陸榮生++韓美麗++楊迪++覃建林++馬躍峰

摘要：以木薯（Manihot esculenta Crantz）品種桂熱-6、桂熱-4試管苗葉片為材料，研究草甘膦對(duì)愈傷組織增殖與分化的影響，以建立抗草甘膦的木薯離體篩選體系。結(jié)果表明，桂熱-6、桂熱-4幼葉愈傷組織誘導(dǎo)與增殖的適宜配方分別為改良B5+2，4-D 0.50～0.75 mg/L、改良B5+2，4-D 0.75 mg/L；愈傷組織分化不定芽的適宜配方分別為改良B5+TDZ 0.75 mg/L、改良B5+TDZ 0.75～1.00 mg/L。愈傷組織增殖過程中，桂熱-6、桂熱-4愈傷死亡率達(dá)到50%左右所需的草甘膦濃度分別為800、600 mg/L；愈傷組織分化過程中，桂熱-6、桂熱-4愈傷組織死亡率達(dá)到50%左右所需的草甘膦濃度分別為600、400 mg/L。在含草甘膦的愈傷組織增殖培養(yǎng)基、愈傷組織分化培養(yǎng)上分二步篩選獲得了桂熱-6木薯抗草甘膦無性系。溫室幼苗噴施草甘膦試驗(yàn)表明，抗性無性系幼苗對(duì)草甘膦的抗性得到增強(qiáng)，研究結(jié)果可為木薯無性系變異育種研究提供參考。

關(guān)健詞：木薯（Manihot esculenta Crantz）；愈傷組織；草甘膦；抗性

中圖分類號(hào)：S533；Q943.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2017）01-0160-06

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.01.041

Screening for Resistant Glyphosate Somaclonal Variation of Cassava to Glyphosate in Vitro

LU Rong-shenga，HAN Mei-lia，YANG Dia，QIAN Jian-linb，MA Yue-fengb

（a.Microbiology Research Institute；b.Institute of Plant Protection， Guangxi Academy of Agriculture Sciences， Nanning 530007，Guangxi，China）

Abstract：For screening resistant somaclonal variation of cassava to Glyphosate in vitro， the study was made to clarify the effects of glyphosate on proliferation and differentiation of callus from plantlet young leaves in cassava（Manihot esculenta Crantz）species Gui Re-6 and Gui Re-4. The optimum induction and proliferation medium of callus were modified B5 medium supplemented with 0.50～0.75 mg/L 2，4-D for leaves strips from Gui Re-6 and 0.75 mg/L 2，4-D for leaves strips from Gui Re-4. The optimum callus differentiation medium were modified B5 medium supplemented with 0.75 mg/L TDZ for callus from Gui Re-6 and 0.75～1.00 mg/L TDZ for callus from Gui Re-4. To achieve 50% callus browning rate during callus proliferation， the concentration of glyphosate in medium should be 800 mg/L for Gui Re-6，and 600 mg/L for Gui Re-4. To get 50% callus browning rate during callus differentiation， the concentration of glyphosate in medium should be 600 mg/L for Gui Re-6，and 400 mg/L for Gui Re-4. The resistance test by spray of glyphosate showed that the resistant seedlings possessed stronger resistance to glyphosate than the control. Gui Re-6 resistance somaclonal variation to glyphosate was screened by two step method in callus proliferation medium and cultivation of callus differentiation. By this experiment，the screening system of resistance somaclonal variation to glyphosate was established in vitro in cassava， and this methods can be used for clone breeding studies.

Key words：cassava（Manihot esculenta Crantz）；callus；glyphosate；resistant

木薯（Manihot esculenta Crantz）是集能源、飼料、食用為一體、在華南地區(qū)大量種植的經(jīng)濟(jì)作物，草害是影響木薯產(chǎn)量的主要因素之一[1]。生產(chǎn)上常采用人工除草與化學(xué)除草二種方式解決雜草為害問題，這二種方式不僅勞動(dòng)力成本高、農(nóng)藥殘留影響環(huán)境，而且效果一般；不同木薯種植地區(qū)及不同生長(zhǎng)時(shí)期雜草群落不同，且經(jīng)常處于動(dòng)態(tài)變化，需要針對(duì)不同地區(qū)與雜草群落推出專一性較強(qiáng)的除草劑，因此除草劑開發(fā)成本較高。廣譜性除草劑草甘膦雖然可以防除大部分雜草，但使用中對(duì)木薯也有一定傷害[2]。選育抗草甘膦木薯品種是解決這一問題的有效途徑之一[3]。

