吳秋波　閆寧環(huán)　秦潤梅

摘要：選取陜西渭南合陽縣引種栽培的北冰紅葡萄，分析了北冰紅葡萄子粉所含的主要活性化學(xué)成分。結(jié)果表明，北冰紅葡萄子粉中總酚含量為49.68 mg/g；原花青素含量為105.67 mg/g；單寧含量為32.04 mg/L；所含18種主要單體酚按含量高低分別為蘆丁、表兒茶素、水楊酸、槲皮素、桔皮素、桑色素、阿魏酸、香豆酸、白藜蘆醇、香草酸、沒食子酸、綠原酸、香豆素、山奈酸、兒茶素、安息香酸、咖啡酸、丁香酸。

關(guān)鍵詞：北冰紅；葡萄子粉；活性成分；陜西渭南

中圖分類號：S663.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2017）04-0731-02

葡萄子是葡萄加工的下腳料，含有豐富的酚類化合物。研究表明，在眾多的植物多酚中，葡萄多酚抗氧化清除自由基的能力較強(qiáng)，其抗氧化能力為維生素E的5倍、維生素C的20倍。葡萄多酚主要存在于葡萄子和葡萄皮中，果皮中多酚含量可達(dá)25%～50%，種子中則可達(dá)50%～70%[1-3]。酚是所有的酚類物質(zhì)，包括多酚（Polyphenol）和單體酚。多酚是指一個苯環(huán)上含有2個以上（包括2個）羥基的物質(zhì)，植物多酚又名植物單寧，是不同聚合度的黃烷-3-醇聚合物的混合物，又叫單寧酸、鞣酸，主要是一些引起澀味的的多酚類物質(zhì)[4]。原花青素又名縮合單寧，是由不同數(shù)量的兒茶素、表兒茶素沒食子酸縮合而成[5]。

本試驗選用的材料為陜西渭南合陽縣引種栽培的北冰紅葡萄品種，北冰紅是山葡萄的一種。山葡萄是葡萄科葡萄屬落葉藤本植物，屬于東亞葡萄種群的野生種，原產(chǎn)于中國東北、華北及朝鮮、俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)，是葡萄屬中較耐寒的品種，也是東北地區(qū)釀造葡萄酒的主要原料[6，8]。對陜西地區(qū)北冰紅葡萄子的活性成分進(jìn)行了分析，旨在考察該地區(qū)引種的山葡萄活性成分，使葡萄子得到充分利用，為北冰紅葡萄子的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 材料 陜西渭南合陽縣種植的北冰紅葡萄釀酒后下腳料。

1.1.2 試劑 20%碳酸鈉、0.5%酚母液、福林-消卡試劑、0.04%甲基纖維素溶液、飽和硫酸銨溶液、兒茶素。

1.1.3 儀器 KQ-200VDE型雙頻數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；Waters2695型液相色譜儀，Waters公司；UV-2100型紫外/可見分光光度儀、RE52-92型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；HH-42型快速恒溫數(shù)顯水箱，江蘇省醫(yī)療器械廠；離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱等。

1.2 試驗方法

1.2.1 提取方法 研究表明，使用超微粉碎技術(shù)比普通粉碎提取的多酚要高，真空干燥葡萄子粉的多酚和原花青素提取率均有一定程度提高。使用液氮冷凍粉碎結(jié)合凍干機(jī)凍干粉碎葡萄子，使用鹽酸甲醇溶液30 ℃、40 kW功率下超聲提取30 min的提取方法提取葡萄子中多酚物質(zhì)。-80 ℃冷凍葡萄50粒，立即剝?nèi)∑咸哑?，液氮冷凍粉碎成粉末裝于培養(yǎng)皿中，在凍干機(jī)中凍干24 h，取出裝于自封袋中，放置于-80 ℃中。提取時稱取1 g干粉于50 mL離心管（離心管要用黑膠帶或錫箔紙包裹），加入20 mL鹽酸甲醇溶液（60%甲醇、0.1%鹽酸）料液比1∶20，于超聲提取器中水溫30 ℃，40 kW下提取30 min，4 ℃下10 000 r/min離心10 min，收集上清液于絲口瓶中。然后在沉淀物中加入20 mL鹽酸甲醇重復(fù)提取2次，合并3次所有上清液，搖勻，并儲存于-80 ℃中。

1.2.2 測定方法

1）總酚測定。建立福林-肖卡法標(biāo)準(zhǔn)曲線[7]。吸取一定體積葡萄子粉提取液，按標(biāo)線制作方法加入各試劑，定容至10 mL，20 ℃避光靜置2 h后，765 nm處測定吸光度。

