艾葉煙熏對小鼠呼吸道影響的組織學(xué)觀察

杜娟，李慧俠，劉鐘杰，王帥玉，林珈好，范開

(1．開封市畜牧工作站，河南開封475000;2．中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，北京海淀100193)

艾葉煙熏對小鼠呼吸道影響的組織學(xué)觀察

杜娟1，李慧俠2，劉鐘杰2，王帥玉2，林珈好2，范開2

(1．開封市畜牧工作站，河南開封475000;2．中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，北京海淀100193)

為研究艾葉煙熏對正常呼吸道的組織學(xué)影響，將54只健康SPF昆明系小鼠分為對照組、2 g艾葉/m3組和4 g艾葉/m3組，艾葉煙熏療程，分為艾葉煙熏1次、1周和2周。結(jié)果可見:艾葉煙熏能造成小鼠肺臟和氣管的水腫;2 g艾葉/ m3組艾葉煙熏后氣管黏膜上皮細(xì)胞脫落數(shù)量出現(xiàn)先升后低的變化，艾葉煙熏2周試驗組氣管黏膜上皮細(xì)胞脫落數(shù)低于對照組但并無顯著差異;艾葉煙熏2周試驗組鼻黏膜上皮細(xì)胞間杯狀細(xì)胞數(shù)量與對照組相比較具有顯著性增加。結(jié)果表明，艾葉煙熏能造成小鼠肺臟和氣管的水腫，但沒有進(jìn)一步的組織損傷。適宜濃度的艾葉煙熏能加強呼吸道黏膜的完整性，并能增加杯狀細(xì)胞的數(shù)量，增加呼吸道黏液分泌。

艾葉煙熏;小鼠;呼吸道黏膜上皮;杯狀細(xì)胞;

在對多種動物的不同呼吸道傳染病的治療中，我們發(fā)現(xiàn)艾葉煙熏療法常能較好地控制噴嚏、流涕、咳嗽癥狀，在一定程度上阻斷疾病的傳播趨勢，而這些病例中的病原微生物并不確定，由此推測，艾葉煙熏治療可能主要是作用于動物機體，改變呼吸道的防御狀態(tài)。本試驗觀察艾葉煙熏后小鼠呼吸道的組織學(xué)變化，探討艾葉煙熏的治療機理。

1 材料與方法

1．1 實驗動物4～6周齡的雌性SPF昆明系小鼠54只，飼養(yǎng)于隔離器內(nèi)。

1．2 艾葉煙熏條件艾葉(Artemisia argyi Levl．et Vant．)，購自安國中藥市場，當(dāng)年產(chǎn)。艾葉煙熏療程，分為艾葉煙熏1次、1周和2周。艾葉煙熏在隔離器(1．5 m×0．75 m×1 m)中進(jìn)行，以2 g艾葉/m3為低劑量，4 g艾葉/m3為高劑量，設(shè)無艾葉煙熏對照組。2種劑量，3種療程。

每日9時、15時各艾葉煙熏1次。每次操作，先關(guān)閉艾葉煙熏隔離器的通風(fēng)閥門，點燃稱量好的艾葉。艾葉燃燒完全后開始計時，1 h后恢復(fù)通風(fēng)。無艾葉煙熏對照組同步給予開關(guān)通風(fēng)操作。

1．3 小鼠組織切片制作、染色及分析按各組的試驗周期，結(jié)束后處死小鼠，采取鼻腔、氣管和肺。固定好的組織制作石蠟切片進(jìn)行多種染色。H．E．染色分析艾葉煙熏對肺臟及氣管、鼻黏膜的組織結(jié)構(gòu)影響;并于40倍物鏡下計數(shù)100個氣管黏膜上皮細(xì)胞中脫落細(xì)胞的個數(shù)，分析艾葉煙熏對氣管上皮黏膜完整性影響。甲苯胺藍(lán)染色觀察、統(tǒng)計氣管組織黏膜下層肥大細(xì)胞數(shù)量變化［1－2］。PAS染色:于40倍物鏡下計數(shù)100個鼻黏膜上皮細(xì)胞中杯狀細(xì)胞的數(shù)量，并分類計數(shù)其中性分泌和酸性分泌細(xì)胞的數(shù)量［3－4］。

