薛書銀，李 莎，張夢丹，高 穎，黃惠麗，謝 銘，陳可塑，劉福明，陳 龍，4

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院國家科技部規(guī)范化中藥藥理實驗室，江蘇南京 210023；2.南京軍區(qū)總醫(yī)院干部病房呼吸科，江蘇南京 210002；3.南京中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院（江蘇省中醫(yī)院）心臟內(nèi)科，江蘇南京 210029；4.泰州中國醫(yī)藥城中醫(yī)藥研究院，江蘇泰州 225300）

去乙酰毛花苷和米力農(nóng)對大鼠血流動力學(xué)作用的比較

薛書銀1，李 莎1，張夢丹1，高 穎1，黃惠麗1，謝 銘1，陳可塑2，劉福明3，陳 龍1，4

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院國家科技部規(guī)范化中藥藥理實驗室，江蘇南京 210023；2.南京軍區(qū)總醫(yī)院干部病房呼吸科，江蘇南京 210002；3.南京中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院（江蘇省中醫(yī)院）心臟內(nèi)科，江蘇南京 210029；4.泰州中國醫(yī)藥城中醫(yī)藥研究院，江蘇泰州 225300）

目的 研究強心苷類正性肌力代表藥去乙酰毛花苷與非強心苷類正性肌力代表藥米力農(nóng)的心血管動力學(xué)作用特點，分析其長期使用死亡率差別的可能機制。方法 ①大鼠在體壓力-容積環(huán)分析：經(jīng)左側(cè)頸外靜脈緩慢推注去乙酰毛花苷0.17 mg·kg-1或米力農(nóng)0.78 mg·kg-1，Miller導(dǎo)管記錄大鼠壓力-容積環(huán)變化及動脈壓。②大鼠離體心臟左心室收縮壓測定：實驗按正常灌流液→0.01→0.1→1 μmol·L-1濃度梯度灌流去乙酰毛花苷，或正常灌流液→0.1→1→10 μmol·L-1灌流米力農(nóng)。③大鼠心肌細胞鈣釋放測定：測定去乙酰毛花苷或米力農(nóng)各10 μmol·L-1加藥前后鈣釋放。結(jié)果①在體實驗表明：去乙酰毛花苷顯著增加大鼠動脈壓與心室收縮末期壓、心輸出量、搏出功、心室收縮末期壓最大上升速率和心室收縮彈性；降低舒張彈性及心室收縮末期容積；延長動脈收縮壓回復(fù)50%的時間；縮短主動脈瓣關(guān)閉時間（P＜0.05）。米力農(nóng)顯著降低大鼠動脈壓與室收縮末期壓、降低心室收縮及舒張末期容積、搏出功；增加每搏輸出量、射血分數(shù)、輸出量、心率、心室收縮末期壓與舒張彈性；縮短心室內(nèi)壓及動脈收縮壓回復(fù)50%的時間（P＜0.05）。②兩者均能濃度依賴性地增加離體大鼠心臟收縮的發(fā)展力及收縮壓最大上升速率，但去乙酰毛花苷減慢心率，而米力農(nóng)增加心率（P＜0.05）。③兩者均能增加大鼠心肌細胞鈣釋放幅值，米力農(nóng)還能縮短鈣回吸收時間（P＜0.05）。結(jié)論 去乙酰毛花苷具有正性肌力作用，而對外周阻力無明顯影響。米力農(nóng)發(fā)揮正性肌力作用，但有明顯的擴張血管作用，且明顯增加心率；這些作用可能是米力農(nóng)長期使用導(dǎo)致死亡率增加的原因。