目前，已有關(guān)于利用細(xì)胞無性系培養(yǎng)過程中存在變異性這一特點(diǎn)，通過在培養(yǎng)基中加入選擇壓力的方法定向篩選抗性品種的應(yīng)用報(bào)道，主要集中在篩選提高植物抗病能力、抗鹽能力、抗草甘膦性等抗逆性變異無性系[4，5]。蘇媛等[6]以5個(gè)草莓品種組培苗為試材，以草莓枯萎病菌毒素作為選擇壓力，篩選草莓抗枯萎病突變體，結(jié)果表明，篩選的抗病植株對(duì)枯萎病菌的抗性高于野生型再生植株。裴懷弟等[7]將3個(gè)品種（系）的馬鈴薯試管苗在添加不同濃度NaCl的培養(yǎng)基上直接誘導(dǎo)分化成苗，結(jié)果表明，隨著鹽濃度的增加，3個(gè)品種（系）再生苗的耐鹽能力提高。葉曉青等[8]等研究不同濃度氯化鈉（NaCl）對(duì)百喜草愈傷組織分化和植株再生的影響，得到一批體細(xì)胞耐鹽突變體篩選材料。Zhang等[9]以2個(gè)品種大蒜蒜瓣基部為外植體，以大蒜白腐病病菌粗毒素為篩選因子，離體培養(yǎng)篩選獲得可抗50%粗毒素的大蒜抗病苗。程智慧等[10]以2個(gè)品種蒜瓣基部誘導(dǎo)的愈傷組織為篩選對(duì)象，以大蒜葉枯病菌粗毒素為篩選因子，通過離體分步篩選培養(yǎng)獲得可抗30%粗毒素的抗病苗。張恩讓等[11]在含不同濃度百草枯的培養(yǎng)基上采用直接接種和逐級(jí)培養(yǎng)法，選擇大蒜抗百草枯愈傷組織細(xì)胞系，發(fā)現(xiàn)所用品種在低濃度百草枯脅迫下都有一定的抗性。

目前，鮮見關(guān)于利用離體變異技術(shù)篩選木薯抗草甘膦變異無性系方面的報(bào)道。木薯品種桂熱-6、桂熱-4是廣西近年選育的高產(chǎn)抗病新品種，本研究以這兩個(gè)品種為對(duì)象，探討其愈傷組織誘導(dǎo)與分化條件、測(cè)定愈傷組織在增殖與分化期對(duì)草甘膦的敏感性，從而以草甘膦為選擇壓力，通過一步篩選法與分步篩選法，建立離體篩選木薯抗草甘膦無性系的方法，為抗木薯抗草甘膦突變體的離體篩選奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

木薯品種為桂熱-4、桂熱-6，采用其組培苗進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合對(duì)木薯葉片愈傷組織誘導(dǎo)、增殖、分化不定芽的影響 取20 d苗齡木薯無菌苗頂部嫩葉，切為2～3 mm寬的條帶，接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，暗培養(yǎng)5 d后移入光下培養(yǎng)20 d，調(diào)查愈傷組織誘導(dǎo)率；然后將形成的愈傷組織切下移至愈傷增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)25 d后調(diào)查愈傷增殖率；繼代增殖培養(yǎng)3次后，挑選生長(zhǎng)旺盛、質(zhì)地緊密的愈傷組織繼代于分化培養(yǎng)基上，光下培養(yǎng)25 d，調(diào)查不定芽發(fā)生率。

愈傷組織誘導(dǎo)、增殖試驗(yàn)培養(yǎng)基為改良B5基本培養(yǎng)基添加不同濃度2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）、萘乙酸（NAA）；愈傷分化試驗(yàn)培養(yǎng)基為改良B5基本培養(yǎng)基添加不同濃度玉米素（ZT）、噻二唑苯基脲（TDZ）、6芐基腺嘌呤（6-BA）；生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)添加0.25 mg/L吲哚丁酸（IBA）；培養(yǎng)基中蔗糖30 g/L，pH 5.8。培養(yǎng)條件為溫度（26±2） ℃，光照時(shí)間14 h/10 h，光照度1 800 lx。

