免疫學方法在食源性副溶血性弧菌檢測中的應用研究進展

謝雪欽，劉 舟*（.廈門市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院，福建 廈門 36004；2.廈門醫(yī)學院藥學系，福建 廈門 36008）

免疫學方法在食源性副溶血性弧菌檢測中的應用研究進展

謝雪欽1，劉 舟2,*
（1.廈門市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院，福建 廈門 361004；2.廈門醫(yī)學院藥學系，福建 廈門 361008）

副溶血性弧菌可污染以海產(chǎn)品為主的各類食品，其引發(fā)的食品安全事件數(shù)量已經(jīng)躍升至我國食品中毒事件數(shù)首位。相對于傳統(tǒng)培養(yǎng)法及現(xiàn)代分子檢測技術，基于抗原-抗體特異性識別反應的免疫鑒定及分型策略在檢測效率、特異性、現(xiàn)場適用性、前處理簡便性等諸多方面顯現(xiàn)突出優(yōu)勢。本文在解析當前副溶血性弧菌抗體種類及制備方法的基礎上，就免疫磁珠分離、酶聯(lián)免疫吸附測定、免疫層析測試、免疫傳感器、免疫熒光顯微術等方法在食源性副溶血性弧菌檢測中的應用現(xiàn)狀進行綜述，以期為該病原菌的快速檢測提供借鑒和參考。

食源性副溶血性弧菌；免疫磁珠分離；酶聯(lián)免疫吸附測定；免疫層析測試；免疫傳感器；免疫熒光顯微術

副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus，VP）是一種革蘭氏陰性嗜鹽菌，普遍污染以海產(chǎn)品為主的各類食品，已成為世界性公共衛(wèi)生問題[1]。據(jù)國家食源性疾病監(jiān)測網(wǎng)的數(shù)據(jù)（2003—2007年），VP已躍升為我國細菌性食物中毒事故的首要病原[2-3]，文獻綜述法估計VP感染占我國食源性疾病的比例高達68.0%[4]。美國疾病預防控制中心的食源性疾病監(jiān)測數(shù)據(jù)（2009—2013）[5-8]同樣顯示，VP已成為繼沙門氏菌、空腸彎曲菌、產(chǎn)志賀毒素大腸埃希氏菌等之后的主要致病因子，主要感染生蠔、蛤蜊等海產(chǎn)品，軟體類水產(chǎn)中VP致疾病爆發(fā)頻次在2012—2013年均為發(fā)生頻率第3的食物-致病菌組合。而歐盟食品安全局（European Food Safety Authority，EFSA）和歐洲疾病預防控制中心（European Centre for Disease Prevention and Control，ECDC）聯(lián)合發(fā)布的歐盟人畜共患疾病、致病因子以及食源性疾病報告（2011—2014）[9-12]顯示，VP在歐盟成員國中的西班牙和法國有爆發(fā)報道，主要感染軟體及甲殼類水生動物等，引發(fā)數(shù)十例病例。

VP感染引起腹瀉、腹痛、惡心、嘔吐、發(fā)熱等急性腸胃炎癥狀，重癥患者還出現(xiàn)脫水、休克昏迷甚至死亡，嚴重威脅健康[13-14]。鑒于其感染普發(fā)性及危害嚴重性，近年來許多現(xiàn)代快速檢測方法[15]，包括顯色培養(yǎng)基法、分子生物學方法、免疫檢測法等被開發(fā)用于VP的檢測。其中免疫法通過制備高特異性抗體，經(jīng)抗原-抗體專一性結合精準靶向于目標菌，借由免疫傳感器、免疫磁珠分離（immunomagnetic separation，IMS）、乳膠凝集、酶聯(lián)免疫吸附測定（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）、免疫層析檢測（immunochromatographic assay，ICA）、免疫熒光顯微術（immunofluorescence microscopy，IFM）等技術廣泛用于病原菌的富集及快速檢測，較之傳統(tǒng)培養(yǎng)法有效提高檢測效率[16-18]。本文就上述免疫學方法在食源性VP檢測上的應用進行綜述，以期為免疫學方法的進一步創(chuàng)新及其與其他檢測技術的融合提供思路，使其更好地服務于病原檢測，保障食品安全。

