付靜濤，吳美玲，畢江華，趙增元，李英杰，肖西山

奶牛隱性乳房炎病原菌分離鑒定試驗

付靜濤1，吳美玲2，畢江華3，趙增元3，李英杰4，肖西山1

(1.北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，北京 102442；2.北京市延慶區(qū)畜牧技術(shù)推廣站，北京 102100；3.石家莊天泉良種奶牛有限公司，石家莊 050000；4.北京市延慶區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，北京 102100）

為給北京某郊區(qū)奶牛隱性乳房炎的綜合防治提供依據(jù)，本試驗在該郊區(qū)采集了128份隱性乳房炎乳樣，并對主要病原菌種類及分布情況進行了研究。結(jié)果表明：（1）環(huán)境性細菌和傳染性細菌是該地區(qū)隱性乳房炎的主要病原菌。傳染性細菌中以金黃色葡萄球菌為主（規(guī)模牛場、小區(qū)和散養(yǎng)戶分別為9．98%、15．99%和11．96%）；環(huán)境性細菌中以停乳鏈球菌（小區(qū)高達10．41%）、沙雷氏菌（小區(qū)高達31．51%）和大腸桿菌（小區(qū)高達8．46%）為主；（2）在傳染性細菌和環(huán)境性細菌的檢出比率中，小區(qū)為最高（分別為18．81%和55．53%），其次是散養(yǎng)戶（分別為17．39%和34．52%），最低的是規(guī)模牛場（分別為13．19%和17．49%）。

奶牛；隱性乳房炎；病原菌；分離鑒定

奶牛乳房炎主要是由于病原微生物侵入奶牛乳腺組織所引起的奶牛乳房炎癥。引起奶牛乳房炎的病原微生物種類繁多，有細菌、真菌、病毒、支原體等，但主要由細菌引起[1～3]。奶牛乳房炎分為臨床型乳房炎和隱性乳房炎，而隱性乳房炎患牛的乳房和乳汁均無肉眼可見變化，需要用特殊試驗才能判定，會給牧場造成嚴重損失。據(jù)世界奶牛協(xié)會統(tǒng)計，世界范圍內(nèi)奶牛乳房炎的發(fā)病率約高達50%，中國奶牛隱性乳房炎的陽性率為46.4%～85.7%[4]。雖然國內(nèi)外的學(xué)者都在積極地尋找有效的辦法來控制奶牛乳房炎，但都未獲得成功。隱性乳房炎具有病因復(fù)雜、隱蔽性強、不易被發(fā)現(xiàn)等特點，應(yīng)及時檢測、及時治療。病原微生物是導(dǎo)致隱性乳房炎的最主要病因，所以及時準確掌握病區(qū)奶牛隱性乳房炎病原菌的種類很關(guān)鍵。本試驗從奶牛場采集隱性乳房炎患牛的奶樣并進行主要病原菌的分離鑒定，旨在獲得本地區(qū)奶牛隱性乳房炎病原菌的系統(tǒng)資料，為指導(dǎo)臨床合理用藥和提高防治效果提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 樣品

采用北京乳房炎試驗（BMT）法，對北京市某郊區(qū)的奶牛規(guī)模養(yǎng)殖場、養(yǎng)殖小區(qū)和部分散養(yǎng)戶的泌乳牛群進行隱性乳房炎檢測，依據(jù)“一個乳區(qū)出現(xiàn)弱陽性+以上者判為陽性”的標準，共采集了128份陽性奶樣。

1．2 主要儀器與試劑

普通瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、5%羊血液瓊脂培養(yǎng)基、細菌生化鑒定管，部分生化試劑自備。

1．3 細菌的培養(yǎng)、分離和鑒定

表1 細菌的培養(yǎng)特性

表2 菌株的生化鑒定

將奶樣分別劃線培養(yǎng)于上述3種培養(yǎng)基上，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48h，觀察、記錄菌落的生長情況，對菌落進行編號。再經(jīng)革蘭氏染色、鏡檢，觀察細菌的染色特性和形態(tài)，初步判定細菌的種類。然后對單個菌落進行克隆培養(yǎng)，生化鑒定。

2 結(jié)果

2．1 分離培養(yǎng)結(jié)果

將奶樣分別接種于3種不同的培養(yǎng)基，根據(jù)細菌的培養(yǎng)特性、菌落形態(tài)、革蘭氏染色特性和細菌的形態(tài)學(xué)觀察，進行初步判定。結(jié)果見表1。