愈傷組織誘導(dǎo)率=產(chǎn)生愈傷組織的葉片數(shù)/接種的葉片總數(shù)×100%

愈傷組織增殖率=直徑比原接種愈傷組織塊大0.2 cm以上的愈傷組織塊數(shù)/接種愈傷塊總數(shù)×100%

愈傷組織分化率=產(chǎn)生不定芽的愈傷組織塊數(shù)/接種愈傷塊總數(shù)×100%

愈傷組織死亡率=死亡褐化的愈傷組織塊/接種愈傷塊總數(shù)×100%

1.2.2 愈傷組織增殖與分化階段對(duì)草甘膦的耐受性 分別將0、200、400、600、800、1 000、1 200 mg/L的草甘膦加入愈傷組織增殖與分化培養(yǎng)基中，然后將愈傷組織塊接種于培養(yǎng)基上，每處理35個(gè)外植體，3次重復(fù)，培養(yǎng)條件同“1.2.1”，培養(yǎng)25 d后，調(diào)查愈傷組織增殖生長(zhǎng)、愈傷組織死亡率、愈傷組織不定芽分化情況。

1.2.3 抗病無性系的篩選 采用二步階段篩選法篩選抗草甘膦無性系及再生植株的抗草甘膦能力鑒定。二步階段篩選法：將桂熱-6、桂熱-4 25 d齡的愈傷組織分別培養(yǎng)于含草甘膦800、600 mg/L的增殖培養(yǎng)基中，篩選培養(yǎng)25 d，然后將存活的愈傷組織分別移入含草甘膦600、400 mg/L的分化培養(yǎng)基中選擇培養(yǎng)25 d，調(diào)查抗性不定芽產(chǎn)生數(shù)量。所選的抗性不定芽，在進(jìn)一步擴(kuò)大繁殖后，切下2～3 cm長(zhǎng)的嫩枝，移入生根培養(yǎng)基中，所得抗性植株移入溫室種植。

1.2.4 抗性無性系抗草甘膦能力測(cè)定 抗草甘膦植株室內(nèi)離體抗性測(cè)定：將抗草甘膦無性系試管苗與對(duì)照試管苗的葉片無菌條件下切下，接種于含草甘膦600 mg/L的分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)7 d，觀察葉片變化；抗草甘膦植株溫室抗性測(cè)定：選取溫室2個(gè)月苗齡的大小一致的抗性植株和對(duì)照植株各5植株，噴施濃度為0.5%的草甘膦藥液，施藥7 d后測(cè)試其抗性。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合對(duì)木薯愈傷組織誘導(dǎo)與增殖的影響

將切下的木薯無菌苗幼葉接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)7～10 d后，觀察到外植體切口出現(xiàn)乳白色愈傷組織，培養(yǎng)25 d時(shí)產(chǎn)生愈傷組織的外植體數(shù)量達(dá)到最大，統(tǒng)計(jì)各處理愈傷組織誘導(dǎo)率，然后將愈傷組織塊切下移入到新鮮培養(yǎng)基上，25 d后統(tǒng)計(jì)愈傷組織增殖情況，結(jié)果見表1。

從表1可以看出，2個(gè)木薯品種添加不同濃度2，4-D，愈傷組織誘導(dǎo)率與增殖率總體均高于添加NAA的各處理。添加2，4-D的情況下，2個(gè)品種達(dá)最大愈傷誘導(dǎo)率與增殖率所需的2，4-D濃度相同。

木薯品種桂熱-6葉片在添加2，4-D的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，2，4-D濃度為0.50、0.75、1.00 mg/L處理下愈傷誘導(dǎo)率分別達(dá)到87.5%、90.4%、88.7%，均顯著高于對(duì)照和其他處理，三者之間無顯著差異。所誘導(dǎo)出的愈傷組織在愈傷增殖培養(yǎng)中，2，4-D濃度0.50、0.75 mg/L處理愈傷增殖率較高，分別達(dá)73.5%、75.9%，顯著高于對(duì)照和其他處理，二者之間無顯著差異。2，4-D為1.00、1.25 mg/L處理雖然愈傷誘導(dǎo)率較高，但繼代后愈傷增殖率下降。