2 試驗結(jié)果

2．1 艾葉煙熏對鼻腔黏膜下層肥大細(xì)胞數(shù)量影響于物鏡20倍鏡下觀察并統(tǒng)計甲苯胺藍(lán)染色切片中氣管內(nèi)黏膜下層肥大細(xì)胞數(shù)(見封三彩版圖1)。經(jīng)t檢驗各組未見顯著差異(見表1)。

表1 上皮黏膜下層肥大細(xì)胞數(shù)量比較

2．2 H．E．染色觀察艾葉煙熏對肺臟、氣管和鼻黏膜組織結(jié)構(gòu)影響小鼠肺臟組織切片可見，首次艾葉煙熏后，低劑量單次艾葉煙熏無明顯病理變化(封三彩版圖2)，高劑量靜脈血管周圍輕微水腫(封三彩版圖3)。艾葉煙熏1周后，低劑量組與對照組相比較表現(xiàn)出輕微水腫，而高劑量組水腫加劇，兩組肺臟其他結(jié)構(gòu)無明顯病理變化。艾葉煙熏2周后，低劑量組和高劑量組肺臟血管周圍水腫。

小鼠氣管組織切片可見，首次艾葉煙熏后，有少量黏膜上皮細(xì)胞與基底膜脫落。艾葉煙熏1周后，而對照組和低劑量組無顯著病理變化(封三彩版圖4)，高劑量組氣管“C”環(huán)接口處黏膜褶皺結(jié)構(gòu)局部消失，黏膜下層結(jié)締組織水腫(封三彩版圖5);艾葉煙熏2周后，高、低劑量組均見氣管黏膜下層局部水腫，軟骨“C”環(huán)接口處的褶皺狀上皮黏膜結(jié)構(gòu)消失，且高濃度治療組局部上皮黏膜脫落(封三彩版圖6)。

小鼠鼻黏膜組織切片中，各組結(jié)構(gòu)均無明顯變化(封三彩版圖7)。艾葉煙熏2周后，高、低劑量組杯狀細(xì)胞數(shù)量均增多。

2．3 艾葉煙熏對小鼠氣管上皮完整性影響經(jīng)單因素多重t檢驗可見:同一劑量不同時間點比較時:低劑量組內(nèi)，2周時細(xì)胞脫落數(shù)量顯著低于單次刺激后(P＜0．05)，其他各數(shù)據(jù)間差異不顯著，結(jié)果見表2。

相同時間點不同劑量間比較時:單次艾葉煙熏時，低劑量和高劑量組細(xì)胞脫落數(shù)量均高于對照組，并且低劑量組與對照組差異顯著(P＜0．05)，其他各數(shù)據(jù)間差異不顯著，結(jié)果見表2。

以各組上皮細(xì)胞脫落的均值變化趨勢看，隨著艾葉煙熏時間延長，低劑量組逐漸降低，高劑量組先降低后升高;艾葉煙熏2周時低劑量組脫落細(xì)胞數(shù)量較低于對照組，高劑量組細(xì)胞脫落數(shù)量高于對照組，但未達(dá)顯著差異。

表2 氣管黏膜上皮細(xì)胞脫落數(shù)比較(n=6)

2．4 艾葉煙熏對鼻腔黏膜內(nèi)杯狀細(xì)胞數(shù)量及黏液影響經(jīng)單因素多重t檢驗可見:單次煙熏，杯狀細(xì)胞數(shù)隨艾葉煙熏濃度增加而增加，并且高劑量組顯著高于對照組(P＜0．05);1周時，各組與對照組無顯著差異。2周時結(jié)果與單次煙熏組相似，高劑量組顯著高于對照組(P＜0．05)。杯狀細(xì)胞酸性分泌與中性分泌(見封三彩版圖8)，在各時段、各組間無顯著差異，未見規(guī)律性變化(見表3)。

表3 上皮細(xì)胞間杯狀細(xì)胞數(shù)量及黏液酸堿性比較(n=6)

3 討論

試驗結(jié)果表明，首次艾葉煙熏后，高低濃度艾煙對小鼠呼吸道黏膜均有刺激損傷，造成上皮細(xì)胞死亡脫落，但是隨著艾葉煙熏時間延長，低劑量艾葉煙熏的小鼠可達(dá)完全修復(fù)。且低劑量艾葉煙熏2周后，其黏膜完整性優(yōu)于對照組，說明了艾葉煙熏在適當(dāng)濃度和適當(dāng)療程下能夠強化氣管上皮黏膜完整性，增強黏膜免疫屏障。

