張艷菊，管 軍，戴紅艷，邢明清

（青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山東 青島 266000）

?實(shí)驗(yàn)研究?

Periostin在糖尿病乳鼠心肌組織中表達(dá)的改變及纈沙坦對其影響探討

張艷菊，管 軍，戴紅艷，邢明清

（青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山東 青島 266000）

目的對Periostin在糖尿病乳鼠心肌組織中表達(dá)的改變及纈沙坦對其所產(chǎn)生的影響進(jìn)行分析。方法建立糖尿病性心肌病乳鼠模型，將該模型中的樣本分為纈沙坦干預(yù)組和未治療組兩組，另選Wistar乳鼠作為對照組，穩(wěn)重心臟標(biāo)本，并通常Masson三色染色以及HE染色對纈沙坦干預(yù)組、DCM模型組以及對照組的心肌細(xì)胞狀態(tài)。結(jié)果相比于對照組，DCM模型組細(xì)胞核大小不規(guī)則、心肌細(xì)胞排列紊亂，P＜0．05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論P(yáng)eriostin可能在糖尿病心肌病的心肌間質(zhì)纖維化與心臟重構(gòu)方面發(fā)揮作用。

纈沙坦；乳鼠心肌組織；Periostin

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

選取60只健康Wistar乳鼠，體重在180 g～220 g之間。

1.2 儀器設(shè)備

本次實(shí)驗(yàn)所選取的設(shè)備包含低溫高速離心機(jī)、微量移液器、病理切片機(jī)、玻片烘干機(jī)、架盤藥物天平、轉(zhuǎn)移電泳槽以及轉(zhuǎn)移電泳儀等。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

1.3.1 動物模型所用試劑

本次實(shí)驗(yàn)所選取的實(shí)驗(yàn)試劑包含鏈脲佐菌素粉劑、檸檬酸緩沖液以及纈沙坦膠囊等。

1.3.2 蘇木精-伊紅

本次實(shí)驗(yàn)所配置的Harris蘇木素溶液中包含中性樹膠、100%乙醇、90%乙醇以及70%乙醇等。

1.3.3 Masson三色染色試劑

本次實(shí)驗(yàn)所需要的Masson三色染色劑包含醋酸水溶液、苯胺藍(lán)染色液、氨水水溶液、三氯化鐵水溶液等。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 構(gòu)建DCM乳鼠模型

本次實(shí)驗(yàn)所選取的60只研究樣本均以標(biāo)準(zhǔn)乳鼠飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，將溫度與溫度水平調(diào)整至適宜的范圍內(nèi)。經(jīng)過1周的喂養(yǎng)后，將其分為兩組，將10只對照組以及50只DCM模型組，經(jīng)過12 h的禁食處理后一次性腹腔注射STZ溶液60 mg/kg，對照且注射體積相同的檸檬酸緩沖液。乳鼠糖尿病依照以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行確診：隨機(jī)血糖達(dá)到16.7 mmol/L以上，空腹血糖達(dá)到11.1 mmol／L以上。41只造模成功的實(shí)驗(yàn)樣本則納入藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn)范圍，將其中的20只標(biāo)記為纈沙坦干預(yù)組，另外21只標(biāo)記為DCM模型組，對其進(jìn)行灌胃處理。以周為時(shí)間單位測量兩組樣本的血糖水平以及體質(zhì)量，對其尿量變化、進(jìn)食量以及生長情況等方面進(jìn)行觀察。

1.4.2 取材及處理

在實(shí)驗(yàn)研究開展至第16周后對全部研究樣本進(jìn)行麻醉處理，稱重樣本心臟，再剪掉左右心房，完成沖洗處理后再將水分吸干，測量左心室重量，計(jì)算左心系數(shù)比，根據(jù)計(jì)算結(jié)果確定心室肥厚水平；利用濃度為10%的甲醛溶液將樣本浸泡起來，將剩余的樣本材料冷藏起來備用。

