莊桂婧，李鐵成，邱 明

(1.佳木斯大學(xué)附屬第二醫(yī)院 ，黑龍江 佳木斯 154002 ；2.大慶油田總醫(yī)院口腔科，黑龍江 大慶 163001 )

趨化因子I-TAC及其受體3對(duì)腺樣囊性癌轉(zhuǎn)移影響的研究①

莊桂婧1，李鐵成2，邱 明2

(1.佳木斯大學(xué)附屬第二醫(yī)院 ，黑龍江 佳木斯 154002 ；2.大慶油田總醫(yī)院口腔科，黑龍江 大慶 163001 )

目的:初步研究趨化因子(I-TAC)及其受體(CXCR3)誘導(dǎo)血管生成擬態(tài)形成在腺樣囊性癌中的作用和意義。方法:實(shí)驗(yàn)選用唾液腺樣囊性癌病理蠟塊24塊，綜合臨床癥狀和鏡下觀察應(yīng)用免疫組織化學(xué)法，檢測(cè)唾液腺腺樣囊性癌及正常唾液腺組織旁組織中I-TAC-CXCR3的表達(dá)并采用PAS、CD31雙重染色法檢測(cè)各組組織中血管生成擬態(tài)的形成狀況。結(jié)果:I-TAC和CXCR3在腺樣囊性癌組織中的表達(dá)量高于瘤旁組織(P<0.05)。在有神經(jīng)轉(zhuǎn)移的腺樣囊性癌組織中高于無神經(jīng)轉(zhuǎn)移的腺樣囊性癌組織(P<0.05)。有神經(jīng)轉(zhuǎn)移和無神經(jīng)轉(zhuǎn)移組織都存在血管生成擬態(tài)，然而在有神經(jīng)轉(zhuǎn)移的腺樣囊性癌中血管生成擬態(tài)的表達(dá)數(shù)量明顯高于無神經(jīng)侵襲組和正常組織。結(jié)論:I-TAC和CXCR3在腺樣囊性癌組織中高表達(dá)提示二者可能在腺樣囊性癌的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮作用血管生成擬態(tài)在有神經(jīng)轉(zhuǎn)移的腺樣囊性癌中高表達(dá)且CXCR3與組織陽性表達(dá)的血管生成擬態(tài)呈正相關(guān) (相關(guān)系數(shù)r=0.718,P<0.01)。初步得出趨化因子及其受體可能與腺樣囊性癌的神經(jīng)轉(zhuǎn)移相關(guān)。

腺樣囊性癌;趨化因子及其受體;血管生成擬態(tài);免疫組織化學(xué)

I一TAC為干擾素誘導(dǎo)的T細(xì)胞趨化因子(分子標(biāo)記CXCLll)被稱為1型趨化因子(或Thl趨化因子),其受體是CXCR3[9]。I-TAC強(qiáng)有力的趨化現(xiàn)象和代理激活T細(xì)胞的這兩種活動(dòng)依賴在CXCR3激活[1]。腺樣囊性癌具有嗜神經(jīng)侵襲的特性，因此我們推測(cè)I-TAC-CXCR3這對(duì)生物軸誘導(dǎo)血管擬態(tài)形成為腺樣囊性癌發(fā)生嗜神經(jīng)侵襲的機(jī)制之一[2]，本實(shí)通過檢測(cè)腺樣囊性癌及其癌旁組織中I-TAC-CXCR3 表達(dá)的差異及其與血管生成擬態(tài)[3]多少的關(guān)系來分析其與對(duì)腺樣囊性癌神經(jīng)轉(zhuǎn)移的趨化性和對(duì)血管擬態(tài)形成的誘導(dǎo)關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