去乙酰毛花苷；米力農(nóng)；壓力-容積環(huán)；鈣釋放

心力衰竭（heart failure，HF）是各種心臟疾病導(dǎo)致心功能不全的一種臨床綜合征，主要表現(xiàn)為心肌收縮力下降、心室舒張末壓升高導(dǎo)致心排出量降低不能滿足機體代謝的需要，同時伴隨著肺淤血與周圍循環(huán)灌注不足［1］。正性肌力藥是治療心衰有效藥物之一，其種類繁多。傳統(tǒng)的正性肌力藥物主要包括強心苷類，以去乙酰毛花苷（deslanoside，Na+-K+-ATP酶抑制劑）為代表，非苷類包括β受體激動劑、磷酸二酯酶抑制劑及鈣增敏劑等，以米力農(nóng)（milrinone，磷酸二酯酶抑制劑）為代表［2］。去乙酰毛花苷由于作用快，適用于急性心衰或心衰急性發(fā)作。米力農(nóng)適用于強心苷、利尿劑及血管擴張劑治療效果不佳的各種原因引起的急、慢性頑固性充血性心衰［3］。但臨床上去乙酰毛花苷易引起心律失常，而米力農(nóng)長期使用會增加患者的死亡率［4］。因此，人類從未停止開發(fā)新的單分子藥物治療心衰。國際上正在研究的抗心衰正性肌力藥物的作用靶點包括：蘭尼堿受體穩(wěn)定劑、Na+-K+-ATP酶抑制劑及肌漿網(wǎng)鈣泵激動劑、心肌肌球蛋白活化劑、能量調(diào)節(jié)劑、腺病毒介導(dǎo)的鈣泵基因轉(zhuǎn)染和硝?；w等［2］。

盡管在單分子、單靶點正性肌力藥物開發(fā)過程中付出巨大努力，但臨床仍然缺乏安全有效的正性肌力藥物?？赡艽嬖趦蓚€原因：①心衰是一個綜合征，涉及到神經(jīng)-體液對心血管調(diào)控的不準確性；血管彈性、區(qū)域收縮及舒張的差異化、以及對神經(jīng)體液應(yīng)答的敏感性等失調(diào)；腎對水鹽選擇性排泄功能失調(diào)。這就決定了單純的正性肌力藥物無法準確治療心衰，事實上，臨床治療心衰總是聯(lián)合用藥。②正性肌力藥物效應(yīng)的廣泛性是導(dǎo)致其臨床上出現(xiàn)各種不良反應(yīng)的基礎(chǔ)。盡管去乙酰毛花苷和米力農(nóng)作用的靶點分別為Na+-K+-ATP酶及磷酸二酯酶，但這兩種酶不僅僅存在于心肌，其作用靶點的特異性雖高，但其效應(yīng)卻極其廣泛。因此，目前國際上出現(xiàn)了另外一種研發(fā)抗心衰藥物的思路，即采用聯(lián)合臨床使用≥2的單分子藥物進行復(fù)方組合。最有代表性的案例，諾華2014年11月Ⅲ期臨床研究表明，纈沙坦（Valsartan，血管緊張素Ⅱ受體抑制劑）和沙庫必曲（Sacubitril，AHU-377啡肽酶抑制劑）的復(fù)方組合Entresto（LCZ-696），可降低20%心臟病死亡率，降低16%全因死亡率，住院率下降16%，2015年7月被批準上市［5-6］。

基于國際上對抗心衰及正性肌力藥物研發(fā)的復(fù)方組合新思路，本研究擬分析強心苷和非強心苷類代表性藥物去乙酰毛花苷及米力農(nóng)對心臟動力學(xué)特點。以此實現(xiàn)兩個基本目標，其一是：與去乙酰毛花苷相比，米力農(nóng)長期使用為什么導(dǎo)致患者的死亡率增加；以及為什么在治療某些頑固性心衰時，米力農(nóng)具有較好的療效［7］。其二是：在藥物開發(fā)過程中，如何選擇合并用藥，既能保持二者的正性肌力作用又能克服其不良反應(yīng)［8］。