1 抗VP免疫抗體的制備

基于免疫學方法檢測食源性致病菌的關鍵在于高質(zhì)量抗體的制備?？贵w的靶向性及排他性、效價決定了抗原-抗體識別反應的專一性及靈敏度。用于微生物免疫檢測的抗體分為多克隆抗體（polyclonal antibodies，PAbs）、單克隆抗體（monoclonal antibodies，MAbs）和以單鏈抗體（single chain antibody fragment，scFv）為代表的3 類基因工程抗體。

VP為多血清型細菌，包括至少12 種菌體（O）抗原、70余種莢膜（K）抗原和1 種各菌株相同的鞭毛（H）抗原[19-20]。以菌體、鞭毛蛋白或溶血毒素蛋白為抗原，近年來國內(nèi)外研究者制備了多種高特異性、高效價抗體用于VP的免疫檢測。

1.1 抗全菌抗體

VP為微生物抗原，屬于具有較強的免疫原性和免疫反應性的完全抗原，經(jīng)滅活后的全菌可作為免疫原制備高特異性抗體。

池信才等[21]以甲醛滅活的VP全菌免疫小鼠，利用淋巴細胞雜交瘤技術，獲得1 株針對VP的MAbs，其特異性強、效價高，結合兔抗VP-Mabs，建立雙抗體夾心ELISA法用于患病大黃魚中VP的檢測，準確度高；經(jīng)摸索、優(yōu)化抗原濃度及滅活方式、免疫接種劑量和時間間隔等影響PAbs效價的關鍵因素，竇勇等[22]同樣以滅活菌體為抗原制備了兔源PAbs，效價高達1.6×105，交叉及阻斷實驗顯示其高度特異靶向于VP。以滅活全菌為免疫原，采用雜交瘤技術，張星等[23]亦獲得了4 株穩(wěn)定分泌VP-MAbs的雜交瘤細胞株，其中5D8與供試的9 株其他弧菌均無交叉反應，可用于VP的特異性檢驗。

除了上述以單一VP菌株作為免疫原外，多個菌株混合液亦可作為抗原用于制備抗體。如Prompamorn等[24]以5 株VP純菌的混合液多次注射兔子，獲得VP-2D、VP-11H、VP-11B、VP-516和VP-618 5 種不同的MAbs，分別特異識別該菌不同血清型亞群，結合霍亂弧菌、溶藻弧菌和哈氏弧菌特異性MAbs，可通過點雜交免疫反應直接區(qū)分海產(chǎn)品中的不同弧菌。

此外，為減少對實驗動物的副作用、簡化抗體制備工藝，閆茂倉等[25]制備了卵黃抗體替代傳統(tǒng)動物抗體用于VP免疫檢測，以該抗體建立的間接ELISA法可高度特異地檢出低至103CFU/mL的VP，與其他常見水產(chǎn)弧菌無交叉反應性。

1.2 抗H抗原抗體

VP有極鞭毛和周（側）鞭毛兩套鞭毛系統(tǒng)以適應不同環(huán)境，其中前者負責菌體泳動，后者則與游動細胞類型轉(zhuǎn)換及生物膜形成相關[26]。鞭毛是重要的表面抗原，也是主要的抗原決定因子，具有特異性H抗原，可作為抗體制備的理想抗原。

如以柔性Linker序列串聯(lián)VP的3 個極鞭毛基因FlaA、FlaB和FlaF，于大腸桿菌中融合表達，純化蛋白產(chǎn)物免疫獺兔制備抗血清，可特異性檢測6 種食物中毒性弧菌，對其他27 種非目標菌無任何交叉反應[27]。楊新[28]通過基因工程手段成功構建高容量噬菌體單鏈抗體展示庫，并從中篩選得到1 株抗VP極鞭毛蛋白FlaB的高親和力scFv，為建立基于鞭毛蛋白特異性免疫識別反應的VP免疫檢測法奠定良好基礎。