木薯品種桂熱-4葉片在添加2，4-D的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，2，4-D濃度0.75 mg/L的處理愈傷誘導(dǎo)率為64.4%，顯著高于對(duì)照和其他處理。所誘導(dǎo)出的愈傷組織轉(zhuǎn)入相應(yīng)培養(yǎng)基繼代后，愈傷增殖率達(dá)45.8%，顯著高于對(duì)照及2，4-D濃度0.50 mg/L之處的其他處理。

綜上所述，木薯品種桂熱-6葉片愈傷組織誘導(dǎo)、增殖的最適2，4-D濃度為0.50～0.75 mg/L，桂熱-4葉片愈傷組織誘導(dǎo)、增殖的最適2，4-D濃度為0.75 mg/L。

2.2 培養(yǎng)基中不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組成對(duì)愈傷組織分化出芽的影響

愈傷組織移入分化培養(yǎng)基中，光下培養(yǎng)15 d左右，可觀察到愈傷表面有綠色芽點(diǎn)出現(xiàn)，培養(yǎng)至20～25 d，可以觀察到綠芽大量出現(xiàn)。含ZT與TDZ的分化培養(yǎng)基均有愈傷分化不定芽的現(xiàn)象發(fā)生，但愈傷分化率因激素濃度與品種而有所不同，結(jié)果見表2。

從表2可以看出，桂熱-6愈傷組織在添加不同濃度ZT的分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，ZT為0.75、1.00 mg/L時(shí)愈傷分化率分別為64.6%、61.7%，顯著高于對(duì)照及其他處理，二者之間無顯著差異。桂熱-4愈傷組織在添加不同濃度ZT的分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，ZT為1.25 mg/L時(shí)愈傷分化率為57.7%，顯著高于對(duì)照及其他處理。2個(gè)品種在ZT 1.25 mg/L時(shí)芽均粗短，大多數(shù)不能正常發(fā)育。

在添加TDZ的培養(yǎng)基中，2個(gè)品種愈傷組織不定芽分化率總體高于相應(yīng)添加ZT的各處理。對(duì)于品種桂熱-6，添加TDZ 1.00 mg/L時(shí)愈傷分化率達(dá)84.5%，顯著高于對(duì)照及其他處理。桂熱-4添加TDZ 0.75、1.00、1.25 mg/L時(shí)愈傷分化率在45.3%～51.0%之間，顯著高于對(duì)照及其他處理，三者之間差異不顯著，TDZ 1.25 mg/L處理所誘導(dǎo)的芽粗短，后期難以正常發(fā)育。

綜上所述，品種桂熱-6愈傷分化培養(yǎng)基以添加TDZ 1.00 mg/L為宜，桂熱-4愈傷分化培養(yǎng)基以添加TDZ 0.75～1.00 mg/L為宜。

2.3 草甘膦對(duì)木薯愈傷組織增長(zhǎng)的影響與抗性選擇壓力的篩選

將愈傷組織接種在添加不同濃度草甘膦的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，各處理愈傷增殖率呈不同程度下降，大量愈傷組織褐化死亡，所存活的愈傷組織形態(tài)上變化不大，但色澤變成深灰色。不同濃度草甘膦對(duì)愈傷組織增殖率與死亡率影響不同，結(jié)果見圖1、圖2。

從圖1可以看出，在低濃度草甘膦下，2個(gè)木薯品種愈傷組織對(duì)草甘膦均有一定的抗性，當(dāng)草甘膦濃度較高時(shí)，這種抗性才消失。培養(yǎng)基中草甘膦濃度為200 mg/L時(shí)，桂熱-6愈傷組織增殖率有小幅下降，有輕微褐化發(fā)生；之后隨著草甘膦濃度的升高，愈傷組織增殖率不斷下降，伴隨著愈傷死亡率不斷上升。當(dāng)草甘膦濃度為800 mg/L時(shí)，愈傷誘組織增殖率降為6.6%，愈傷死亡率達(dá)53.2%；草甘膦濃度為1 000 mg/L時(shí)，愈傷組織增殖率為0，愈傷組織死亡率較高。