杯狀細(xì)胞對呼吸道黏膜黏液分泌量有重要影響，本試驗中隨著艾葉煙熏時間增加，杯狀細(xì)胞數(shù)量有增加趨勢，提示艾葉煙熏會在一定程度上增加呼吸道黏膜的分泌。實際治療中，也常可見有膿濁涕的動物艾葉煙熏后排出較前稀薄的痰涕。

艾葉煙熏雖可刺激呼吸道造成血管周圍水腫，但在所有組，水腫程度未造成試驗鼠出現(xiàn)明確的呼吸不暢癥狀。而且，通過控制艾煙的濃度和療程，也可限制水腫的程度。

肥大細(xì)胞的變化對鼻竅充血、瘙癢等炎癥反應(yīng)狀態(tài)有影響。對感冒鼻腔瘙癢的人作艾葉煙熏后可見自覺癢感減輕，推測艾葉煙熏有可能對肥大細(xì)胞的數(shù)量和功能產(chǎn)生影響。但本試驗各組間氣管黏膜下肥大細(xì)胞無顯著差異且數(shù)量很少。另外，本試驗結(jié)果為生理狀態(tài)下取得，并不表明病理狀態(tài)下也是如此。

艾葉煙熏是傳統(tǒng)的呼吸道病防治手段，操作簡便，效果比較可靠。其防治機理，可能與上述內(nèi)容有關(guān)。要進(jìn)一步研究和發(fā)展這種簡便的防治手段，還需要進(jìn)一步探討是否有其他組織學(xué)機制參與，分析艾葉煙熏的作用更多來源于煙霧顆粒的直接刺激或是其他藥效成分，觀察其他芳香避穢藥物是否有同樣效果，是否可有配伍協(xié)同作用，并探索對不同動物、不同疾病的最適劑量和療程。

［1］郭相杰，許素軍，廖慧丹，等．3種甲苯胺藍(lán)異染肥大細(xì)胞方法的比較［J］．中國法醫(yī)學(xué)雜志，2014;29(2):563-565．

［2］趙香汝，王家鑫，崔平．肥大細(xì)胞用甲苯胺藍(lán)染色之體會［J］．中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2000，9(3):359-359．

［3］白春學(xué)．氣道粘液高分泌和藥物治療研究進(jìn)展［J］．中國處方藥，2006，01:33-35．

［4］劉大鵬，宋立強．干預(yù)支氣管哮喘小鼠氣道黏液高分泌的研究［J］．中華肺部疾病雜志(電子版)，2013;6(5):416-420．

The observation of histological Impact of respiratory tract in mice by Moxa-smog treatment

DU Juan1，LI Hui-xia2，LIU Zhong-jie2，WANG Shuai-yu2，LIN Jia-hao2，F(xiàn)AN Kai2
(1．Animal Husbandry Station at Kaifeng，Kaifeng 475 000，China;2．College of Veterinary Medicine，China Agricultural University，Beijing 100193，China)

To study the histological effect in normal respiratory tract by different Moxa-smog treatment，54 healthy SPF KM mice were divided into control group，2 g Argyi/m3group，and 4 g Argyi/m3group．Mice in each group were exposed in Moxa-smog twice a day and continue 2 weeks．Results:After Moxa-smog treatment，the number of goblet cells in nasal mucosa increased significantly．However，the number of mast cells in nasal mucosa did not changed significantly;the lung and trachea had slight edema;In 2 g Argyi/m3group，the amount of tracheal exfoliated epithelium increased and then decrease．Our results show that the suitable concentration of Moxa-smog can enhance the integrity of respiratory epithelium as well as the mucus secretion，and increase the number of goblet cells．

Moxa-smog;respiratory symptom;goblet cell;respiratory epithelium

FAN Kai

S854．5

A

0529-6005(2017)01-0109-02

2015-10-14

中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項資金(2015DY004);中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)院臨床基金

杜娟(1989—)，女(回族)，助理獸醫(yī)師，碩士，從事動物防疫工作，E-mail:dujuan0824@163．com

作者簡介:李慧俠(1992—)，女，碩士，從事獸醫(yī)臨床工作，E-mail:lihuixiaecho@126．com

注:李慧俠與杜娟對本文具有同等貢獻(xiàn)

范開，E-mail:dirtyfan@sina．com