某豬場CSFV、PRRSV、PCV2和PRV多重感染病例的報(bào)道

某豬場CSFV、PRRSV、PCV2和PRV多重感染病例的報(bào)道

徐 國，代振江，曾智勇＊，葉百川，張愛瓊，咸 文，何小莉
(貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025）

貴州省某種豬場一周內(nèi)連續(xù)發(fā)生30余頭母豬早產(chǎn)和（或）產(chǎn)死胎癥狀，豬場工作人員向筆者實(shí)驗(yàn)室送檢同窩流產(chǎn)死胎4只。根據(jù)流行情況和臨床特征，初步判斷與病毒感染有關(guān)。為篩查具體病原，本實(shí)驗(yàn)室將送檢死胎組織混合樣品分別對CSFV、PRRSV 、PCV2、PRV、PPV 和JEV六種常見病毒進(jìn)行病原核酸檢測，結(jié)果顯示該豬場發(fā)病豬存在CSFV、PRRSV、PCV2和PRV的多重感染。

CSFV；PRRSV；PCV2；PRV；多重感染

母豬繁殖障礙又稱繁殖障礙綜合征，其病因有非傳染和傳染性兩類，豬瘟病毒（CSFV）、豬藍(lán)耳病毒（PRRSV）、圓環(huán)病毒2型（PCV2）、豬偽狂犬病毒（PRV）等是引起母豬繁殖障礙疾病的主要病原微生物[1]。豬瘟是由CSFV引起的豬的一種急性或慢性、熱性和高度接觸性傳染病，其特征為發(fā)病急、高熱稽留和細(xì)小血管變性，引起全身泛發(fā)性小點(diǎn)出血，脾臟梗死；豬繁殖與呼吸綜合征是由PRRSV引起的豬的一種繁殖障礙和呼吸系統(tǒng)的傳染病，其特征為厭食、發(fā)熱、懷孕后期發(fā)生流產(chǎn)，產(chǎn)死胎和木乃伊胎，幼齡仔豬發(fā)生呼吸系統(tǒng)疾病和大量死亡；豬圓環(huán)病毒病是指以PCV2為主要病原、單獨(dú)或繼發(fā)或混合感染其他致病微生物的一系列疾病的總稱，其臨床癥狀特征主要為體質(zhì)下降、消瘦、貧血、黃疽、生長發(fā)育不良、腹瀉、呼吸困難、母豬繁殖障礙、內(nèi)臟器官及皮膚的廣泛病理變化；豬偽狂犬病是由PRV引起的一種急性傳染病，臨床特征為體溫升高，新生仔豬表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，成年豬常為隱性高感染，妊娠母豬感染后可引起流產(chǎn)、死胎及呼吸系統(tǒng)癥狀[2]。

貴州省某種豬場一周內(nèi)連續(xù)發(fā)生30余頭母豬早產(chǎn)和（或）產(chǎn)死胎。據(jù)述，該豬場2016年8月份對CSFV、口蹄疫（FMDV）和PRV進(jìn)行了普免。該豬場保育豬中出現(xiàn)體溫升高、嗜睡、皮膚發(fā)紅、食欲廢絕、喘氣、被毛粗亂、精神沉郁、喜臥等癥狀。病豬剖檢可見皮下大量出血點(diǎn)；腎臟布滿針尖狀出血點(diǎn)；肺臟存在間質(zhì)性肺炎、胸腔積液、心包積液。根據(jù)上述情況，懷疑該起病例與病毒感染相關(guān)。為了進(jìn)一步確診，對CSFV、PRRSV、PCV2和PRV等6種常見病原進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室核酸檢測，現(xiàn)將檢測過程報(bào)道如下。

1 材料

1.1 病料

貴州省某種豬場送檢的母豬流產(chǎn)死胎。

1.2 試劑

根 據(jù)GenBank中 關(guān) 于CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、PPV和JEV序列設(shè)計(jì)并合成6對特異性引物引物（預(yù)擴(kuò)增條帶大小分別為 CSFV 508 bp、PRRSV 434 bp、P C V 2 3 5 3 b p、P R V 3 0 5 b p、PPV 271 bp和JEV 1 015 bp），核酸提取試劑盒，PrimeScript One Step RTPCR Kit Ver.2.0等。

圖1 樣品中6種病毒的PCR/RT-PCR檢測結(jié)果

2 方法

通過該養(yǎng)殖場送檢人員了解飼養(yǎng)情況、免疫接種、發(fā)病死亡情況、藥物治療和臨床癥狀之后將送檢流產(chǎn)死胎進(jìn)行解剖觀察并記錄。將采集的組織混合樣品研磨勻漿，液氮反復(fù)凍融3次后12 000 r/min離心10 min，取上清，用 TakaRa Mini BEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver 4.0試劑盒提取核酸。

