安鳳穎　張儒令　陶菡

摘要 為建立銅仁市地理標(biāo)志特色農(nóng)產(chǎn)品銅仁珍珠花生有機(jī)氯農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法，2016年對(duì)銅仁珍珠花生中5種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法進(jìn)行探索。珍珠花生樣品經(jīng)粉碎后經(jīng)乙腈液液提取、濃縮、凈化，采用氣相色譜法-ECD檢測(cè)器檢測(cè)。結(jié)果表明：5種有機(jī)氯類農(nóng)藥添加濃度為0.005～5.000 mg/kg時(shí)，加標(biāo)回收率為89.61%～107.03%，RSD為3.29%～20.03%。方法的添加回收率數(shù)據(jù)及RSD數(shù)據(jù)說明本試驗(yàn)方法的準(zhǔn)確度、精密度均達(dá)到農(nóng)藥殘留檢測(cè)的要求。

關(guān)鍵詞 珍珠花生；氣相色譜法；有機(jī)氯農(nóng)藥；殘留；貴州銅仁

中圖分類號(hào) TS207.5+3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2017）03-0109-02

銅仁珍珠花生是貴州珍寶，2015年獲得農(nóng)產(chǎn)品地理標(biāo)志保護(hù)。產(chǎn)自梵凈山區(qū)的銅仁珍珠花生，顆粒小巧圓潤(rùn)、色澤紅亮、味香濃郁，是歷代皇家貢品。1991年上市貿(mào)易的花生達(dá)3 902 t，2015年達(dá)34 300 t，成為銅仁市出口農(nóng)副產(chǎn)品中出口量較多的產(chǎn)品[1]。因此，銅仁珍珠花生中農(nóng)藥殘留量檢測(cè)對(duì)于保障人們飲食健康及銅仁市花生進(jìn)出口貿(mào)易具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 主要儀器。氣相色譜儀7890A，安捷倫科技（中國(guó)）有限公司；電子天平：FA/JA系列，上海越平科學(xué)儀器有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：RE-522AA，上海亞榮生化儀器廠；循環(huán)水式真空泵：SHZ-D （Ⅲ），上海亞榮生化儀器廠；調(diào)速多用振蕩器：HY-4型，上海浦東物理光學(xué)儀器廠；氮吹儀：HP-5016SY，上海濟(jì)成分析儀器有限公司；阿修羅系列超純水機(jī)：AXLC1815-2，阿修羅科技發(fā)展有限公司；渦旋混合器：QL-901，江蘇海門市麒麟醫(yī)用儀器廠；燒杯、離心管、漏斗、滴管等分析常用玻璃儀器。

1.1.2 花生樣品。2016年在碧江區(qū)12個(gè)村抽樣74個(gè)珍珠花生樣品，即隨機(jī)選取農(nóng)戶進(jìn)行購(gòu)買。樣品進(jìn)行日光曬干，測(cè)定其水分含量。

1.2 提取劑選擇

液液萃取法應(yīng)用最為廣泛，且成本低，提取效果良好。采用5種試劑（乙腈、甲醇、二氯甲烷、丙酮-正己烷、丙酮-石油醚）作為提取劑，進(jìn)行優(yōu)化。5種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留萃取中平均回收率：乙腈>二氯甲烷>丙酮-正己烷>丙酮-石油醚>甲醇；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差平均值：丙酮-石油醚>丙酮-正己烷>二氯甲烷>乙腈。選擇乙腈作為銅仁珍珠花生中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的提取劑，平均回收率為100.15%，平均RSD為7.90%。

1.3 樣品前處理

樣品粉碎機(jī)粉碎均勻，電子天平稱取10 g，加入50 mL乙腈提取液，組織勻漿3 min，加入1～3 g NaCl充分震蕩，靜置30 min以上（發(fā)生乳化現(xiàn)象可用離心機(jī)離心5～10 min），吸取上層清液10 mL入50 mL燒杯中，80 ℃恒溫水浴通氮?dú)庹舭l(fā)至近干，加入2 mL正己烷。佛羅里硅土柱依次用5 mL正己烷+丙酮（90∶10）、5 mL正己烷預(yù)淋洗，用5 mL正己烷+丙酮（90∶10）重復(fù)1次轉(zhuǎn)移至10 mL的比色管中，正己烷定容呈5 mL（大于5 mL用氮吹儀吹降5 mL以下），裝瓶待測(cè)[2]。

1.4 固相萃取選擇

5種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留凈化處理平均回收率：SPE-Florisil>SPE-SIL>不處理>SPE-CARB/NH2>中性氧化鋁>SPE-PSA；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差平均值：SPE-CARB/NH2>SPE-PSA>不處理>SPE-SIL>中性氧化鋁>SPE-Florisil。綜合考慮，選擇SPE-Florisil作為銅仁珍珠花生中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的凈化柱，處理平均回收率為98.44%，平均RSD為5.06%。

Florisil固相萃取容量在1 000 mg，6 mL時(shí)，凈化效果明顯，5種有機(jī)氯農(nóng)藥平均回收率為99.69%，平均RSD為7.88%，根據(jù)農(nóng)藥殘留安全檢測(cè)良好實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)選擇5種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留凈化處理為Florisil固相萃取容量在1 000 mg，6 mL較為理想[3]。

1.5 色譜柱選擇

采用4根色譜柱HP-5、HP-35、DB-1、DB-1701不同極性、不同填料的柱子，對(duì)10種混合農(nóng)藥進(jìn)行分離，選擇峰型分離較好、峰面積以及峰高較好的作為色譜分析柱?；ㄉ鷺悠分新惹杈挣舛?.06 mg/kg、百菌清濃度0.032 mg/kg、甲氰菊酯濃度0.01 mg/kg、三氯殺螨醇濃度0.01 mg/kg、三唑酮濃度0.032 mg/kg時(shí)，檢測(cè)可選擇HP-5或HP-35作為分析柱，峰面積和峰高區(qū)別不大[4-5]。

