紫葉李組織培養(yǎng)快繁技術(shù)的優(yōu)化

劉 帥，周麗艷，杜金友

(1遷安市農(nóng)業(yè)畜牧水產(chǎn)局，河北遷安，064400；2河北科技師范學院生命科技學院)

紫葉李(PrunuscerasiferaEhrh. f.atropupureaRehd.)屬薔薇科李屬，是重要的觀葉觀花觀果植物[1]，目前在冀東地區(qū)常用作風景林及背景樹。紫葉李具有抗較高濃度氯氣的功能，可作為抗大氣污染的綠化植物栽植[2]。紫葉李果實甜美，可鮮食，也可加工后食用。果仁和花瓣均可入藥[3]。此外，紫葉李還具有較強的抗性，株型緊湊，近年來已成為果樹雜交育種重要種質(zhì)資源親本之一[4]。

目前，紫葉李的常規(guī)繁殖方法有播種、扦插、壓條；或采用桃、李、梅等為砧木進行嫁接，但這些繁殖方法生產(chǎn)周期長，成活率低，繁殖系數(shù)不高[5]。隨著植物組織培養(yǎng)技術(shù)的日益成熟并廣泛應(yīng)用[6]，研究者也試圖應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖紫葉李。早在2005年孫在紅等就已報道以紫葉李春季萌生苗嫩枝為外植體探索了腋芽誘導(dǎo)、叢生芽增殖和生根培養(yǎng)基的配比[7]；2008年馬志波等也探討了紫葉李嫩莖分化和生根培養(yǎng)基的配比[8]，但兩者研究結(jié)果不盡相同。

近年來，隨著紫葉李被不斷開發(fā)利用，其快速繁殖也尤顯重要。筆者試圖以帶腋芽的莖段為外植體，探索不同生長調(diào)節(jié)劑以及水解乳蛋白對紫葉李快速繁殖的影響，為紫葉李大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

材料取自河北科技師范學院花卉標本園，選取當年生的、未萌芽的成年紫葉李樹幼嫩枝條作為試驗材料。

1.2 試驗方法

選取腋芽飽滿、無病蟲害的嫩枝，在流水下用毛筆輕輕刷洗，用吸水紙吸干水分，在超凈工作臺上用質(zhì)量濃度為1.0 g/L的升汞水溶液消毒10 min，用無菌水沖洗5～6次，剪取2.5 cm長的腋芽段，接種于不同培養(yǎng)基中。

1.3 培養(yǎng)基

紫葉李莖段離體培養(yǎng)誘導(dǎo)再生植株培養(yǎng)基共有4種：(1)6- BA誘導(dǎo)萌芽- 成芽培養(yǎng)基(表1)；(2)不同激素誘導(dǎo)萌芽- 成芽培養(yǎng)基(表2)；(3)誘導(dǎo)芽增殖培養(yǎng)基(表3)；(4)誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基(表4)。

1.4 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度為26 ℃；光照時間12～14 h/d；光照度1 800～2 000 lx；生根時暗培養(yǎng)。

1.5 統(tǒng)計方法及標準

萌芽率=(萌芽段數(shù)/接種段數(shù))×100%，萌芽標準為芽長>芽寬。

成芽率=(成芽段數(shù)/萌芽段數(shù))×100%，成芽標準為第一葉完全展開。

生根率=(生根數(shù)/接種芽數(shù))×100%

表1 誘導(dǎo)萌芽- 成芽的6- BA質(zhì)量濃度

表2 誘導(dǎo)萌芽- 成芽的激素質(zhì)量濃度

表3 誘導(dǎo)芽增殖的激素質(zhì)量濃度

表4 誘導(dǎo)生根的激素質(zhì)量濃度

2 結(jié)果與分析

2.1 6- BA濃度對紫葉李萌芽- 成芽的影響

6- BA的濃度對紫葉李萌芽率和成芽率有顯著的影響(表5)。6- BA濃度較低時(≤1.0 mg/L)有利于芽的萌發(fā)和形成；當6- BA為1.0 mg/L時，萌芽率達78.26%，成芽率達55.56%，均高于其它處理。6- BA的濃度超過3.0 mg/L不利于芽的萌發(fā)和形成。

表5 不同濃度6- BA對紫葉李萌芽- 成芽的影響

2.2 6- BA與生長素混合使用對誘導(dǎo)紫葉李萌芽- 成芽的影響

6- BA分別與IBA，NAA，IAA混合使用，萌芽率、成芽率間存在差異(表6)。3.0 mg/L 6- BA與1.0 mg/L IAA組合使用最好，萌芽率為97.37%，成芽率為75.68%。6- BA在0.5 mg/L～5.0 mg/L范圍內(nèi)與IBA組合，誘導(dǎo)紫葉李萌芽的效果好于6- BA與NAA組合，說明對于芽的萌發(fā)，生長素IBA比NAA誘導(dǎo)效果好。另外生長素與細胞分裂素的濃度比例對于紫葉李芽的萌發(fā)和形成也很關(guān)鍵。0.5 mg/L 6- BA分別與1.0 mg/L IBA，1.5 mg/L NAA組合較好，萌芽率、成芽率均較高(處理6與處理7，處理8與處理9相比)。