與桂熱-6相比，桂熱-4對(duì)草甘膦的加入更為敏感。從圖2可以看出，草甘膦濃度為200 mg/L時(shí)，其愈傷組織死亡率達(dá)到50.0%，愈傷組織增殖率只有30.86%；草甘膦濃度為600 mg/L時(shí)，愈傷死亡率達(dá)到57.9%，愈傷組織增殖率只有3.1%；草甘膦濃度為800 mg/L時(shí)，其愈傷組織死亡率為100%，愈傷組織增殖率為0。

因此，以愈傷組織死亡率達(dá)到50%左右為抗性選擇劑的參考標(biāo)準(zhǔn)，以木薯品種桂熱-6、桂熱-4愈傷組織為對(duì)象進(jìn)行抗草甘膦無性系選擇中，草甘膦做為抗性選擇劑濃度分別為800 mg/L與600 mg/L時(shí)較為適宜。

2.4 草甘膦對(duì)木薯愈傷組織分化不定芽的影響與抗性選擇壓力的篩選

愈傷組織在添加不同濃度草甘膦的分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)25 d時(shí)，不同濃度草甘膦對(duì)愈傷組織分化率與死亡率影響不同，結(jié)果見圖3、圖4。

從圖3可以看出，木薯品種桂熱-6愈傷組織分化率在草甘膦濃度為400 mg/L降為30.4%，降幅較大，愈傷組織死亡率達(dá)39.5%；草甘膦濃度為600 mg/L時(shí)，愈傷組織分化率僅7.9%，愈傷組織死亡率為58.7%；當(dāng)草甘膦濃度為800 mg/L時(shí)，愈傷組織分化率為0，愈傷組織死亡率為100%。

木薯品種桂熱-4愈傷組織在培養(yǎng)基草甘膦濃度為200 mg/L時(shí)，愈傷組織分化率達(dá)到28.3%，愈傷組織死亡率只有40.3%；草甘膦濃度為400 mg/L時(shí)，愈傷組織死亡率達(dá)52.3%，愈傷組織分化率只有4.5%；草甘膦濃度為600 mg/L時(shí)，愈傷組織死亡率達(dá)96.9%，愈傷組織分化率為0。

因此，以愈傷組織死亡率達(dá)到50%左右為抗性選擇劑的參考標(biāo)準(zhǔn)，木薯品種桂熱-6、桂熱-4愈傷組織分化培養(yǎng)階段，草甘膦作為抗性選擇劑量濃度分別為600 mg/L與400 mg/L較為適宜。

2.5 二步階段篩選法篩選抗草甘膦無性系及再生植株

在木薯品種桂熱-6、桂熱-4愈傷增殖培養(yǎng)基中分別加入800、600 mg/L草甘膦，進(jìn)行抗草甘膦愈傷組織篩選。將2個(gè)品種選出的抗性愈傷組織移入愈傷分化培養(yǎng)基中（桂熱-6、桂熱-4愈傷分化培養(yǎng)基中分別加入600、400 mg/L草甘膦），進(jìn)行抗草甘膦不定芽織篩選，結(jié)果見表3。

從表3可以看出，采用二步階段篩選法，桂熱-6獲得了11個(gè)抗草甘膦抗性無性系，其中3個(gè)可以在含草甘膦的培養(yǎng)基上正常生根；桂熱-4獲得了5個(gè)抗草甘膦抗性無性系，但是均不能在含草甘膦的培養(yǎng)基上產(chǎn)生生根。

圖5為薯品種桂熱-6愈傷組織誘導(dǎo)至生根過程，圖6為添加草甘膦的情況下抗性愈傷組織篩選與抗性芽產(chǎn)生過程。

抗草甘膦植株室內(nèi)離體抗性測(cè)定表明，抗性植株葉片在含600 mg/L草甘膦的分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)7 d，葉片無藥害癥狀，而對(duì)照植株葉片均變黃（圖7）；抗草甘膦植株溫室抗性測(cè)定表明，噴草甘膦7 d后，對(duì)照植株葉片發(fā)黃枯萎，而抗性植株無明顯的藥害癥狀（圖8）。