除了上述以基因工程表達的鞭毛蛋白為免疫原外，也有研究者通過不同方法直接從菌體中提取鞭毛蛋白用于特異性免疫抗體激發(fā)。Dotta等[29]分離了VP的鞭毛核心蛋白并以其為免疫原制備MAbs，玻片凝集反應表明該抗體可使41 株VP菌懸液在30 s內(nèi)迅速發(fā)生凝集，而與30 株供試創(chuàng)傷弧菌無任何交叉反應，交聯(lián)該抗體的磁珠可有效富集35%～45%濃度為102～103CFU/mL的VP。以差速離心法提取的高純度VP鞭毛蛋白為抗原免疫小鼠，張蕾等[30]通過雜交瘤技術獲得了高特異性鞭毛蛋白單抗VpNo.6，在供試涵蓋27 個屬共208 株細菌的免疫檢測中未出現(xiàn)假陰（陽）性，以其建立的雙抗體夾心ELISA法檢測VP純菌及模擬樣品的靈敏度低至103CFU/mL和21 CFU/g，為建立VP免疫檢測方法提供了良好的抗體資源。

1.3 抗溶血毒素蛋白抗體

VP溶血性毒素包括耐熱直接溶血毒素（thermostable direct hemolysin，TDH）、TDH相關溶血毒素（TDH-related hemolysin，TRH）和不耐熱溶血毒素（thermolabile hemolysin，TLH）3 種，是該菌關鍵致病因子[31]。鑒于此，以溶血毒素蛋白為免疫原制備抗體可用于致病性VP的鑒別。

早在20世紀90年代，日本大阪大學的研究者即制備出抗VP-TDH[32]和TRH[33]的MAbs，部分抗體間具有兩類溶血素交叉免疫反應活性。將其用于ELISA法檢測臨床及環(huán)境VP分離菌株，表明分離自病理樣本的神奈川現(xiàn)象陰性及陽性菌株分別為攜帶TDH和TRH，而環(huán)境分離菌株則多為溶血素陰性。Kumar等[34]以純化的TRH重組蛋白亦制備了MAbs，可用于海產(chǎn)品中VP初篩檢測。

Sakata等[35]以TLH異源表達蛋白為抗原制備MAbs，特異性測試結果表明該抗體對78 株供試VP均呈陽性，而對53 株非VP菌中的5 株存在假陽性反應；以此MAbs建立ELISA法可在24 h內(nèi)實現(xiàn)模擬染菌及市售生鮮海產(chǎn)品中低至100 MPN/g VP的快速檢測。通過噬菌體展示技術，Wang Rongzhi等[36]借由基因工程表達TLH蛋白，制備了一株高親和性單鏈抗體scFv-LA3，可有效中和TLH誘發(fā)的細胞毒性。近期，Chen Yaoguang等[37]還有效結合了抗體的特異性、親和力以及GFP的可視性，制備融合GFP的抗VP-TLH熒光抗體并解析了其晶體結構，有望為生物體內(nèi)VP實時、原位檢測提供有力工具。

除了以基因工程表達毒素蛋白為免疫原外，也有研究者直接從菌體中提取溶血素作為抗原。如楊靖亞等[38]提取純化高純度VP-TDH作為免疫原，通過小鼠腹腔先后進行5 次免疫，運用常規(guī)間接ELISA法篩選雜交瘤細胞，采取有限稀釋法進行細胞亞克隆，最終獲得一株針對副溶血弧菌TDH高特異性、親和力、穩(wěn)定分泌MAbs的雜交瘤細胞株T9H4。

2 免疫學方法在食源性VP檢測中的應用

在獲得理想效價及高特異性抗體的基礎上，國內(nèi)外研究者不斷致力于發(fā)掘各類免疫學方法用于食品中VP的檢測，有效縮短檢測時間、提高方法靶向性并改善其現(xiàn)場適用性，為食品安全檢測推波助力。

