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      HPLC法測定華佗豆中綠原酸的含量

      2017-02-21 19:08:26李兵曾艷婷莫惠雯陳圣斌
      關鍵詞:綠原酸

      李兵++曾艷婷++莫惠雯++陳圣斌++趙惠玲++盧汝梅

      【摘要】目的:建立華佗豆中綠原酸的含量測定方法。方法:采用高效液相色譜法測定華佗豆中綠原酸的含量,液相色譜柱為Inertsil ODS-3 (250mm×46mm,5μm),流動相為乙腈和01%磷酸水溶液,流速1mL/min,檢測波長327nm。結果:綠原酸進樣量在0548~3288μg之間線性關系良好(r=09999);華佗豆中綠原酸平均回收率為9631%。結論:該方法簡便、靈敏、準確性高,重復性好,為華佗豆的質量標準制定及進一步研究提供參考依據(jù)。

      【關鍵詞】華佗豆;綠原酸;HPLC

      【中圖分類號】R914【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517(2017)01-0016-03

      Determination of Chlorogenic Acid in Plants of Calonyction muricatum by HPLC

      LI BingZENG YantingMO HuiwenCHEN ShengbinLU Rumei*

      Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530200,China

      Abstract:Objective To develop a HPLC method for the determination of chlorogenic acid(CHA) from Calonyction muricatum. Methods CHA was determined by HPLC on a Inertsil ODS-3(250mm×46mm,5μm) column, acetonitrile-01% phosphoric acid solution as mobile phase, the flow rate was 10mL/min and detected at 327nm. Results Good linearities of CHA in the range of 0548~3288ug(r=09999). And the average recovery was 9631%(RSD=212%). Conclusion These results as above was simple,sensitive,accurate and had good reproducibility, can be used to provide the scientific evidence for the establishment of standard for quality controland further study.

      Keywords:Calonyction muricatum; Chlorogenic Acid; HPLC

      華佗豆為旋花科植物丁香茄Calonyction muricatum (Linn) GDon的種子,又名天茄子、天茄。其始載于《救荒本草》,味苦,性寒,具有瀉下、解毒等功效,分布于廣西、云南、河南、湖北、湖南等地[1]。在廣西民間,華佗豆又稱跌打豆,常用于治療跌打損傷、小兒疳積、小兒肺炎,療效顯著[2]。Gevara B Q等[3]研究結果表明,華佗豆具有明顯的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗菌活性。華佗豆中富含綠原酸成分,綠原酸是由咖啡酸和奎尼酸縮合而成的縮酚酸,具有抗菌、增高白血球、清除自由基、抑制黃嘌呤氧化酶等活性[4]。綠原酸為抗菌抗炎作用的酚酸類活性成分。目前,以綠原酸類成分用于華佗豆質量控制的報道較少,研究采用HPLC法測定華佗豆中綠原酸的含量,為其質量控制和臨床開發(fā)應用提供科學依據(jù)。

      1儀器與材料

      11儀器Agilent 1100高效液相色譜儀(美國安捷倫公司);BS224分析天平(德國賽多利斯);KQ-500DA數(shù)控超聲波清洗器(江蘇昆山市超聲儀器有限公司);CD-UPH-II-20L實驗室超純水器(成都超純科技有限公司);TGL-16G高速臺式離心機(上海安亭)。

      12材料綠原酸(批號:F9MQ-ADLM,中國食品藥品檢定研究院);甲醇(批號:67-56-1)、乙腈(批號:75-05-8)均為色譜純,購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司;水為超純水。

      華佗豆藥材采自玉林市,經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學韋松基教授鑒定為旋花科植物丁香茄Calonyction muricatum (Linn) GDon的種子 。

      2方法與結果

      21色譜條件Inertsil ODS-3柱(46mm×250mm,5μm),以乙腈(B)-01%磷酸水溶液(A)(9 ∶[KG-*3]91)為流動相;流速1mL/min;柱溫25℃;檢測波長327nm;進樣量5μL。

      22對照品溶液制備取綠原酸對照品約14mg,精密稱定,加甲醇定容到25mL量瓶中,制成每1mL含0548mg綠原酸的溶液,即為對照品溶液。

      23供試品溶液的制備取華佗豆(玉林)粉末(過號篩)約03g,精密稱定,置50mL錐形瓶中,精密加入甲醇20mL,稱定質量,常溫下超聲處理90min,冷卻至室溫,用甲醇補足質量,搖勻,濾過,取適量續(xù)濾液經(jīng),高速離心15min,作為供試品溶液。

      24線性范圍考察精密吸取綠原酸對照品溶液1、2、3、4、5、6μL,依次進樣,測定綠原酸的峰面積。以峰面積對進樣量(μg)進行直線回歸,得回歸方程為:Y=140608965X-03327,r=09999。結果表明: 綠原酸在0548~3288μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

      25精密度試驗取上述對照品溶液,按“21”項下色譜條件連續(xù)進樣6次,測定綠原酸的峰面積。結果綠原酸峰面積RSD為0 99 %,表明儀器精密度良好。

      26穩(wěn)定性試驗取同一份供試品(玉林),按“23”項下方法制備,按“21”項色譜條件分別在0、3、6、12、18、24h進樣,測定綠原酸峰面積,RSD為112%,表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

      27重復性試驗取同一份供試品(玉林),按“23”項下方法平行制備6份,按21項色譜條件進樣,結果綠原酸平均含量為1456mg/g,RSD為274%,表明本法重復性良好。

      28加樣回收試驗精密稱取已知綠原酸含量的華佗豆樣品015g,共6份,分別精密加入1866mg/mL綠原酸對照品1mL,按“23”項下方法制備,按“21”項色譜條件分別測定,計算加樣回收率,平均加樣回收率為9631%,RSD為212%,結果表明本法準確度良好。結果見表1。

      29樣品含量測定取4個不同產(chǎn)地華佗豆藥材粉末03g,精密稱定,按“23”項下方法制備,按“21”項色譜條件分別測定。結果見表2,圖1、2。

      3討論

      綠原酸為苯丙素類化合物,分子結構中含有酯基、不飽和雙鍵及多元酚,鄰二酚羥基在加熱過程中易氧化分解,故本研究采用甲醇常溫下超聲處理。不同產(chǎn)地華佗豆含量測定結果表明,華佗豆中含有大量的綠原酸類成分,基于此類成分與其抗菌抗炎活性息息相關,可考慮將此類成分的含量作為華佗豆的質量控制指標。本研究中建立的含量測定方法簡單可行,重現(xiàn)性好,可為華佗豆藥材的質量控制提供參考。

      參考文獻

      [1]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草(第6卷)[M].上海:上??茖W技術出版社,1999: 495.

      [2] 朱小勇,趙紅艷,黃貴慶,等.超臨界CO2提取天茄子揮發(fā)油化學成分的分析[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(7):139-141.

      [3] Guevara B Q,Rosalinda C,Solevilla Y B,et al.Preliminary phytochemical microbiological and pharmacological studies of Calonyction muricatum Linn[J]. Acta Manilana Ser A Nat Appl Sci,1978,(17):20.

      [4] 徐小昆, 陳志勇, 廖立平, 等. 丁公藤屬植物中東莨菪苷、綠原酸、東莨菪素、異綠原酸A、異綠原酸B 和異綠原酸C 的含量測定[J].中國中藥雜志,2015,40(6):1119-1122.

      (編輯:穆麗華)

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