20世紀70年代，人們認為心衰的實質(zhì)是血流動力學(xué)障礙，因此正性肌力藥物主要從血流動力角度研究，但此后大規(guī)模的臨床隨機雙盲對照實驗將死亡率作為心衰研究終點發(fā)現(xiàn)正性肌力藥物無法有效改善預(yù)后，死亡率較高等問題。前瞻性隨機米力農(nóng)存活率評估研究（Prospective Randomized Milrinone Survival Evaluation，PROMISE）［9］中發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，米力農(nóng)治療組死亡率提高28%。國外PROMISE臨床試驗也證實，長期使用米力農(nóng)口服液死亡率明顯增加［10］。1997年，由洋地黃研究組（Digitalis Investigation Group，DIG）［11］對強心苷藥理作用進行實驗研究，發(fā)現(xiàn)洋地黃類藥物是唯一不增加死亡率的正性肌力藥物。同樣研究［12］表明，應(yīng)用強心苷治療可顯著改善腎功能，減少死亡率及住院時間。上述兩藥分別為強心苷類與非強心苷類正性肌力藥物的代表藥，本研究主要從在體大鼠壓力-容積關(guān)系、離體心臟左心室收縮力變化及單個心肌細胞鈣瞬變角度剖析這兩類藥物的作用特點，以期能揭示正性肌力藥物致死性的內(nèi)在因素，為臨床合理用藥及新藥開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級雄性SD大鼠（南京中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心），體質(zhì)量250～300g，實驗動物生產(chǎn)許可證：SCXK（蘇）2013-0011；動物合格證編號：201511368。

1.2 藥品和試劑

去乙酰毛花苷注射液規(guī)格為2 mL（0.4 mg），國藥準字H32021538；乳酸米力農(nóng)注射液規(guī)格為5 mL（5 mg），國藥準字H10970051（泰州市人民醫(yī)院），其余所需部分試劑（美國Sigma公司），部分試劑為國產(chǎn)分析純。

1.3 主要儀器

PowerLab8/35多導(dǎo)生理記錄儀（澳大利亞AD Instruments）；SPR-901 Millar放大器，心室內(nèi)壓和壓力容積導(dǎo)管（美國Millar公司）；IX53倒置顯微鏡（日本Olympus公司）；（ZYLA-5.5-CL3）科研級高靈敏致冷CCD（英國Andor公司）；VC3-8灌流給藥系統(tǒng)（美國ALA公司）；其余大部分儀器（成都儀器廠）。

1.4 在體大鼠心臟及血管血流動力學(xué)參數(shù)記錄［13］

按照臨床使用說明，去乙酰毛花苷成人靜脈注射最大用量為1.6 mg。按照平均成人的體質(zhì)量60 kg算，成人用量為0.027 mg·kg-1。人與大鼠按照體表面積轉(zhuǎn)化的倍數(shù)為6.2倍［14-15］，去乙酰毛花苷大鼠的臨床等量劑量為0.17 mg·kg-1。米力農(nóng)成人口服最大用量為7.5 mg，同樣計算的方法，米力農(nóng)大鼠的臨床等量劑量為0.78 mg·kg-1。

健康清潔級雄性SD大鼠，采用烏拉坦1 g·kg-1腹腔麻醉后仰臥位固定分離左側(cè)頸靜脈及右側(cè)頸總動脈，定標Millar壓力容積導(dǎo)管后自右頸總動脈插入左心室（術(shù)中根據(jù)生理記錄儀壓力波形變化判斷導(dǎo)管位置），藥物經(jīng)左側(cè)頸靜脈緩慢推注，記錄左室壓力-容積環(huán)（P-V loop）及主動脈壓。實驗結(jié)果采用AD Instruments的Labchart 8軟件分析。實驗結(jié)束后自頸靜脈推注30%高滲鹽水20～50 μL及取自身血液進行容積定標。血流動力學(xué)指標包括：左室搏出功（stroke work，SW）、心排出量（cardiac output，CO）、每搏輸出量（stroke volume，SV）、收縮末期容積（end-systolic volume，Ves）、舒張末期容積（end-diastolic volume，Ved）、收縮末期壓力（end-systolic pressure，Pes）、舒張末期容積（enddiastolic pressure，Ped）、心率（heart rate，HR）、射血分數(shù)（ejection fraction，EF）、左室壓力最大上升速率（peak rate of rise of left pressure，+dp：dtmax）、左室收縮彈性（end-systolic elastance，Ees）或左室收縮末期壓力-容積關(guān)系曲線斜率（the slope of the left ventricular end-systolic P-V relation?ship，ESPVR）、左室舒張末期彈性（end-diastolic elastance，Eed）或左室舒張末期壓力-容積關(guān)系曲線斜率（the slope of the left ventricular end-diastolic P-V relationship，EDPVR）、收縮壓（systolic blood pressure，SBP）、舒張壓（diastolic blood pressure，DBP）、左室壓回復(fù)50%的時間（left ventricular pres?sure durations at 50%full recovery level，LVPD50）、動脈收縮壓回復(fù)50%的時間（systolic blood pres?sure durations at 50%full recovery level，SBPD50）及主動脈瓣關(guān)閉時間（aortic valve closing time，AVCT）。采用快速阻斷大鼠下腔靜脈方法記錄P-V loop變化曲線，各心室收縮末期壓力進行直線回歸，形成ESPVR。同樣，各舒張末期的壓力進行直線回歸，形成EDPVR。分析左室收縮末期彈性（end-systolic elastance，Ees）及左室舒張末期彈性（end-diastolic elastance，Eed）。