2.1 IMS用于VP富集

微生物檢測的關鍵限速步驟在于增菌。IMS法有效結合抗原-抗體識別反應的特異性和磁珠的磁場響應性，實現(xiàn)復雜基質(zhì)或增菌液中目標菌的直接分離、富集，有效消除基質(zhì)干擾、提高檢測效率，在食源性致病菌的檢測中廣受青睞[39-40]。

結合聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）、發(fā)酵實驗、顯色培養(yǎng)基等下游檢測技術，IMS法已被廣泛用于食品中VP的檢測。VP神奈川現(xiàn)象與該菌腸道致病性密切相關，但常規(guī)微生物培養(yǎng)方法難以從食品及環(huán)境樣本中分離出TDH陽性VP菌。為克服上述缺陷，Hara-Kudo[41]和張凡非[42]等分別嘗試通過以K6抗體包被的免疫磁珠富集水生貝類和海水、海泥和蛤肉中的O3:K6型VP，結果表明經(jīng)富集、濃縮后相對于未處理對照，其神奈川陽性VP的分離率顯著提高。通過采用VP特異性抗體包被磁珠吸附分離，Seo等[43]將芯片ELISA法檢測樣品中VP的前增菌時間從大于24 h縮至小于9 h，實現(xiàn)在一個工作日內(nèi)完成檢驗，為及時處置染菌食品、防止其流通擴散發(fā)揮重要作用。以自制高特異性鞭毛蛋白MAbs[30]偶聯(lián)免疫磁珠，北京出入境檢驗檢疫局曾靜帶領的團隊就IMS在生蠔等海產(chǎn)品中VP的分離、富集及其與環(huán)介導等溫擴增技術（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）、PCR等下游核酸檢測技術的結合應用進行了系列的研究[44-46]，對103～105CFU/mL VP的富集率高達74%～87%，未增菌條件下可檢測菌濃度低至140 CFU/mL的純菌或1.9×103CFU/mL的染菌生蠔，縮短增菌時間至8 h仍可檢出VP濃度低至0.19 CFU/g的生蠔或2 CFU/25 g的扇貝。

除了定性檢測，基于IMS的下游檢測技術還被用于VP的計數(shù)。如為定量檢測環(huán)境中低含量（＜1%）的TDH陽性VP，日本京都大學Tanaka[47]和Escalante-Maldonado[48]等建立并優(yōu)化了基于IMS富集技術的最大可能數(shù)（most probable number，MPN）法，用于海產(chǎn)品中致病性VP的準確定量，方法適用于世界各氣候帶不同染菌量水產(chǎn)品的檢測；此外，吳世嘉等[49]分別以包被VP抗體的納米磁珠和上轉(zhuǎn)熒光顆粒為捕獲、信號探針，構建了“捕獲探針-VP-信號探針”三明治結構式免疫識別及檢測方法。通過熒光激發(fā)可實現(xiàn)VP的定性及定量檢測，靈敏度達103CFU/mL，上轉(zhuǎn)熒光強度與目標菌濃度在5×103～5×105CFU/mL范圍內(nèi)呈良好線性關系。

綜上所述，IMS技術可有效提高食品中VP的檢測效率，其應用的核心在于高特異性及親和力免疫磁珠的制備。目前國內(nèi)磁珠市場仍以瑞士Dynal等品牌為主流，亟需開發(fā)我國自主知識產(chǎn)權的高性能免疫磁珠產(chǎn)品。就VP免疫磁珠而言，國內(nèi)研究者也開展了一定的工作：如黃韻儀[50]和蘇晨曦[51]等篩選特異性抗體、磁珠粒徑，優(yōu)化交聯(lián)條件（活化劑、偶聯(lián)方法、時間和溫度等），獲得了捕獲性能理想、特異性高的磁珠，為IMS在VP檢測中的應用提供了良好資源。

另外，也有研究者不借助納米磁珠，而是直接將VP抗體包被于PCR管上用于捕獲樣品中的靶標菌，結合下游VP特異性基因擴增反應，亦可有效提高檢測靈敏度[52-53]。2.2 酶聯(lián)免疫吸附測定