1.6 儀器條件選擇

儀器檢測(cè)條件的其他優(yōu)化：進(jìn)樣溫度、檢測(cè)器溫度、分流比等條件優(yōu)化，適當(dāng)調(diào)整，直到得出峰形分離較好，峰面積大，峰高較好，作為銅仁珍珠花生農(nóng)藥殘留檢測(cè)色譜分析條件。

有機(jī)氯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品隨進(jìn)樣口溫度升高保留時(shí)間均提前，但變化不明顯；出峰面積與進(jìn)樣口溫度升降無明顯關(guān)系，5種有機(jī)氯農(nóng)藥在進(jìn)樣口溫度為200 ℃時(shí)，峰面積最大。綜合5種農(nóng)藥出峰面積與保留時(shí)間，選擇進(jìn)樣口溫度為200 ℃，可以保證5種有機(jī)氯農(nóng)藥分離度較好。

5種有機(jī)氯農(nóng)藥農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品隨檢測(cè)器溫度升高保留時(shí)間均提前，但變化不明顯；出峰面積與檢測(cè)器溫度升降無明顯關(guān)系，5種有機(jī)氯農(nóng)藥在進(jìn)檢測(cè)器溫度為320 ℃時(shí)，峰面積最大。根據(jù)5種農(nóng)藥出峰面積與保留時(shí)間，選擇檢測(cè)器溫度為320 ℃，可以保證5種有機(jī)氯農(nóng)藥分離度較好。

5種有機(jī)氯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間與分流比上升無明顯關(guān)系，分流比為50∶1時(shí)，分離效果較好，峰面積最大，保留時(shí)間也較短，選擇分流比為50∶1作為有機(jī)氯農(nóng)藥氣相分離條件。

1.7 色譜條件

安捷倫7890A，檢測(cè)器u-ECD；色譜柱：HP-5柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）或者HP-35（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度200 ℃；載氣：氮?dú)?（純度99.999%），流速1 mL/min；輔助氣：氮?dú)猓兌?9.999%），流速60 mL/min，進(jìn)樣體積1.0 μL；檢測(cè)器溫度320 ℃。分流進(jìn)樣，分流比50∶1。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法靈敏度考察

分析方法的靈敏度是指該方法對(duì)單位濃度或單位質(zhì)量的待測(cè)物質(zhì)的變化所引起的響應(yīng)量變化的程度，通常以方法的最低檢出濃度（LOQ）表示。最低檢出濃度是指用添加方法能測(cè)出待測(cè)物在樣品中的最低含量（以mg/kg為單位表示），要求低于或等于該農(nóng)藥在該種作物上的最大殘留限量（MRL）值即可。5種農(nóng)藥添加最低檢測(cè)出限和線性關(guān)系如表1所示。氯氰菊酯、三唑酮、百菌清、三氯殺螨醇、甲氰菊酯的最低檢出濃度分別為0.004 5、0.001 2、0.003 2、0.008 0、0.001 5 mg/kg，均低于相應(yīng)最大殘留限量。

2.2 方法準(zhǔn)確度的考察

準(zhǔn)確度是指分析結(jié)果與假定的真值之間相符合的程度。它反映的是分析方法或測(cè)定系統(tǒng)存在的系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差的綜合指標(biāo)。在農(nóng)藥殘留分析時(shí)，評(píng)價(jià)準(zhǔn)確度的方法常常使用添加回收率來表征。銅仁珍珠花生添加農(nóng)藥回收率如表2所示，可以看出，氯氰菊酯在添加濃度0.005、0.050、0.500 mg/kg時(shí)，添加回收率分別為95.75%、102.55%、90.25%。三唑酮在添加濃度0.020、0.200、2.000 mg/kg時(shí)，添加回收率分別為94.72%、97.01%、100.90%。百菌清在添加濃度0.005、0.050、0.500 mg/kg時(shí)，添加回收率分別為89.61%、99.29%、98.96%。三氯殺螨醇在添加濃度0.050、0.500、5.000 mg/kg時(shí)，添加回收率分別為95.36%、107.03%、91.27%。甲氰菊酯在添加濃度為0.010、0.100、1.000 mg/kg時(shí)，添加回收率分別為96.04%、94.38%、106.06%。

3 結(jié)論

建立銅仁市地理標(biāo)志特色農(nóng)產(chǎn)品銅仁珍珠花生中5種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法，經(jīng)過考察方法的靈敏度、準(zhǔn)確度都達(dá)到了農(nóng)藥殘留檢測(cè)的要求，可以作為銅仁珍珠花生中敵敵畏、樂果、殺螟硫磷、倍硫磷、毒死蜱農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 銅仁市2015年國(guó)民經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展情況[R/OL].（2016-04-25）[2016-11-11].http：//www.tjch.org/tigb/201604/32875.html.

[2] 農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)出版研究中心.蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定：NYT 761-2008[S].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2010.

[3] 岳永德，朱魯生.農(nóng)藥殘留分析[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2004.

[4] 馬金鳳，劉雪，趙志強(qiáng)，等.凝膠滲透色譜-氣相色譜質(zhì)譜法測(cè)定花生中6種除草劑農(nóng)藥殘留[J].化學(xué)分析計(jì)量，2012（4）：43-46.

[5] 朱臻怡，馮民，何健，等.固相萃取-氣相色譜法同時(shí)測(cè)定花生中18種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留[J].化學(xué)分析計(jì)量，2010（1）：19-22.