黃輝，鄒麗敏，楊南，杜忻

(南昌市血站，江西南昌330025)

保存期末紅細(xì)胞冰凍保存效果體外評(píng)估

黃輝，鄒麗敏，楊南，杜忻

(南昌市血站，江西南昌330025)

目的探討應(yīng)用冰凍技術(shù)將離體后較長(zhǎng)時(shí)間的紅細(xì)胞的保存期延長(zhǎng)至數(shù)年，確保解凍后紅細(xì)胞的質(zhì)量，提高輸血的應(yīng)急能力。方法收集血站2015年10月至2016年2月CPD保存液保存了34d的紅細(xì)胞（2u/袋）30袋，利用全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)(Haemonetics ACP215)對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行冰凍及解凍復(fù)蘇操作，比較產(chǎn)品與《全血與成分血質(zhì)量要求》的差異性。結(jié)果利用全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)(Haemonetics ACP215)對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行冰凍及解凍操作，終產(chǎn)品在外觀、容量、血紅蛋白含量、游離Hb、甘油殘留量、白細(xì)胞殘留量和細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果等方面與標(biāo)準(zhǔn)無顯著差異。結(jié)論無論從延長(zhǎng)紅細(xì)胞保存時(shí)間，還是提高輸血應(yīng)急能力，冰凍紅細(xì)胞都起到了實(shí)效。

全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng);保存期末；冰凍保存;解凍復(fù)蘇；質(zhì)量評(píng)價(jià)

正常紅細(xì)胞的保存期在35d以內(nèi)，應(yīng)用冰凍技術(shù)可以將紅細(xì)胞的保存期延長(zhǎng)到數(shù)個(gè)月甚至數(shù)年[1]。但目前該技術(shù)僅限于稀有血型的保存，且要求在離體后6d內(nèi)的血液進(jìn)行冰凍。我們研究利用全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)(Haemonetics ACP215)對(duì)保存期末的普通血型紅細(xì)胞進(jìn)行冰凍保存，檢測(cè)紅細(xì)胞解凍后的質(zhì)量指標(biāo)，從而保證在延長(zhǎng)紅細(xì)胞保存時(shí)間的情況下制備出符合國(guó)家質(zhì)量要求的冰凍及解凍去甘油紅細(xì)胞，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 血液來源濾白懸浮紅細(xì)胞30袋(2u/袋)，來自于南昌地區(qū)無償獻(xiàn)血中健康的Rh陽(yáng)性獻(xiàn)血員30人，按獻(xiàn)血規(guī)范要求完成血液的檢測(cè)與入庫(kù)。將采集到的紅細(xì)胞用CPD保存液懸浮至34d時(shí)制成冰凍紅細(xì)胞，保存360d以內(nèi)，解凍進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估。

1.2 主要材料57%甘油(160ml，北京博德桑特輸血器材公司)、9%NaCl(80ml，山東威高集團(tuán)醫(yī)用高分子制品股份有限公司)，0.9%NaCl(1000ml，山東威高集團(tuán)醫(yī)用高分子制品股份有限公司)，轉(zhuǎn)移袋(1000ml，四川南格爾生物醫(yī)學(xué)股份有限公司)，全自動(dòng)血細(xì)胞處理系統(tǒng)配套的甘油化耗材(REF 225)和去甘油化耗材(REF 236)(美國(guó)血液技術(shù)公司)。所有材料均在有效期內(nèi)使用。

1.3 主要設(shè)備全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)(Haemonetics ACP215)(美國(guó)血液技術(shù)公司)，-80℃三洋冰箱M DF-2136(日本三洋公司)，CRYOFUGE6000i離心機(jī)(德國(guó)賽黙飛世爾科技公司)，HTR-Ⅱ冰凍血漿融化箱(濰坊漢唐生物工程有限公司)，CompoDock無菌接口機(jī)(費(fèi)森尤斯卡比)，COULTER Ac.T 5diff血液分析儀（美國(guó)），BD BACTEC 9120全自動(dòng)血液培養(yǎng)儀（美國(guó)），752紫外可見分光光度計(jì)（上海）。

1.4 實(shí)驗(yàn)步驟

1.4.1 冰凍紅細(xì)胞制備將保存期末的濾白懸浮紅細(xì)胞的血袋與1000ml轉(zhuǎn)移袋用無菌接管機(jī)相連接，然后將血液轉(zhuǎn)移至空袋中。將濾白懸浮紅細(xì)胞袋與ACP-215配套的REF 225（甘油化耗材）用無菌接管機(jī)相連接。耗材REF 225另一端與復(fù)方甘油袋穿刺連接。按照ACP-215設(shè)備要求安裝。以先慢后快的速度滴入320ml甘油保存液入2U濾白懸浮紅細(xì)胞，同時(shí)水平勻速振蕩，滴完全部的甘油保存液后，水平靜置血袋30min。2450r/min 4℃離心10min，去上清，甘油化細(xì)胞完成。加貼標(biāo)簽，登記入庫(kù)，放置-80℃以下冰箱保存。

