的后續(xù)發(fā)展打下堅實基礎。

3.3 加強飼養(yǎng)管理，有效預防疾病

加強飼養(yǎng)管理，是一項非常重要的措施，只有好的管理，才能有效保障豬群健康。鑒于豬口蹄疫的巨大危害，采取及時有效的免疫接種是行之有效的措施，在適當?shù)臅r間應進行豬O型口蹄疫的免疫接種。對種公豬和繁殖母豬進行豬O型口蹄疫的全免，還要根據(jù)各自豬場的實際情況對免疫程序進行調(diào)整。在豬場的日常工作中，應將豬群免疫接種工作放到非常重要的位置，并采取嚴格的制度規(guī)范。

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2016-10-12）

新疆石河子市農(nóng)業(yè)科技攻關項目（編號：2013NY04）

作者 ：劉鴿（1986-），男，山東省淄博人，碩士研究生，主要從事動物傳染病診斷與防治工作

*通訊作者 ：屈勇剛（1971-），男，陜西省渭南人，副教授，主要從事動物傳染病診斷與防治工作