ELISA是將抗原、抗體的特異性免疫反應與酶的高效催化反應性有機結合起來的一項技術，具有特異性強、敏感性高、高通量、檢測時間短等優(yōu)點。借由多種VP特異性抗體，以顏色、熒光或電化學信號變化為指標，ELISA技術在食品VP檢測中發(fā)揮重要作用。

早在1985年，Honda等[54]比較了3 種形式ELISA檢測VP-TDH的效力，結果證實僅夾心型ELISA可高效檢測VP純菌及陽性增菌液，甚至可檢出在傳統(tǒng)我妻氏培養(yǎng)基上神奈川現(xiàn)象陰性的致病性VP菌。此后，該團隊又進一步優(yōu)化ELISA方案，以尼龍膜為支持介質(zhì)實現(xiàn)了VP中兩種關鍵溶血素——TDH和TRH的同步可視化檢測[55]。王文等[56]將生物素-親和素系統(tǒng)引入斑點ELISA，利用其放大效應提高檢測靈敏度10～100 倍，方法特異性高、準確、快速，對311 份魚樣品檢測結果與傳統(tǒng)方法無顯著性差異，可用于大量魚樣本中VP的快速檢測。此后，國內(nèi)外研究者以溶血素或全菌制備特異性抗體，通過間接競爭ELISA或雙抗體夾心ELISA實現(xiàn)食品中VP或致病性VP的快速檢測，經(jīng)優(yōu)化后檢測限多可達103～104CFU/mL[25,34,57-60]。其中Kumar等[34]建立的ELISA法雖以TRH融合蛋白抗體為探針，但與TDH陽性VP存在交叉反應，無法區(qū)分兩種溶血素攜帶菌。

除了上述傳統(tǒng)意義上基于酶-底物顯色反應的ELISA法外，Wang Ling等[61]首次以膠體金和Cd/Te量子點分別標記VP-PAbs和-MAbs，構建量子點探針-金標抗體-樣品的“三明治”型免疫反應體系，基于膠體金可猝滅量子點熒光的原理建立了VP熒光猝滅免疫測定法。該方法特異性強、靈敏，熒光強度與純VP濃度對數(shù)線性相關度達99.7%，可用于食品中VP的快篩及定量檢測。

2.3 免疫層析檢測

盡管ELISA因其高靈敏性及準確性被譽為免疫檢測的金標準，但其實施需要酶標儀等檢測儀器、嚴格的環(huán)境條件及專業(yè)操作人員，不適用于現(xiàn)場、即時檢測。ICA將ELISA方案整合至層層疊加的試紙條上，為現(xiàn)場便攜式免疫檢測提供了良好的平臺[62]。

以膠體金、磁性顆粒、熒光基團等為標記，借由顏色、磁性、電化學、熒光等信號指示，國內(nèi)外研究者開發(fā)了多種ICA用于食品中VP的快速檢測。如Guo Ailing等[63]以滅活全菌免疫兔子制備了VP特異性MAbs和PAbs，前者與膠體金交聯(lián)作為信號顯示抗體，后者固定于T線上作為捕獲抗體，制備了雙抗體夾心ICA。產(chǎn)品高度特異，可在15 min內(nèi)肉眼直讀濃度不小于105CFU/mL的純菌或經(jīng)10 h增菌后的食品樣本信號，其保質(zhì)期在37 ℃條件下可長達90 d。傳統(tǒng)膠體金標記ICA通過金顆粒聚集效應顯色而實現(xiàn)信號解析，其信號強度有一定的局限性，可能導致誤判。為克服上述不足，王廣峰等[64]通過添加金標二抗進一步提高陽性樣品檢測線上的金顆粒濃度，有效增強VP試紙條的顯色度。此外，除了上述采用MAbs/PAbs組合建立的ICA外，也可采用針對不同抗原表位的兩種MAbs，以此構建的免疫檢測特異性更強，但成本高。如以VP的F0F1ATP合成酶δ-亞基的兩個不同抗原表位制備兩種高特異性MAbs并建立夾心型膠體金ICA，Sakata等[65]實現(xiàn)了VP菌落的快速、簡易化鑒定以替代冗繁的傳統(tǒng)生化反應，特異性檢測結果顯示其對多達218 株供試菌株表現(xiàn)出100%準確檢測。