2）原花青素測定。繪制吸光度—原花青素濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線[7]。準(zhǔn)確稱取干燥后的葡萄子超微粉樣品0.5 g，索氏提取法石油醚去除粗脂肪，置陰涼通風(fēng)處揮盡樣品中的石油醚。加甲醇150 mL超聲波振蕩提取30 min，重復(fù)2次，混合提取液得到樣品溶液。根據(jù)原花青素的含量，用甲醇稀釋至合適濃度，吸取1.0 mL測定吸光度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算含量。

3）單寧測定。建立甲基纖維素沉淀法（MCP法）標(biāo)準(zhǔn)曲線。在10 mL離心管中加入一定體積待測樣品，樣品組加入3 mL甲基纖維素溶液，上下翻轉(zhuǎn)數(shù)次后靜置2～3 min，加入2 mL飽和（NH4）2SO4溶液，去離子水定容到10 mL。室溫下靜置10 min后1 800 r/min離心5 min，280 nm測定吸光度，以蒸餾水為空白。

4）單體酚測定。提取條件：Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相A液為水∶乙酸（98∶2），流動相B液為乙腈，梯度洗脫，流速為1.0 mL/min，檢測波長為280 nm，柱溫為30 ℃，檢測時間為80 min，進(jìn)樣量為10 μL。

提取液經(jīng)0.45 μm膜過濾；流動相經(jīng)0.45 μm膜過濾、超聲波脫氣。將經(jīng)過前處理的樣品在確定的色譜條件下進(jìn)樣，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時間定性，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 總酚測定

由測定結(jié)果可知，葡萄子粉中的總酚含量為49.68 mg/g。釀酒后的葡萄子中多酚含量大約占2%，1 g葡萄子中則大約含20 mg多酚。由表1可以推出，標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.001x+0.018，R2=0.996。

2.2 原花青素測定

由測定結(jié)果可知，葡萄子粉中原花青素的含量為105.67 mg/g。

2.3 單寧測定

由測定結(jié)果可知，葡萄子粉中單寧含量為32.04 mg/L，單寧成分溶出量較少，由于單寧是多酚類物質(zhì)，部分氧化會使提取量降低。由表2可以推出，其標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.010x+0.111，R2=0.985。

2.4 單體酚測定

對北冰紅葡萄子粉的單體酚檢測顯示有18中單體酚含量較高，其色譜圖見圖1，具體種類及濃度見表3。結(jié)果（表3）表明，葡萄子粉中所含18種主要單體酚按含量濃度高低分別為蘆丁、表兒茶素、水楊酸、槲皮素、桔皮素、桑色素、阿魏酸、香豆酸、白藜蘆醇、香草酸、沒食子酸、綠原酸、香豆素、山奈酸、兒茶素、安息香酸、咖啡酸、丁香酸。

3 小結(jié)

本研究中測得北冰紅葡萄子粉中總酚含量為49.68 mg/g、原花青素的含量為105.67 mg/g、單寧含量為32.04 mg/L。18種主要單體酚按含量高低分別為蘆丁、表兒茶素、水楊酸、槲皮素、桔皮素、桑色素、阿魏酸、香豆酸、白藜蘆醇、香草酸、沒食子酸、綠原酸、香豆素、山奈酸、兒茶素、安息香酸、咖啡酸、丁香酸。

陜西渭南地區(qū)引種的北冰紅葡萄加工副產(chǎn)物葡萄子含總酚、原花青素、單寧及大量豐富的單體酚等成分。這些成分具有很強(qiáng)的活性，在藥品、保健品、飼料、添加劑等領(lǐng)域，可以進(jìn)一步充分開發(fā)利用。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李 華，王蔚新，袁春龍.葡萄籽多酚提取物的提取工藝研究[J].食品研究與開發(fā)，2005，26（6）：69-72.

[2] 王倩倩.葡萄籽多酚的超聲波輔助提取技術(shù)[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（6）：436-438.

[3] 吳嘉慧.葡萄籽超微粉面膜活性及安全性評價[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報，2012，21（6）：163-168.

[4] 許申鴻，杭 瑚，郝曉麗.葡萄籽化學(xué)成分分析及其抗氧化性質(zhì)的研究[J].食品工業(yè)科技，2000，21（2）：18-20.

[5] 朱靖蓉，王忠民，李瑾瑜，等.葡萄籽原花青素的分離純化及其抗氧化活性研究[J].中國食物與營養(yǎng)，2007（4）：34-37.

[6] 南海龍，周 巖，楊玉平，等.北冰紅山葡萄冰葡萄酒釀造工藝的研究[J].釀酒科技，2014（5）：36-38.

[7] 肖付才，李 華，王 華，等.葡萄籽超微粉中多酚成分的檢測[J].食品科技，2007（6）：250-253.

[8] 王 軍，葛玉香，包怡紅.東北山葡萄品種特性比較[J].東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報，2004，32（1）：29-31.