1.4.3 病理學(xué)檢測

取出左心室標(biāo)本，對其進(jìn)行脫水處理，用石蠟包塊后再切成片狀，完成烘干處理后備用。用無水乙醇將切片漂洗5分鐘，依次利用濃度為95%，80%，70%的乙醇溶液分別浸泡3分鐘，再利用蒸餾水以及PBS緩沖液進(jìn)行最后的漂洗。

利用Masson三色染色和蘇木素-伊紅染色對切片樣本進(jìn)行染色處理。

利用光鏡對心肌細(xì)胞的形態(tài)分布、膠原含量以及心肌細(xì)胞進(jìn)行觀察。

1.4.4 免疫組化檢測

利用二甲苯溶液對石蠟切片進(jìn)行脫蠟處理；消除樣本過氧化物酶活性，將樣本于氧化氫酶溶液浸泡，再利用蒸餾水對其進(jìn)行沖洗；滴加櫞酸鈉溶液，加熱三分鐘后再自然冷卻，再浸泡于PBS緩沖液中反復(fù)3次，每次3 min，進(jìn)行抗原修復(fù)處理；于切片上滴加胎牛血清，孵育20 min，并將其余溶甩出；再將材料進(jìn)行二甲苯透明以及梯度酒精脫水處理，完成樹膠封片處理后再對其進(jìn)行觀察。

2 結(jié) 果

2.1 實(shí)驗(yàn)樣本情況

乳鼠樣本在實(shí)驗(yàn)過程中可能會持續(xù)處于多食、多飲、高血糖狀態(tài)，出現(xiàn)感染、爛尾、皮毛暗淡以及體征明顯減輕等方面的癥狀。利用纈沙坦對其進(jìn)行干預(yù)治療，能夠有效改善上述癥狀，相比于DCM模型組，實(shí)驗(yàn)樣本的狀態(tài)更加良好。

對照組樣本皮毛有光澤、反應(yīng)靈敏并且精神狀態(tài)良好。

DCM造模組樣本在STZ注射環(huán)節(jié)中出現(xiàn)8例死亡現(xiàn)象，造成這種現(xiàn)象的原因可能與糖尿病酮癥酸以及感染中毒有關(guān)。其中不符合成模標(biāo)準(zhǔn)但血糖正常，剔除。共有21只DCM模型組樣本以及10只對照組樣本，20只纈沙坦治療組樣本納入到后續(xù)實(shí)驗(yàn)中。

2.2 血糖監(jiān)測

實(shí)驗(yàn)前空白對照組平均空腹血糖（6.17士0.71）、DCM模型組（7.13士0.50）、纈沙坦組（6.93士0.43）；

實(shí)驗(yàn)后1周末空白對照組平均空腹血糖（7.47士1.59）、DCM模型組（25.33士2.03）、纈沙坦組（29.50士1.53）；

實(shí)驗(yàn)后4周末空白對照組平均空腹血糖（7.20士0.46）、DCM模型組（26.60士2.58）、纈沙坦組（27.80士0.46）；

實(shí)驗(yàn)后8周末空白對照組平均空腹血糖（7.57士0.52）、DCM模型組（29.51士1.53）、纈沙坦組（24.13士0.78）。

3 討 論

經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，相比于對照組，DCM模型組細(xì)胞核大小不規(guī)則、心肌細(xì)胞排列紊亂，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。綜上所述，Periostin可能在糖尿病心肌病的心肌間質(zhì)纖維化與心臟重構(gòu)方面發(fā)揮作用，實(shí)驗(yàn)價(jià)值值得推廣。

[1] 劉文旗.Periostin在糖尿病乳鼠心肌組織中表達(dá)的改變及纈沙坦對其影響[D].青島大學(xué),2015,03(03):27-28.

[2] 趙婷婷.纈沙坦對糖尿病乳鼠腦組織AGE-RAGE、氧化應(yīng)激及內(nèi)皮功能的影響[D].山東大學(xué),2007,05(04):37-38.

本文編輯：李 豆

R587．1

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ISSN．2095-8242．2017．13．2391．02