1.5 離體大鼠左室收縮壓測定［16］

動物麻醉方法同1.4在體實驗。開胸迅速取出心臟，置于0～4℃無鈣灌流液中使其停搏，修剪分離主動脈，行主動脈插管后，采用Langendorff裝置，充氧（95%O2+5%CO2）條件下，灌流系統(tǒng)經(jīng)主動脈逆行離體心臟灌流，溫度為（37.5±0.5）℃，灌流壓為90 cmH2O（1 cmH2O=0.098 kPa）。將壓力感受器探頭選用插管法經(jīng)左房插入左室，壓力換能器與RM6240型多道生理信號采集處理系統(tǒng)相連用于記錄左室收縮曲線。藥物溶于20 mL有鈣灌流液液中。記錄指標包括：HR、左室發(fā)展壓（left ven?tricular developed pressure，LVDP）和+dp：dtmax。有鈣灌流液組成為（mmol·L-1）：NaCl 117，KCl 5.7，CaCl21.8，MgCl2·6H2O 1.7，NaHCO34.4，HEPES 20，葡萄糖20，?；撬?0，pH用NaOH調(diào)至7.30。

1.6 離子影像測定大鼠左室心肌細胞鈣瞬變

動物及麻醉同1.4在人體實驗。開胸迅速取出心臟，置于0～4℃無鈣灌流液中使其停搏。修剪分離主動脈，將心臟掛于改良Langendorff逆行性灌流系統(tǒng)裝置上，在充氧（95%O2+5%CO2），溫度為（37.5±0.5）℃，灌流壓90 cmH2O（1cmH2O= 0.098 kPa）條件下經(jīng)主動脈逆行灌流無鈣臺氏液。待心臟變軟松弛后，用含酶（膠原酶Ⅱ型2 g·L-1+胰蛋白酶0.1 g·L-1）無鈣灌流液20 mL反復(fù)灌流30 min至心臟膨大、松弛后，換用KB液沖洗5 min終止消化。取下心臟后，在盛有KB液的玻璃表面皿中將其充分剪碎，用直徑200 μm尼龍網(wǎng)過濾得到細胞懸液。細胞懸液靜置，KB液沖洗3次后加入鈣熒光指示劑Fluo-3（5 μmol·L-1），37℃避光共孵育30 min。將孵育好的心肌細胞置于灌流槽中用細胞外液持續(xù)灌流沖洗。局部場刺激由刺激器通過一對刺激電極（末端為裸露的白金絲）以10 V，0.8 Hz強度的脈沖電刺激加于心肌細胞兩側(cè)，刺激細胞收縮。單色激發(fā)光源發(fā)出激發(fā)光，通過耦合系統(tǒng)引入熒光顯微鏡，并聚焦到細胞平面，激發(fā)細胞中的熒光探針發(fā)出熒光，采用空氣冷卻CCD相機采集并記錄熒光信號。激發(fā)波長488 nm，吸收波長510 nm。分析鈣釋放幅值及回復(fù)90%的時間（Ca2+transient during at 90%full recovery level，CTD90）。KB液組成（mmol·L-1）：KCl 25，NaH2PO410，L-谷氨酸70，?；撬?0，EGTA 0.5，HEPES 5，葡萄糖11，KOH 85，pH用KOH調(diào)至7.40。

