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      酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb的臨床效果對(duì)比分析

      2017-02-28 22:01陳李好
      中外醫(yī)學(xué)研究 2016年33期
      關(guān)鍵詞:對(duì)比

      陳李好

      【摘要】 目的:對(duì)酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb的臨床效果進(jìn)行對(duì)比。方法:選擇196份接種乙肝疫苗后血清標(biāo)本作為研究對(duì)象,分別采取酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb,并對(duì)兩種方法的檢測(cè)陽性率和HBsAb最低檢出結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果:196份標(biāo)本經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè),檢出HBsAb陽性標(biāo)本139份,陽性率為70.92%;經(jīng)微粒子酶免疫分析法檢測(cè),檢出HBsAb陽性標(biāo)本157份,陽性率為80.10%。微粒子酶免疫分析法檢測(cè)陽性率較酶聯(lián)免疫吸附法高(P<0.05)。微粒子酶免疫分析法測(cè)定HBsAb濃度為14.1 IU/L時(shí),酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)為陰性。結(jié)論:采取微粒子酶免疫分析法對(duì)HBsAb定量檢測(cè),不但可在兒童乙肝疫苗接種后展開HBsAb濃度變化動(dòng)態(tài)觀察,進(jìn)而對(duì)免疫效果進(jìn)行判斷,且還能夠以HBsAb濃度變化來對(duì)再次免疫接種時(shí)間予以確定,對(duì)比酶聯(lián)免疫吸附法具有一定的優(yōu)勢(shì)。在今后的臨床檢驗(yàn)工作中,值得對(duì)其給予足夠的重視,并展開推廣,改善乙肝疫苗接種后免疫效果監(jiān)測(cè)工作質(zhì)量。

      【關(guān)鍵詞】 酶聯(lián)免疫吸附法; 微粒子酶免疫分析法; HBsAb; 定量檢測(cè); 對(duì)比

      doi:10.14033/j.cnki.cfmr.2016.33.024 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805(2016)33-0048-02

      目前在國(guó)內(nèi),大部分醫(yī)院的檢驗(yàn)科會(huì)采取酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)以及乙型肝炎表面抗體(HBsAb)展開檢測(cè)。酶聯(lián)免疫吸附法在檢驗(yàn)工作中,具有操作簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì),但是值得注意的是,其靈敏度、重復(fù)性相對(duì)較差,很容易受到鉤狀效應(yīng)、標(biāo)本濃度等因素的影響,進(jìn)而出現(xiàn)假陰性結(jié)果,造成漏診或者是誤診[1]。近幾年,隨著科學(xué)技術(shù)的提高,微粒子酶免疫分析法問世,文獻(xiàn)[2]報(bào)道,微粒子酶免疫分析法在HBsAb檢測(cè)中,存在一定的優(yōu)勢(shì)。有研究表明兒童在接種乙肝疫苗后較成人更易產(chǎn)生乙型肝炎表面抗體[3],本次研究中,出于對(duì)酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb的臨床效果進(jìn)行對(duì)比的目的,對(duì)196份接種乙肝疫苗后血清標(biāo)本分別采取酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb,并對(duì)比分析結(jié)果,現(xiàn)匯報(bào)如下。

      1 資料與方法

      1.1 一般資料

      研究中資料來源于筆者所在醫(yī)院收集到的接種乙肝疫苗后血清標(biāo)本,共選擇196份作為研究對(duì)象。標(biāo)本來源于123例女性和73例男性。標(biāo)本受試者均采取0、1、6個(gè)月3針的免疫程序接種乙肝疫苗。

      1.2 方法

      1.2.1 研究方法 將選擇的196份接種乙肝疫苗后血清標(biāo)本分別采取酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法兩種不同的方法檢測(cè)HBsAb,并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。