按 照 一 步 法PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2.0試劑盒說明書對CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、PPV和JEV進(jìn)行檢測。反應(yīng)總體系為50 μL：2×1 Step Buffer 25 μL， 模板7.0 μL，上下游引物各1.0 μL，Prime Script 1 Step Enzyme Mix 2 μL，Release Free H2O 14 μL；反應(yīng)條件均為：95 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

3 結(jié)果

該豬場2016年8月份對豬瘟、口蹄疫和豬偽狂犬病進(jìn)行了普免，該豬場保育豬發(fā)生體溫升高、嗜睡、皮膚發(fā)紅、食欲廢絕、喘氣、被毛粗亂、精神沉郁、衰弱、喜臥等癥狀，發(fā)病率約60%，病死率約30%～40%，多于45日齡前后發(fā)病。該種豬場1周內(nèi)連續(xù)發(fā)生30余頭母豬早產(chǎn)和（或）產(chǎn)死胎癥狀的情況，且仔豬有神經(jīng)癥狀。

將送檢流產(chǎn)死胎進(jìn)行解剖觀察。解剖后可見，皮下有出血點(diǎn)；腎臟表面布滿針尖狀出血點(diǎn)、剖開腎臟見有不同程度損傷；肺臟存在間質(zhì)性肺炎；胸腔積液；心包積液。

將送檢流產(chǎn)死胎組織病料混合后，提取病料核酸。以提取的核酸為模板，應(yīng)用一步法RT-PCR試劑盒，對病料進(jìn) 行CSFV、PRRSV、PCV2、JEV、PPV和PRV等6種病毒的核酸檢測，結(jié)果見圖1。檢測結(jié)果表明，組織樣品中CSFV、PRRSV、PCV2、PRV為陽性，PPV和JEV檢測結(jié)果為陰性。

4 結(jié)果分析與討論

檢測結(jié)果表明，送檢流產(chǎn)胎兒存在SCFV、PRRSV、PCV2和PRV的多重感染。引起母豬繁殖障礙疾病既有傳染性因素，也有非傳染性疾病因素，而CSFV、PRRSV、PCV2和PRV等都是引起母豬繁殖障礙疾病的主要因素[1，2]。本文送檢病樣的豬場已對CSF和PR進(jìn)行了免疫，但未進(jìn)行相應(yīng)的抗體監(jiān)測，而本次病原篩查結(jié)果也間接表明該豬場CSF、PR免疫失敗。免疫失敗的原因是多方面的，如疫苗的接種途徑、用法用量和效價(jià)，動(dòng)物應(yīng)激，遺傳因素，患免疫抑制疾病等。所以，養(yǎng)豬場應(yīng)從多方面查找免疫失敗的原因，采取措施提高抗體免疫水平并定期進(jìn)行疫苗免疫抗體水平的監(jiān)測。同時(shí)，對PCV2、PRRS等進(jìn)行疫苗免疫，改善圈舍衛(wèi)生，進(jìn)行嚴(yán)格徹底的清潔和消毒以減輕感染壓力，加強(qiáng)綜合管理防控，堅(jiān)持自繁自養(yǎng)。此外，剖檢時(shí)發(fā)現(xiàn)胎兒腎臟存在損傷，可能與發(fā)病母豬群的藥物保健有關(guān)，故建議暫停，同時(shí)在飼料或飲水中適當(dāng)添加電解多維，飼喂優(yōu)質(zhì)飼料。

針對母豬繁殖障性疾病的治療有文獻(xiàn)報(bào)道可采取激素療法，如王金鵬等[3]所采用的催情散療法治愈率可達(dá)90%以上。另外，張艷豐等[4]報(bào)道的“三聯(lián)療法”也有一定效果，即先用西藥(防腐消毒劑)沖洗子宮并進(jìn)行藥物灌注(青鏈霉素)，同時(shí)配合益母生化散混飼，修復(fù)受損子宮和卵巢，治療炎癥和產(chǎn)后感染，最后用催情散刺激卵泡發(fā)育，誘其發(fā)情，促其排卵。

[1] 宣長和.豬病學(xué)[M].3版.北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社， 2010：177.

[2] 陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].5版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006：210-231.

[3] 黃利權(quán)，蔡榮湘，陳曉清.催情散治療母豬不孕癥的試驗(yàn)[J].中國獸醫(yī)雜志，1998，24（4）：44-45.

[4] 王艷豐，張丁華，曹智高，等.母豬繁殖障礙治療效果觀察[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014，35(12)：161-163.

2016-11-23）

省校合作計(jì)劃項(xiàng)目，黔科合LH字[2014]7670號

徐國，男，在讀碩士，研究方向：動(dòng)物傳染病病原分子生物學(xué)。E-mail：576144546@qq.com

曾智勇（1978—），男，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事動(dòng)物傳染病病原分子生物學(xué)研究