1.7 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 去乙酰毛花苷和米力農(nóng)對在體大鼠血流動力學(xué)參數(shù)的影響

2.1.1 對大鼠左室收縮動力學(xué)的作用

去乙酰毛花苷0.17 mg·kg-1及米力農(nóng)0.78 mg·kg-1對左室收縮動力學(xué)影響的代表性曲線見圖1和圖2，表1為其動力學(xué)參數(shù)結(jié)果。兩藥均能顯著增加大鼠心肌收縮力，如SW（P＜0.05）及CO（P＜0.05）。其增加心肌收縮力的作用均以顯著增加Ees（P＜0.05）作為基礎(chǔ)，Ees是不依賴前負荷為條件的能反映心肌收縮力內(nèi)在活性的重要指標。兩者除均增加心肌收縮力外，還表現(xiàn)出明顯的差異性動力學(xué)特點，去乙酰毛花苷以顯著增加Pes（P＜0.05），+dp：dtmax（P＜0.05）及Eed（P＜0.05）為主，而米力農(nóng)以顯著增加SV（P＜0.05）及HR（P＜0.05），顯著降低Ves（P＜0.05），Ved（P＜0.05），Pes（P＜0.05）及Eed（P＜0.05）為特征。兩者動力學(xué)的差異主要是米力農(nóng)以降低外周阻力而降低動脈壓和增加心率為特點；而去乙酰毛花苷無米力農(nóng)的這些外周特征。去乙酰毛花苷增加Eed而米力農(nóng)降低Eed，其原因可能是去乙酰毛花苷增加心肌細胞舒張期鈣濃度，降低其舒張彈性。

Fig.1 Representative recordings of steady-state left ventricular pressure-volume（P-V）loops before and after administration of deslanoside 0.17 mg·kg-1（A）and milrinone 0.78 mg·kg-1（B）in anesthetized rats.

Fig.2 Original recordings of end-systolic pressure-volume relationship（ESPVR）and end-diastolic pressurevolume relationship（EDPVR）before（A，C）and after administration of deslanoside 0.17 mg·kg-1（B）and milri?none 0.78 mg·kg-1（D）in anesthetized rats.

Tab.1 Effects of deslanoside 0.17 mg·kg-1and milrinone 0.78 mg·kg-1on kinetic parameters of left ventricular contractilities in anesthetized rats

2.1.2 對大鼠左室和動脈壓力及收縮速率的影響

表2結(jié)果顯示，去乙酰毛花苷顯著增加SBP（P＜0.05），DBP（P＜0.05）壓力，顯著延長SBPD50（P＜0.05），顯著縮短AVCT（P＜0.05）時間。米力農(nóng)顯著降低SBP（P＜0.05），DBP（P＜0.05），顯著縮短LVPD50（P＜0.05）及SBPD50（P＜0.05）時間。

Tab.2 Effect of deslanoside 0.17 mg·kg-1and milrinone 0.78 mg·kg-1on left ventricular and aortic blood pres?sure and their contractile velocities in anesthetized rats.

Fig.3 Representative recordings of rat left ventricular（A，B）pressure，aortic pressure（C，D）and aortic valve closing times（AVCT）before and after administration of deslanoside 0.17 mg·kg-1and milrinone 0.78 mg·kg-1in anesthetized rats.