3 小結(jié)與討論

生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類與濃度是愈傷組織誘導(dǎo)、增殖、分化成功與否的關(guān)鍵因素。2，4-D與NAA二種生長(zhǎng)素對(duì)木薯愈傷組織誘導(dǎo)與增殖效果比較表明，2，4-D對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)效果高于NAA，且低濃度2，4-D所誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織主要為緊密型愈傷，易于在繼代后增殖；添加NAA的培養(yǎng)基中所誘導(dǎo)出的愈傷組織多為松散型愈傷，繼代培養(yǎng)后褐化死亡較多，未褐化的愈傷增殖率也很低。研究認(rèn)為生長(zhǎng)素所誘導(dǎo)的愈傷組織類型分為二類：緊密型與松散型，緊密型愈傷新鮮，容易分化出不定芽；松散型愈傷則在繼代中易于死亡，且難于直接分化出不定芽[12，13]，本研究結(jié)果也證實(shí)了這一現(xiàn)象。

TDZ是一種具有類似腺嘌呤類細(xì)胞分裂素活性的新型植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，已應(yīng)用于植物組織培養(yǎng)[14，15]，但在木薯中鮮見報(bào)道。在本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，一定濃度TDZ對(duì)木薯品種愈傷組織分化的效果均高于ZT，這說明對(duì)于木薯這種愈傷組織難于分化產(chǎn)生不定芽的木本植物，采用活性強(qiáng)的細(xì)胞分裂素能夠分化產(chǎn)生不定芽，這可能與TDZ對(duì)于植物傷口愈合反應(yīng)與細(xì)胞的恢復(fù)性生長(zhǎng)有一定幫助，可以降低愈傷組織繼代切割產(chǎn)生的褐化物有關(guān)[16，17]，由于褐化物減少，愈傷組織能夠正常生長(zhǎng)并分化不定芽。

植物材料在長(zhǎng)期組織培養(yǎng)過程中存在一定頻率的體細(xì)胞無性系變異，利用這一特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中添加目標(biāo)物理或化學(xué)物質(zhì)作為選擇壓力，通過篩選，可獲得抗性無性系。本試驗(yàn)研究表明，愈傷組織對(duì)草甘膦的敏感性與木薯基因型及愈傷組織發(fā)育階段有關(guān)，所用木薯品種桂熱-6對(duì)草甘膦的耐受水平高于品種桂熱-4，同時(shí)，2個(gè)品種都表現(xiàn)為愈傷組織增殖階段對(duì)草甘膦抗性高于愈傷分化階段，其中木薯品種桂熱-6愈傷組織增殖、愈傷分化階段對(duì)草甘膦的半致死劑量分別為800、600 mg/L；木薯品種桂熱-4愈傷組織增殖、愈傷分化培養(yǎng)階段，對(duì)草甘膦的半致死劑量分別為600、400 mg/L。王延峰等[18]在利用胚性愈傷組織篩選抗除草劑綠磺隆突變體的研究中發(fā)現(xiàn)，在高濃度綠磺隆壓力下選出的抗性愈傷組織，在同樣的選擇壓力下不能分化成苗；騫宇[19]發(fā)現(xiàn)除草劑Basta對(duì)油菜愈傷組織的分化比對(duì)愈傷組織的生長(zhǎng)具有更強(qiáng)的抑制作用，這與本研究結(jié)論相似。

抗性植株的篩選有一步篩選法與分階段篩選法。一步篩選法因?yàn)橹缓Y選了一次，沒有考慮到植物組織不同生長(zhǎng)階段對(duì)選擇壓力的抗性不同，因此效果較差。分階段篩選法對(duì)不同生長(zhǎng)階段，有針對(duì)性地采用不同的選擇壓力，這樣可以有效地得到抗性植株，同時(shí)避免了假抗性植株的大量產(chǎn)生。本試驗(yàn)所獲得的抗性植株在噴施草甘膦后能夠存活，說明本試驗(yàn)所用的方法對(duì)抗性植株篩選是有效的。

綜上所述，通過研究確定了草甘膦對(duì)木薯愈傷組織不同發(fā)育階段的影響，建立了以草甘膦作為選擇壓力的木薯離體篩選體系，并得到了抗草甘膦的3個(gè)無性系，其抗性有待大田試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。研究結(jié)果可為細(xì)胞無性系變異培育木薯優(yōu)良無性系提供依據(jù)。

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