      1.2.2 檢測(cè)方法 本次研究的檢測(cè)過程中所需要的儀器主要包括:Biocel l2010酶標(biāo)儀、美國(guó)雅培I2000全自動(dòng)免疫分析儀及其配套試劑、ELISA試劑盒(由廈門英科新創(chuàng)生物工程有限公司提供)及Biocel lA201洗板機(jī)。酶聯(lián)免疫吸附法:采取雙抗原夾心法,嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。微粒子酶免疫分析法:同樣采取雙抗原夾心法進(jìn)行。被測(cè)抗體與包被在微粒子上的抗原進(jìn)行充分的結(jié)合,然后將其與標(biāo)記堿性磷酸酶的抗原進(jìn)行充分的結(jié)合,ALP可對(duì)4-甲基傘形酮磷酸鹽產(chǎn)生催化作用,使其分解成為具有一定熒光性的物質(zhì),熒光變化率水平與被測(cè)抗體的濃度水平呈現(xiàn)正比例關(guān)系,濃度測(cè)定結(jié)果超過10 IU/L時(shí),視為檢測(cè)結(jié)果陽性,濃度測(cè)定結(jié)果不足10 IU/L時(shí),視為結(jié)果陰性[4]。

      1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

      (1)觀察酶聯(lián)免疫吸附法與微粒子酶免疫分析法兩種方法的檢測(cè)陽性率;(2)酶聯(lián)免疫吸附法與微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb最低檢出結(jié)果。取1份HBsAb陽性標(biāo)本,經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法及微粒子酶免疫分析法測(cè)定3次,求得其檢測(cè)結(jié)果的平均值,倍比稀釋血清分別采取酶聯(lián)免疫吸附法及微粒子酶免疫分析法進(jìn)行檢測(cè),重復(fù)檢測(cè)3次之后取平均值即得。HBsAb檢測(cè)結(jié)果陽性的判定標(biāo)準(zhǔn)包括:微粒子酶免疫分析法檢測(cè)結(jié)果達(dá)到10 IU/L以上,酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)的樣本吸光度/CUTOFF值水平>1.0。

      1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

      數(shù)據(jù)用SPSS 18.0軟件處理,計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,比較用字2檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 酶聯(lián)免疫吸附法與微粒子酶免疫分析法檢測(cè)結(jié)果比較

      196份標(biāo)本經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè),檢出HBsAb陽性標(biāo)本139份,陽性率為70.92%;經(jīng)微粒子酶免疫分析法檢測(cè),檢出HBsAb陽性標(biāo)本157份,陽性率為80.10%。經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)出的陽性結(jié)果使用微粒子酶免疫分析法檢測(cè)均為陽性,微粒子酶免疫分析法檢測(cè)陽性率較酶聯(lián)免疫吸附法高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

      2.2 酶聯(lián)免疫吸附法與微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb最低檢出值比較

      微粒子酶免疫分析法測(cè)定HBsAb濃度為14.1 IU/L及以下時(shí),酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)為陰性,由此證實(shí),微粒子酶免疫分析法對(duì)血清HBsAb定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性更高,可以對(duì)乙肝疫苗接種后免疫效果進(jìn)行反映,具體見表1。

      3 討論

      目前臨床上多采取酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)血清乙肝表面抗體進(jìn)行檢測(cè),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)乙肝疫苗免疫效果進(jìn)行了解的目的。然而,實(shí)踐與研究發(fā)現(xiàn),這一操作比較繁瑣,重復(fù)性相對(duì)較差,檢測(cè)所需時(shí)間較長(zhǎng),無法對(duì)體內(nèi)HBsAb展開定量檢測(cè)。近期文獻(xiàn)[5]報(bào)道發(fā)現(xiàn),微粒子酶免疫分析法在HBsAb定量分析中,具有快速、特異性強(qiáng)、靈敏度高等諸多優(yōu)勢(shì)。