表6 不同培養(yǎng)基中紫葉李萌芽- 成芽情況

2.3 水解乳蛋白對誘導(dǎo)紫葉李萌芽- 成芽的影響

培養(yǎng)基中加入水解乳蛋白(LH)未能起到促進紫葉李芽的萌發(fā)和形成的作用(表6)。處理5與處理6萌芽率、成芽率間達到顯著差異(t=2.10)，這說明500 mg/L LH對紫葉李芽的萌發(fā)、形成有抑制作用。

2.4 外植體部位對誘導(dǎo)紫葉李芽的影響

外植體在枝條上的部位(上部和下部)顯著影響紫葉李芽的萌發(fā)和形成(表7)。所有培養(yǎng)基中，上部莖段的萌芽率和成芽率都高于下部莖段，多數(shù)已達顯著水平(29號)，有的達極顯著水平(28號，30號，32號)。

2.5 生長素對紫葉李生根的影響

將誘導(dǎo)的紫葉李芽接種于7種生根培養(yǎng)基中，進行根的誘導(dǎo)(表8)。結(jié)果表明：木本植物生根一直比較困難，培養(yǎng)20 d后，處理21～26均未生根，培養(yǎng)35 d后，調(diào)查結(jié)果亦無明顯變化，也說明紫葉李在1/2MS培養(yǎng)基上，加IBA、NAA均不能生根。處理27培養(yǎng)基中，培養(yǎng)20 d后生根率達27.27%，說明MS+1.0 mg/L IBA可以促使紫葉李生根。

表7 不同外植體部位紫葉李萌芽- 成芽的情況

表8 不同生長素誘導(dǎo)紫葉李生根的情況

2.7 紫葉李試管苗移栽

將有根的6株小苗移植到經(jīng)嚴格消毒的蛭石上，遮蔭并經(jīng)常噴霧保濕，濕度保持在98%以上，20 d后有4株正常生長。成活的小苗根系生長較慢，見光后葉子逐漸變成紅色。

3 結(jié)論與討論

3.1 植物生長調(diào)節(jié)劑對紫葉李芽萌發(fā)、形成及增殖的影響

本試驗中誘導(dǎo)紫葉李芽萌發(fā)和形成的最佳激素組合是3.0 mg/L 6- BA+1.0 mg/L IAA，明顯高于孫在紅[7]和馬志波的結(jié)果[8]。其萌芽率和成芽率在17個處理中均為最高。相同濃度下，IBA誘導(dǎo)紫葉李萌芽、成芽效果好于NAA。適當濃度的6- BA(1.0 mg/L)單獨使用比與生長素混合使用誘導(dǎo)效果好，這與月季[6]有關(guān)報道一致。誘導(dǎo)紫葉李芽增殖的較好組合是：0.5 mg/L 6- BA+1.0 mg/L IBA。

3.3 植物生長調(diào)節(jié)劑對紫葉李生根的影響

以1/2MS為基本培養(yǎng)基的所有處理均未能誘導(dǎo)紫葉李生根，只有MS+1.0 mg/L IBA誘導(dǎo)出根，但是正如大部分木本植物一樣，生根率也不是很高，只有27.27%。這與孫在紅[7]和馬志波[8]的結(jié)果略有差異。為了紫葉李組織培養(yǎng)快速繁殖，提高其生根率有待進一步的研究。

[1] 王蓮英,朱秀珍,虞佩珍,等.中國名貴花卉鑒賞與栽培[M].合肥:安徽科學技術(shù)出版社,1997.

[2] 江蘇省植物研究所.抵抗和吸收有毒氣體的綠化樹種選擇[G]//湖北水生生物研究所.環(huán)境保護生物監(jiān)測與治理資料匯編.北京:科學出版社,1978:206- 211.

[3] 顧雪梁.中外花語花趣辭典[M].杭州:浙江人民出版社,2000.

[4] 褚孟嫄,班俊.梅、杏、李同工酶比較研究[J].果樹科學,1988,5(4):155- 157.

[5] 陳正華.木本植物組織培養(yǎng)及其應(yīng)用[M].北京：高等教育出版社，1986.

[6] 畢艷娟,高書國,喬亞科，等.植物生長調(diào)節(jié)劑對月季組培萌芽和成芽的影響[J].河北農(nóng)業(yè)技術(shù)師范學院學報,1996,10(4):37- 40.

[7] 孫在紅,夏陽,梁慧敏,等.紫葉李組織培養(yǎng)及快繁體系的建立[J].草原與草坪,2005(1):58- 61.

[8] 馬志波,王恭祎.紫葉李組織培養(yǎng)及其移植成活率研究[J].林業(yè)實用技術(shù),2008(3):6- 8.