取大慶油田總醫(yī)院病理科2014～2015年間的唾液腺腺樣囊性癌病理蠟塊27例，其中男15例，女12例；年齡25～73歲。分別取腺樣囊性癌組織和腫瘤外1.0cm正常腮腺組織，標(biāo)本轉(zhuǎn)至液氮罐中，后置于-80℃低溫冰箱中保存待用,其余標(biāo)本送病理科石蠟包埋，常規(guī)病理檢查,病理診斷均由兩位病理醫(yī)生確診，神經(jīng)侵襲腺樣囊性癌18例，無神經(jīng)侵襲9例。每例腫瘤標(biāo)本連續(xù)切片，厚度約 4～6μm，選取完整均勻的切片HE染色后光鏡下觀察，如發(fā)現(xiàn)1處及以上在神經(jīng)周圍和(或)神經(jīng)內(nèi)有腫瘤細(xì)胞的存在，即將該例組織劃為侵襲神經(jīng)現(xiàn)象組。共計(jì)侵襲神經(jīng)現(xiàn)象標(biāo)本 18例,未侵襲現(xiàn)象標(biāo)本9例。

1.2 免疫組化SP法檢測(cè)I-TAC和CXCR3的表達(dá)

I-TAC和CXCR3的檢測(cè)采用SP免疫組化法，染色程序按SP試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3CD31與PAS雙重染色方法

首先進(jìn)行CD31免疫組化染色(染色步驟如上),DAB顯色后。顯微鏡下觀察,血管內(nèi)皮細(xì)胞著色后,水流沖洗1min終止顯色反應(yīng)。將切片置于0.5%的過碘酸溶液中氧化8～15min。水流沖洗3min后置于Schiff液中,閉光環(huán)境在Schiff液中反應(yīng)15～30min,一般15min為宜。蒸流水洗3次,每次1min,流水沖洗3～5min。蘇木精淺染胞核l2min(蘇木精為實(shí)驗(yàn)開始時(shí)配置),自來水沖洗2min。鹽酸酒精分化,氨水返藍(lán)。常規(guī)酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各計(jì)量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)誤表示，表達(dá)水平分析采用四格表資料的Fisher確切概率法，P<0.05表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組變量間的相關(guān)性分析采用Pearson等級(jí)相關(guān)分析,以P<0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)I-TAC和CXCR3 的表達(dá)結(jié)果顯示:27對(duì)腺樣囊性癌組織及其瘤旁組織均測(cè)得I-TAC和CXCR3的表達(dá)，腺樣囊性癌組織及其瘤旁組織I-TAC和CXCR3平均表達(dá)量見表1，I-TAC和CXCR3 在有神經(jīng)侵襲組織的腺樣囊性癌中的表達(dá)高于無神經(jīng)侵襲的腺樣囊性癌組織和正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 在腺樣囊性癌組織中觀察到血管擬態(tài)的存在并且有神經(jīng)侵襲組明顯多于無神經(jīng)侵襲及正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 CXCR3,I-TAC,VM在腺樣囊性癌和正常組織免疫組化染色結(jié)果

圖1I-TAC在有神經(jīng)侵襲的SACC的表達(dá)(×400)

圖2 CXCR3 在有神經(jīng)侵襲的SACC的表達(dá)(×400)

圖3 VM在神經(jīng)侵襲的SACC的表達(dá)(×400)