膠體金標記ICA以肉眼判讀顏色信號實現(xiàn)結果解析，僅可用于靶標物的定性及半定量檢測，難以準確定量。近年來，許多新型標記方式被不斷發(fā)掘，結合儀器判讀ICA信號實現(xiàn)更精確的定量檢測[66]。Liu Yingying等[67-68]以磁性納米顆粒代替膠體金標記抗體，以磁信號閱讀儀替代肉眼讀取信號，優(yōu)化并建立了雙抗體夾心式磁性ICA，可在10 min內(nèi)檢出低至1.58×102CFU/mL的VP，有效增敏兩個數(shù)量級，對新鮮海產(chǎn)品從前處理至信號讀取的整個檢測流程僅需4.5 h。

2.4 免疫傳感器

利用抗原、抗體結合前后引發(fā)的質(zhì)量、光學、熱學及電化學等信號的變化，國內(nèi)外研究者研發(fā)出多種免疫傳感器用于食源性病原菌檢測[69]。

趙廣英等[70-72]將VP抗體摻入Nafion、硫堇和納米金、瓊脂糖和納米金、殼聚糖-SiO2雜化膜，吸附于電極表面制備免疫電極，連接循環(huán)伏安表征設備研制電化學免疫傳感器。通過監(jiān)測免疫反應前后電流信號的變化，上述傳感器可特異、穩(wěn)定、準確地檢測VP，檢測限為103～104CFU/mL。上述免疫傳感器的研制仍停留在初步優(yōu)化階段，未測試其對實際食品樣本的檢測效力。近期，Sha Yuhong等[73]將化學發(fā)光試劑N-（4-氨基丁基）-N-乙基異魯米諾（N-(4-aminobutyl)-N-ethylisoluminol，ABEI）和未標記的VP抗體固定于氧化石墨烯上制備電化學發(fā)光免疫傳感器，可用于海水及海產(chǎn)品中VP的定性及定量檢測，其線性定量范圍寬（10～108CFU/mL），可檢測染菌濃度低至5 CFU/g的水產(chǎn)品及5 CFU/mL的海水，遠優(yōu)于現(xiàn)有的電化學免疫傳感器、PCR、LAMP及免疫熒光顯微術等VP快檢方法。石墨烯材料良好的電子傳遞能力及其二維結構保障的較大比表面積使得吸附于其上的ABEI充分發(fā)揮其電化學活性，從而大大提高了檢測靈敏度。

2.5 免疫熒光顯微術

以丫啶橙、異硫氰酸等熒光染料標記二抗，借助熒光顯微鏡，可實現(xiàn)食品中VP的免疫檢測。如于光等[74]建立了適用于魚貝類中VP檢測的丫啶橙免疫熒光菌團培養(yǎng)-沉淀法，檢測限為105CFU/mL，特異性強，對市售351 份海產(chǎn)魚貝類樣品中VP定性檢測結果與常規(guī)培養(yǎng)法無顯著性差異，全程可在27 h內(nèi)完成，簡便快速。以2 種外膜蛋白為抗原制備VP抗體，結合異硫氰酸標記二抗，Chen等[75]亦以IFM檢測海蠣中的VP，經(jīng)18 h預增菌后該方法可檢出染菌濃度低至1.7 CFU/g的樣品。此外，間接IFM還被用于檢測活的非可培養(yǎng)狀態(tài)VP[76]及凡濱對蝦紅體病病原檢測[77]。