2.2 去乙酰毛花苷和米力農(nóng)對大鼠離體心臟收縮壓影響

表3結(jié)果顯示，去乙酰毛花苷顯著降低大鼠離體心臟HR（P＜0.05），呈濃度依賴性增加LVDP（P＜0.05）及+dp：dtmax（P＜0.05），而米力農(nóng)顯著增加HR（P＜0.05），呈濃度依賴性增加LVDP（P＜0.05）及+dp：dtma（P＜0.05）。本實驗表明，與在體實驗不同，去乙酰毛花苷降低離體心臟的心率。米力農(nóng)對在體及離體心臟的心率均增加，這種作用是獨立于神經(jīng)體液的調(diào)控。

2.3 去乙酰毛花苷和米力農(nóng)對大鼠左心室心肌細胞鈣釋放的影響

圖4顯示，去乙酰毛花苷10 μmol·L-1心肌細胞鈣釋放從正常灌流液組（1.77±0.12）顯著增加到（1.87±0.13）（P＜0.05）；米力農(nóng)10 μmol·L-1心肌細胞鈣釋放從正常灌流液組（1.70±0.06）顯著增加到（1.78±0.06）（P＜0.05）。去乙酰毛花苷10 μmol·L-1對CTD90無顯著影響（從標準化的100±5增加到109±7，而米力農(nóng)10 μmol·L-1顯著縮短CTD90，從標準化的100.0±2.0縮短到91.2±0.9（P＜0.05）。

Tab.3 Effect of deslanoside and milrinone on left ventricular contractility in isolated rat hearts.

Fig.4 Representative traces of intracellular Ca2+transients from left ventricular myocytes of rats before and after deslanoside and milrinone.B：the results of Ca2+transient amplitudes with statistics.C：the Ca2+transient at 90%full recovery level（CTD90）.，n=4.＊P＜0.05，compared with corresponding before treatment status by pairedttest.

3 討論

本研究表明，去乙酰毛花苷和米力農(nóng)均能增加在體及離體大鼠心臟的收縮力，以及心肌細胞鈣釋放的幅值，但兩者對大鼠心臟收縮、血壓及心肌細胞鈣釋放又存在明顯的區(qū)別。這些主要區(qū)別表現(xiàn)為：①去乙酰毛花苷對在體大鼠心率無明顯作用，但降低離體心臟心率，表明其維持在體大鼠心率不變依賴于神經(jīng)體液；米力農(nóng)對在體及離體大鼠心率均增加，這種作用獨立于神經(jīng)體液調(diào)控。②去乙酰毛花苷增加在體的室內(nèi)壓、動脈收縮壓和舒張壓，增加離體心臟的收縮壓；米力農(nóng)降低在體的室內(nèi)壓、動脈收縮壓和舒張壓，但能增加離體心臟的收縮壓，表明米力農(nóng)有明顯降低血管外周阻力的作用。③米力農(nóng)具有更明顯的增加射血分數(shù)的作用，其主要原因是降低外周阻力的作用。④去乙酰毛花苷明顯延長動脈收縮壓下降50%的時間，因此縮短主動脈瓣關(guān)閉時間；米力農(nóng)縮短動脈收縮壓下降50%的時間。⑤雖然兩者均能增加鈣釋放的幅值，但米力農(nóng)明顯增加鈣回吸收的速度，表明其增加鈣泵活性明顯，與其增加cAMP含量機制相符，可能是治療頑固性心衰的基礎(chǔ)。

本研究最大特點是采用Millar導(dǎo)管同時測定壓力-容積環(huán)以及動脈壓，在記錄心室收縮動力學(xué)特點的同時，觀察動脈壓變化。但也存在不足之處，如未采取心衰大鼠模型進行2藥效價比較；米力農(nóng)能獨立于神經(jīng)體液調(diào)控而增加離體心率，其機制還未探索；也未對鈣釋放進行下一步研究，僅僅分析其幅值及回吸收的速率；對于是否有鈣泄漏未進行比較研究，因為鈣釋放的幅值是蘭尼堿受體的鈣釋放、泄漏以及鈣泵回吸收的總和。