3 討論

腫瘤細(xì)胞常常表現(xiàn)出特定的轉(zhuǎn)移方式，并且不同的腫瘤細(xì)胞具有各自的特異性侵襲器官，這提示受侵襲器官周圍的微環(huán)境對(duì)腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)、侵襲和增殖效應(yīng)有著一定的影響作用。腺樣囊性癌有嗜神經(jīng)的特性，因此有必要對(duì)其特征性的嗜神經(jīng)特性進(jìn)行相關(guān)的研究。趨化因子是一類可誘導(dǎo)的、分子質(zhì)量為7～8kD的促炎細(xì)胞因子，具有激活和趨化白細(xì)胞的作用[4]。根據(jù)其末端半膚氨酸保守序列位置的不同可分為四大類，其中CXC類趨化因子的近氨基端存在CXC(半膚氨酸一其它氨基酸一半眺氨酸)基序，這類趨化因子—可趨化中性粒細(xì)胞，刺激血管形成[10]。VM是具有侵襲性腫瘤細(xì)胞為滿足自身的侵襲發(fā)展提供路徑和營(yíng)養(yǎng)，而通過自身變形和細(xì)胞外基質(zhì)重塑形成的一種類似血管樣的通道[5]。VM在鏡下觀察的情況是腫瘤細(xì)胞形成瘤細(xì)胞條索并圍成管道，管道內(nèi)沒有血管內(nèi)皮細(xì)胞襯覆，管道外是一層厚薄不一的PAS陽性物質(zhì)構(gòu)成的基底膜。血液則在這無內(nèi)皮細(xì)胞的管道中流動(dòng)。因?yàn)閂M缺乏內(nèi)皮細(xì)胞，所以腫瘤細(xì)胞可直接進(jìn)入血液，發(fā)生血行播散,不同于經(jīng)典的內(nèi)皮細(xì)胞依賴的腫瘤微血管結(jié)構(gòu)[6]。為了驗(yàn)證趨化因子和血管擬態(tài)的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)I-TAC和CXCR3在有無神經(jīng)侵襲的腺樣囊性癌中的表達(dá)程度與周圍的正常組織做照，PAS、CD33雙重染色觀察血管擬態(tài)的形成狀況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在有神經(jīng)侵襲的腺樣囊性癌中I-TAC和CXCR3 的表達(dá)明顯高于無神經(jīng)轉(zhuǎn)移和正常組織(P<0.05)。在表達(dá)CXCR3的有神經(jīng)轉(zhuǎn)移的腺樣囊性中均能觀察到血管生成擬態(tài)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)行配對(duì)資料的相關(guān)性分析，表明CXCR3主要表達(dá)與腺樣囊性癌組織臨床病理特征的關(guān)系：CXCR3與I-TAC兩者陽性表達(dá)呈正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=0.652,P<0.01),血管生成擬態(tài)(VM)與CXCR3兩者的陽性表達(dá)呈正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=0.718,P<0.01)。通過以上實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象和數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)CXCR3，I-TAC和VM的表達(dá)與腺樣囊性癌的病理分型有關(guān)，均為神經(jīng)侵襲較無神經(jīng)侵襲偏高(P<0.05)，初步分析CXCR3和I-TAC對(duì)腺樣囊性癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移有促進(jìn)作用，CXCR3與血管生成擬態(tài)陽性表達(dá)呈正相關(guān)提示CXCR3和I-TAC可以誘導(dǎo)血管生成擬態(tài)生成，為腺樣囊性癌的神經(jīng)轉(zhuǎn)移提供信號(hào)，實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了腺樣囊性癌存在VM,神經(jīng)轉(zhuǎn)移組陽性表達(dá)率明顯增高,說明血管生成擬態(tài)與神經(jīng)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性。依據(jù)實(shí)驗(yàn)和以往的研究結(jié)果可以初步判定CXCR3/I-TA/C受體配體對(duì)口腔腺樣囊性癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移提供了信號(hào)[7]，誘導(dǎo)形成血管擬態(tài)為口腔腺樣囊性癌侵襲轉(zhuǎn)移提供血液供應(yīng)促進(jìn)它的嗜神經(jīng)侵襲。因此,在臨床上可通過CXCR3，I-TAC及血管生成擬態(tài)對(duì)腺樣囊性癌患者檢測(cè),從而對(duì)腺樣囊性癌神經(jīng)轉(zhuǎn)移進(jìn)行早期預(yù)測(cè),早期治療[8]?？紤]到治療的安全和可靠性,還需要今后更多的體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)研究，為進(jìn)一步降低腺樣囊性癌轉(zhuǎn)移率提供依據(jù)。

[1]麻春瑩,遲艷霞.C-MET在涎腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及意義[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2015,38(4):61-62

[2]張熙,郭世文,尉春艷.缺氧誘導(dǎo)SHG44細(xì)胞擬態(tài)血管形成及相關(guān)機(jī)制.[J].中華神經(jīng)外科疾病研究雜志,2011,10(3):218-221

[3]申志遠(yuǎn),孫沫逸,張靜，等.趨化因子受體5在唾液腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及意義 [J].北京口腔醫(yī)學(xué),2013,2 :71-73