2．2 生化鑒定結(jié)果

對已通過培養(yǎng)特性和形態(tài)學(xué)觀察且初步鑒定的菌株進行生化鑒定。鑒定結(jié)果和細菌檢出率分別見表2、3。

3 討論

據(jù)報道，引起奶牛隱性乳房炎的主要為細菌、真菌、病毒等病原微生物，多達80多種[5]。較常見的有21種，其中細菌14種，真菌及病毒7種。有些病原菌雖經(jīng)常存在于乳房內(nèi)，但不一定引起發(fā)病。

本試驗只進行了細菌分離，其結(jié)果與相關(guān)報道一致[6]。分離的細菌可以分成兩類：一類為環(huán)境致病菌；另一類為傳染性病原菌。前者包括沙雷氏菌、大腸桿菌、停乳鏈球菌等，主要通過牛體、泥土、糞便等傳播。傳染性病原菌包括無乳鏈球菌與金黃色葡萄球菌等，主要通過擠奶過程，如經(jīng)擦洗乳房用的毛巾、水等接觸傳播。因此，保持牛舍內(nèi)外清潔和牛體衛(wèi)生，避免擠奶過程中的交叉感染，是預(yù)防乳房炎的重要措施；同時，及早發(fā)現(xiàn)及時治療，減少傳染源也是很重要的控制手段。

表3 主要細菌的檢出率

傳染性細菌中以金黃色葡萄球菌為主（規(guī)模牛場、小區(qū)和散養(yǎng)戶分別為9.98%、15.99%和11.96%），可以看出，金黃色葡萄球菌仍然是奶牛乳房炎主要的葡萄球菌屬致病菌。環(huán)境性細菌中以停乳鏈球菌（小區(qū)高達10.41%）、沙雷氏菌（小區(qū)高達31.51%）和大腸桿菌為主，這與倪春霞[4]等人的報道是一致的；在傳染性細菌和環(huán)境性細菌的檢出比率中，小區(qū)為最高（18.81%和55.53%），其次是散養(yǎng)戶（分別為17.39%和34.52%），最低的是規(guī)模牛場（分別為13.19%和17.49%），由此可見，規(guī)模場隱性乳房炎奶牛的細菌感染率略低于小區(qū)和散養(yǎng)戶，這與飼養(yǎng)管理因素有關(guān)。

4 結(jié)論

（1）細菌分離鑒定的結(jié)果表明，環(huán)境性細菌和傳染性細菌是該地區(qū)隱性乳房炎的主要病原菌。傳染性細菌中以金黃色葡萄球菌為主；環(huán)境性細菌中以停乳鏈球菌、沙雷氏菌和大腸桿菌為主。

（2）在傳染性細菌和環(huán)境性細菌的檢出比率中，小區(qū)為最高，其次是散養(yǎng)戶，最低的是規(guī)模牛場，由此可見，隱性乳房炎奶牛的細菌感染率，規(guī)模場低于小區(qū)和散養(yǎng)戶。

[1] Kalmus P,Viltrop A,Aasmae B, et al． Occurrence of clinical mastitis in primiparous Estonian dairy cows in different housing conditions[J]． Acta Vet Scand,2006,48(1):21．

[2] Gilbert F B, Fromageau A, Lamoureux J, et al． Evaluation of tandem repeats for MLVA typing of Streptococcus uberis isolated from bovine mastitis[J]．BMC Vet Res,2006(2):33．

[3] 王冬梅,劉磊,王勝利,等．奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗[J]．動物醫(yī)學(xué)進展,2005,26(6):81-83,94．

[4] 倪春霞,蒲萬霞,胡永浩,等． 奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及耐藥性分析[J]．西北農(nóng)業(yè)學(xué)報, 2010,19(2):20-24．

[5] 東秀珠,蔡妙英．常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊[M]．北京:科學(xué)出版2001:77-78．

[6] 劉朝, 王京仁,張成棟,等． 湖北地區(qū)奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定與耐藥性分析[J]．中國奶牛, 2007,7:35-38．

第二屆“牛人“攝影大賽作品 《綠色安達》——王成強 貝因美

S858.23

A

1004-4264（2017）01-0036-03

10.19305/j.cnki.11-3009/s.2017.01.010

2016-08-15

北京市農(nóng)委“菜籃子”工程項目（20140204）；北京市農(nóng)委科技計劃項目（20140146）；北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院院級課題（XY-YF-16-06）；北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院院級課題（XYYF-15-18）。

付靜濤（1970-），男，漢族，碩士研究生，推廣副教授。研究方向為草食動物繁殖技術(shù)及繁殖疾病診治。