綜上所述，去乙酰毛花苷能抑制Na+-K+-ATP酶，增加細胞內(nèi)鈣含量，實現(xiàn)其穩(wěn)定的正性肌力作用，而對外周阻力無明顯影響，對鈣離子回吸收的速率無明顯影響。米力農(nóng)通過抑制磷酸二酯酶增加胞內(nèi)的cAMP濃度實現(xiàn)其強勁的正性肌力作用，但有明顯的擴張血管而降低外周阻力作用，且明顯增加心率。米力農(nóng)擴張血管作用能導(dǎo)致心衰時有限的血容量無選擇性地分布于非重要的器官，間接增加心臟的負擔。此外，增加心率也進一步增加心臟的負擔。米力農(nóng)這些作用可能是其長期使用導(dǎo)致死亡率增加的原因。本研究可為臨床使用米力農(nóng)合用藥物（增加外周阻力及降低心率的藥物），實現(xiàn)其降低米力農(nóng)長期使用死亡率提供理論基礎(chǔ)。

［1］Ansari M，Massie BM.Heart failure：how big is the problem？Who are the patients？ What does the future hold？［J］Am Heart J，2003，146（1）：1-4.

［2］Hasenfuss G，Teerlink JR.Cardiac inotropes：current agents and future directions［J］.Eur Heart J，2011，32（15）：1838-1845.

［3］Jaiswal A，Nguyen VQ，Le Jemtel TH，F(xiàn)erdinand KC. Novel role of phosphodiesterase inhibitors in the management of end-stage heart failure［J］.World J Cardiol，2016，8（7）：401-412.

［4］Cuffe MS，Califf RM，Adams KF Jr，Benza R，Bourge R，Colucci WS，et al.Short-term intrave?nous milrinone for acute exacerbation of chronic heart failure：a randomized controlled trial［J］. JAMA，2002，287（12）：1541-1547.

［5］Sible AM，Nawarskas JJ，Alajajian D，Anderson JR. Sacubitril/valsartan：a novel cardiovascular combi?nation agent［J］.Cardiol Rev，2016，24（1）：41-47.

［6］Claggett B，Packer M，McMurray JJ，Swedberg K，Rouleau J，Zile MR，et al.Estimating the longterm treatment benefits of sacubitril-valsartan［J］. N Engl J Med，2015，373（23）：2289-2290.

［7］MrozekS，SrairiM，MarharF，DelmasC，Gaussiat F，Abaziou T，et al.Successful treat?ment of inverted Takotsubo cardiomyopathy after severe traumatic brain injury with milrinone after dobutamine failure［J］.Heart Lung，2016，45（5）：406-408.

［8］Kobayashi S，Susa T，Ishiguchi H，Myoren T，Murakami W，Kato T，et al.A low-dose β1-blocker in combination with milrinone improves intracellular Ca2+handling in failing cardiomyocytes by inhibi?tion of milrinone-induced diastolic Ca2+leakage from the sarcoplasmic reticulum［J］.PLoS One，2015，10（1）：e0114314.

［9］Packer M，Carver JR，Rodeheffer RJ，Ivanhoe RJ，DiBianco R，Zeldis SM，et al.Effect of oral milri?none on mortality in severe chronic heart failure. The PROMISE Study Research Group［J］.N Engl J Med，1991，325（21）：1468-1475.

［10］ Cusick DA，Pfeifer PB，Quigg RJ.Effects of intra? venous milrinone followed by titration of high-dose oral vasodilator therapy on clinical outcome and rehospitalization rates in patients with severe heart failure［J］.Am J Cardiol，1998，82（9）：1060-1065.

［11］Digitalis Investigation Group.The effect of digoxin on mortality and morbidity in patients with heart fail?ure［J］.N Engl J Med，1997，336（8）：525-533.

［12］ Testani JM，Brisco MA，Tang WH，Kimmel SE，Tiku-Owens A，F(xiàn)orfia PR，et al.Potential effects of digoxin on long-term renal and clinical out?comes in chronic heart failure［J］.J Card Fail，2013，19（5）：295-302.