1.4.2 低溫保存保存于-80℃冰箱中，冰箱設(shè)有溫度監(jiān)控器，24h實(shí)時(shí)監(jiān)控保證溫度在-80℃以下。

1.4.3 解凍復(fù)蘇甘油化細(xì)胞從冰箱取出后，直接放入37～40℃循環(huán)水浴中融化。稱解凍紅細(xì)胞重量(凈重)。將甘油化細(xì)胞與去甘油化耗材(REF 236)連接。安裝到ACP-215機(jī)器上。滴加9%NaCl 160ml（2U），50ml/min，同時(shí)搖勻，水平靜置1min，再加0.9%NaCl 1600ml，洗滌7次。讓紅細(xì)胞逆流入輸血管內(nèi)，熱合三段血辮做交叉配血標(biāo)本。血袋貼上標(biāo)簽，登記入庫(kù)，放置4℃冰箱保存好24h內(nèi)供臨床輸用。

1.4.4 質(zhì)量檢測(cè)按COULTER Ac.T 5diff血液分析儀說明書要求記錄紅細(xì)胞Hb和白細(xì)胞殘留量；按752紫外可見分光光度計(jì)說明書要求檢測(cè)甘油殘余量。

2 結(jié)果

冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞30袋(2u/袋)檢測(cè)結(jié)果見表1。

3 討論

正常采集的紅細(xì)胞用CPD保養(yǎng)液懸浮僅僅保存35d[2，3]。采用冰凍紅細(xì)胞保存技術(shù)后，血液的保存期限大幅延長(zhǎng)[4]?？梢詫⑵綍r(shí)采集到的富余血液冰凍保存下來；遇到患者需要緊急用血時(shí)，將適合的血液解凍提供給臨床，緩解了旺季采血過多造成血液過期報(bào)廢、淡季缺血影響臨床輸血治療的問題，保障臨床血液供應(yīng)。冰凍紅細(xì)胞在解凍洗滌過程中去除了白細(xì)胞的數(shù)量，因而大大減少了因輸同種異體血引起的免疫反應(yīng)及白細(xì)胞相關(guān)性病毒傳播的發(fā)生率，并且也減少了輸血免疫抑制的發(fā)生。在條件允許的情況下，可在紅細(xì)胞冰凍保存6個(gè)月后對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行輸血傳播疾病的復(fù)檢以規(guī)避經(jīng)血傳播疾病的發(fā)生。

同時(shí)，去甘油洗滌也去除了細(xì)胞代謝產(chǎn)物及抗凝劑，大量輸注亦不會(huì)出現(xiàn)酸中毒及高鉀血癥，同時(shí)洗滌減少了引起患者產(chǎn)生免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)的生物活性物質(zhì)，因此減少了輸血不良反應(yīng)[5，6]。

使用ACP215全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)制備的冰凍紅細(xì)胞，在保存期限360d以內(nèi)解凍復(fù)蘇，結(jié)果顯示，復(fù)蘇后每袋成品血的紅細(xì)胞回收率，游離血紅蛋白濃度，溶血率，甘油殘余量，細(xì)菌培養(yǎng)試驗(yàn)等質(zhì)控指標(biāo)[7-10]均符合《全血及成分血質(zhì)量要求》[11]，沒有出現(xiàn)極值不符合《全血及成分血質(zhì)量要求》的情況。

與國(guó)內(nèi)外多家血液機(jī)構(gòu)用ACP 215全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)進(jìn)行冰凍及解凍去甘油紅細(xì)胞的制備效果相比，結(jié)果一致。ACP 215全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)可以實(shí)現(xiàn)除更換液體外的冰凍紅細(xì)胞的全自動(dòng)制備[12，13]，最大程度減少人為差錯(cuò)事故的發(fā)生，保證了產(chǎn)品質(zhì)量；減少了勞動(dòng)強(qiáng)度，可做到一人多機(jī)同時(shí)操作?？朔耸止は礈觳僮鞑襟E多、時(shí)間長(zhǎng)、效率低、人為因素干擾大等諸多問題。

結(jié)果表明，相比于正常保存的濾白懸浮紅細(xì)胞，冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞在各項(xiàng)指標(biāo)上均與之相似，能起到相似的臨床作用。但因去甘油過程會(huì)損失部分紅細(xì)胞，一般認(rèn)為每提升Hb10g/L需要輸注2或3個(gè)單位冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞[14，15]。

本次冰凍紅細(xì)胞保存效果的體外評(píng)估效果良好，所有解凍紅細(xì)胞質(zhì)量評(píng)估均符合全血及成分血質(zhì)量要求。下一步我們將與臨床合作，向醫(yī)院臨床提供冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞，根據(jù)臨床反饋評(píng)估冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的臨床效果，進(jìn)一步推動(dòng)冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的臨床應(yīng)用。

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R457.1+2

A

1674-1129(2017)03-0449-03

2017-04-01；

2017-05-11)

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.03.055