2.6 其他免疫技術的應用

除了上述IMS、ELISA、ICA等主流免疫檢測法外，還有諸如乳膠凝集反應[29,78-79]、免疫共沉淀[80]、流式細胞術[81]等基于抗原-抗體特異性結合反應的方法被用于VP的鑒定，方法靈敏度高、特異性強，檢測效果與傳統(tǒng)方法高度契合。后續(xù)隨著抗體制備技術及免疫方法的不斷發(fā)展，必將有更多免疫檢測技術被引入以實現(xiàn)食源性VP更精準、快速的檢測。

3 結 語

VP因其嗜鹽性，主要污染各類海產(chǎn)品[82]，但亦出現(xiàn)于肉類等產(chǎn)品中[83-84]，甚至冷凍保存食品也成為傳播致病性VP的媒介[85]。VP污染食品門類廣，加之貿(mào)易全球化趨勢不斷加強，VP致食物中毒事件數(shù)量不斷攀升，嚴重威脅人類健康。

當前食源性VP的檢測仍主要依賴傳統(tǒng)培養(yǎng)法，不僅操作冗繁，從增菌、分離至生化鑒定全程耗時3～5 d[86]，而且因VP與其他弧菌在形態(tài)及生化性狀上的相似性還可能導致結果誤判[87-88]。近年來發(fā)展起來的以PCR為基礎的分子檢測技術具有快速、特異、靈敏等優(yōu)點，為食品中VP的鑒定提供了可選方案，但其應用首先需制備樣品DNA且擴增反應易受到食品基質(zhì)的干擾，不適用于現(xiàn)場檢測，且檢測結果亦無法區(qū)分死活菌。而以特異性抗體為基礎，借助抗原-抗體特異性識別反應進行檢測的免疫學方法則不僅在檢測效率、特異性上具有與分子學方法相媲美的優(yōu)勢，而且在現(xiàn)場適用性、免提取等前處理簡便性、高通量等方面顯現(xiàn)突出優(yōu)勢，有效彌補了傳統(tǒng)培養(yǎng)法的不足，為食品中VP的快速鑒定、分型提供了理想平臺。

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Recent Advances in Application of Immunological Methods in Detection of Foodborne Vibiro parahaemolyticus

XIE Xueqin1, LIU Zhou2,*
(1. Xiamen Products Quality Supervision & Inspection Institute, Xiamen 361004, China; 2. Depatment of Pharmacy, Xiamen Medical College, Xiamen 361008, China)

The bacterial pathogen Vibrio parahaemolyticus (VP) can pollute a variety of foods, especially seafoods. Foodborne VP has surged as the primary pathogen in food safety incidents in China. Compared to traditional cultural methods and modern molecular techhniques, specific antigen-antibody recognition-based immunological identification and subtyping strategies exhibit superiority in efficiency, specificity, on-field applicability and simplicity of pre-treatment. In this paper, the category and preparation methods of anti-VP antibodies at present are outlined. Furthermore, we review the current applications of immunological methods such as immunomagnetic separation (IMS), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), immunochromatographic assay (ICA), immunosensor and immunomicroscopy in the detection of foodborne VP, which will provide useful references for rapid detection of VP.

foodborne Vibrio parahaemolyticus; immunomagnetic separation (IMS); enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA); immunochromatographic assay (ICA); immunosensor; immunofluorescence microscopy (IFM)

10.7506/spkx1002-6630-201713048

TS207.4

A

1002-6630（2017）13-0299-07

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XIE Xueqin, LIU Zhou. Recent advances in application of immunological methods in detection of foodborne Vibiro parahaemolyticus[J]. Food Science, 2017, 38(13): 299-305. (in Chinese with English abstract)

10.7506/spkx1002-6630-201713048. http://www.spkx.net.cn

2016-05-26

廈門市科技計劃項目（3502Z20154086）；福建省自然科學基金青年科技人才創(chuàng)新項目（2014J01118）

謝雪欽（1982—），女，高級工程師，博士，研究方向為食品安全檢測及風險評估。E-mail：cherryxie36@163.com

*通信作者：劉舟（1983—），男，副教授，博士，研究方向為食品安全檢測及風險評估。E-mail：lau_joe@163.com