      本次研究中,出于對(duì)酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb的臨床效果進(jìn)行對(duì)比的目的,對(duì)196份接種乙肝疫苗后血清標(biāo)本分別采取酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb,并對(duì)兩種方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了對(duì)比分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),196份標(biāo)本經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè),檢出HBsAb陽性標(biāo)本139份,陽性率為70.92%;經(jīng)微粒子酶免疫分析法檢測(cè),檢出HBsAb陽性標(biāo)本157份,陽性率為80.10%,且經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)出的陽性結(jié)果使用微粒子酶免疫分析法檢測(cè)均為陽性,微粒子酶免疫分析法檢測(cè)陽性率較酶聯(lián)免疫吸附法高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。另外,通過酶聯(lián)免疫吸附法與微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb最低檢出值分析,微粒子酶免疫分析法測(cè)定HBsAb濃度為14.1 IU/L時(shí),酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)為陰性。由此證實(shí),微粒子酶免疫分析法對(duì)血清HBsAb定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性更高,可以對(duì)乙肝疫苗接種后免疫效果進(jìn)行反映,在今后的臨床檢驗(yàn)工作中,應(yīng)對(duì)其給予足夠的重視。根據(jù)肖琴[6]的報(bào)道,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法和微粒子酶免疫分析法法測(cè)定乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物,各有其優(yōu)點(diǎn),但采用微粒子酶免疫分析法的靈敏度更具有一定的優(yōu)勢(shì),更能為臨床提供診斷依據(jù)。姜立民等[7]也報(bào)道了通過酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法對(duì)乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物測(cè)定,結(jié)果顯示,微粒子酶免疫分析法比酶聯(lián)免疫吸附法更加精確,這與本文的研究結(jié)果一致。

      通過本次研究筆者體會(huì)到,酶聯(lián)免疫吸附法為對(duì)血清HBsAb進(jìn)行檢測(cè)的主要方法的一種,且屬于抗原抗體在固相表面進(jìn)行充分反應(yīng),參與僅為孔底的接觸部分,其余的抗原或抗體均需要實(shí)施擴(kuò)散處理,與固相抗體或固相抗原進(jìn)行充分的接觸,屬于逐漸平衡的過程,因此檢測(cè)過程中所需的時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)。除此外,酶聯(lián)免疫吸附法的手工操作過程相對(duì)比較的復(fù)雜,檢測(cè)的靈敏度水平卻相對(duì)較低,不能夠?qū)z測(cè)額進(jìn)行準(zhǔn)確的測(cè)定,由于需要對(duì)處于結(jié)合態(tài)的抗原或抗體、游離狀態(tài)下抗體或抗原實(shí)施準(zhǔn)確的分離處理,因此大多數(shù)情況下需要進(jìn)行反復(fù)加樣、洗板等操作,很容易造成人為誤差[8-10]。微粒子酶免疫分析法主要是利用熒光酶免技術(shù),經(jīng)全自動(dòng)酶免分析儀對(duì)HBsAb水平進(jìn)行準(zhǔn)確的測(cè)定,從標(biāo)本加樣操作開始直到得出相應(yīng)的結(jié)果,均由相關(guān)儀器在自動(dòng)化狀態(tài)下完成,從而有效避免了人為誤差,實(shí)現(xiàn)了全自動(dòng)、快速、準(zhǔn)確,并且可定量分析,靈敏度以及特異性均顯著提高,重復(fù)性得到改善[11]。

      綜上所述,采取微粒子酶免疫分析法對(duì)HBsAb定量檢測(cè),不但在兒童乙肝疫苗接種后展開HBsAb濃度變化動(dòng)態(tài)觀察,進(jìn)而對(duì)免疫效果進(jìn)行判斷,且還能夠以HBsAb濃度變化來對(duì)再次免疫接種時(shí)間予以確定,對(duì)比酶聯(lián)免疫吸附法具有一定的優(yōu)勢(shì)。在今后的臨床檢驗(yàn)工作中,值得對(duì)其給予足夠的重視并展開推廣,改善乙肝疫苗接種后免疫效果監(jiān)測(cè)工作質(zhì)量。

      參考文獻(xiàn)

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      [2]楊曉燕,陳濤,郭仲輝,等.線性免疫印跡法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)抗核抗體的比較分析研究[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2014,12(23):11-13.

      [3]劉紹芬.成人接種乙肝疫苗后免疫情況的觀察與分析[J].中外健康文摘,2009,6(5):81-82.

      [4]任麗民,鄧芳,余明杰,等.化學(xué)發(fā)光法對(duì)ELISA檢測(cè)HBsAg“灰區(qū)”標(biāo)本的再分析探討[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2010,7(5):434-435.

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