[4]MMüller,SCarter,MJHofer,etal.ThechemokinereceptorCXCR3anditsligandsCXCL9,CXCL10andCXCL11inneuroimmunity-ataleofconflictandconundrum[J].NeuropathologyandAppliedNeurobiology, 2010 ,36(5):368-387

[5]EIHallaniS,BoisselierB,PeglionF,etal.AnewalternativemechanisminGlioblastomavascularization:tubularvasculogenicmimicry[J].Brain,2010,133(4):973-982

[6]劉見榮,侯風(fēng)剛 .腫瘤血管生成擬態(tài)研究新進(jìn)展 [J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué), 2013(4):898-902

[7]唐惠玲.NF-κB信號(hào)與疾病研究進(jìn)展 [J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué), 2012,35(5):34-35

[8]成雨，朱文濤，呂瀟童.趨化因子受體CCR7誘導(dǎo)血管生成擬態(tài)形成在肝門部膽管癌中的作用 [J].中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展 ,2015,18(2):108-112

[9]BelindaNedjai,HubertLi,llanaLStroke.SmallmoleculechemokinemimeticssuggestamolecularbasisfortheobservationthatCXCL10andCXCL11areallostericligandsofCXCR3 [J].BritishjournalofPharmacology,2012,166(3)：912-923

[10]BPHoh,HUmi-Shakina,ZZuraihan.CommonvariantsofchemokinereceptorgeneCXCR3anditsligandsCXCL10andCXCL11associatedwithvascularpermeabilityofdengueinfectioninpeninsular[J].Humanimmunology, 2015,76(6)：421-426

The effect of I-TAC and its receptor 3 on the metastasis of adenoid cystic carcinoma

ZHUANGGui-jing1，LITie-cheng2，QIUMing2

(1. Department of Stomatology, the Affiliated Stomatology Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154002,China; 2, Daqing Oilfield General Hospital，Daqing163004,China)

Objective: To study the role and significance of chemotactic factor (I-TAC) and its receptor (CXCR3) on inducing the formation of vasculogenic mimicry in adenoid cystic carcinoma. Methods：24 blocks of salivary adenoid cystic carcinoma pathological were observed by immunohistochemical method combined with clinical symptoms and endoscopic. The expression of I-TAC-CXCR3 in salivary adenoid cystic carcinoma and normal salivary gland tissues were detected. Vascular PAS and CD31 double staining methods were used to detect the formation of tissue mimicry.Results:The expression of I-TAC and CXCR3 in adenoid cystic carcinoma tissues was higher than that nearby tumor tissues (P<0.05).Neuroinvasive-nessofadenoidcysticcarcinoma(P< 0.05)ishigherthanthatofthenonmetastaticadenoidcysticcarcinoma.Vasculogenicmimicryexistsinneuroi-nvasivenessandnonmetastaticofadenoidcysticcarcinoma.Tissueswithandwithoutnervetransferexistangiogenesismimicry.However,inadenoidcysticcarcinomawithnervetransferinangiogenesis,theexpressionquantityofmimicrywasobviouslyhigherthanthatofnonerveinvasiongroupandnormalgroup. Conclusion: The high expressions of I - TAC and CXCR3 in adenoid cystic carcinoma tissue indicate that they might play a role in the pathogenesis of adenoid cystic carcinoma. The expressions of angiogenesis mimicry in adenoid cystic carcinoma with nerve transfer are high. Angiogenesis mimicry CXCR3 and the positive expressions of tissues were positively correlated (correlation coefficientr=0.718,P<0.01).Itispreliminarilyconcludedthatchemokinesandtheirreceptorsmaybeassociatedwiththenervetransferofadenoidcysticcarcinoma.

adenoid cystic carcinoma；the chemotactic factor and its receptor；vasculogenic mimicry; immunohistochemistry

莊桂婧(1989～)女，黑龍江綏化人，在讀碩士研究生。

邱明(1964～)男，黑龍江大慶人，碩士，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:zhuang.guimi@163.com。

R

A

1008-0104(2017)01-0082-03

2016-01-05)