［13］Radovits T，Oláh A，Lux á，Németh BT，Hidi L，Birtalan E，et al.Rat model of exercise-induced cardiac hypertrophy：hemodynamic characteriza?tion using left ventricular pressure-volume analysis［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2013，305（1）：H124-H134.

［14］ Chen L，Titch T，Luo Z，Xu Y，Li X，Huang F，et al.Confirmation of a proarrhythmic risk underlying the clinical use of common Chinese herbal intrave?nous injections［J］.J Ethnopharmacol，2012，142（3）：829-835.

［15］ Reagan-Shaw S，Nihal M，Ahmad N.Dose trans?lation from animal to human studies revisited［J］. FASEB J，2008，22（3）：659-661.

［16］ Chen L，Xu Y，Li W，Wu H，Luo Z，Li X，et al. The novel compound liguzinediol exerts positive inotropic effects in isolated rat heart via sarcoplas?mic reticulum Ca2+ATPase-dependent mechanism［J］.Life Sci，2012，91（11-12）：402-408.

Characteristic differences between deslanoside and milrinone in hemodynamics of rats

XUE Shu-yin1,LI Sha1,ZHANG Meng-dan1,GAO Ying1,HUANG Hui-li1,XIE Ming1,CHEN Ke-su2, LIU Fu-ming3,CHEN Long1,4
(1.National Standard Laboratory of Pharmacology for Chinese Materia Medica,School of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210023,China;2.Department of Respiratory Disease,Inpatient Wards for Senior Cadres,Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command,Nanjing 210002,China;3.First Affiliated Hospital,Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210029,China;4.Institute of Chinese Medicine of Taizhou China Medical City,Taizhou 225300,China)

OBJECTIVE To explore the cardiodynamic characteristics of deslanoside and milrinone and analyze their mortalitiy of chronic use underlying these characteristics.METHODS ①In vivo study was made to record the effects of deslanoside(0.17 mg·kg-1)and milrinone(0.78 mg·kg-1)injected fromthe left external jugular vein on pressure-volume relationships(P-V loop)and aortic pressure.②Ex vivo study was used to record the effects of deslanoside and milrinone on rat isolated contractili?ties.Deslanoside and milrinone were perfused to in this order:normal perfusion solution→deslanoside 0.01→0.1→1 μmol·L-1or normal perfusion solution→milrinone 0.1→1→10 μmol·L-1.③Ca2+transient from cardiomyocyte sarcoplasmic reticulum(SR)was measured to analyze the inotropic effects of desla?noside 10 μmol·L-1and milrinone 10 μmol·L-1.RESULTS① Deslanoside 0.17 mg·kg-1significantly enhanced the aortic blood pressure(both SBP and DBP)and end-systolic pressure(Pes),cardiac output(CO),stroke work(SW),peak rate of rise of left pressure(+dp:dtmax),and end-systolic elastance (Ees),reduced end-diastolic elastance(Eed)and end-systolic volume(Ves)(P＜0.05),prolonged systolic blood pressure durations at 50%full recovery level(SBPD50),and shortened aortic valve closing time (AVCT)(P＜0.05).Milrinone 0.78 mg·kg-1significantly reduced SBP,DBP,Pes,end-systolic volume(Ves), end-diastolic volume(Ved)(P＜0.05),and increased stroke volume(SV),ejection fraction(EF),CO, heart rate(HR),Eesand Eed(P＜0.05),and shortened left ventricular pressure durations at 50%full recovery level(LVPD50)and SBPD50(P＜0.05).②Both deslanoside and milrinone significantly increased the isolated rat left ventricular developed pressure(LVDP)and+dp:dtmaxin a concentration-depen?dent manner.However,deslanoside decreased HR and milrinone increased HR(P＜0.05).③Both desl?anoside 10 μmol·L-1and milrinone 10 μmol·L-1significantly increased the amplitude of SR Ca2+transient (P＜0.05).Moreover,milrinone 10 μmol·L-1shortened the recovery time of Ca2+transient(P＜0.05). CONCLUSION Both deslanoside and milrinone exert inotropic effects in both in vivo and ex vivo rat hearts.However,deslanoside has no effect on peripheral resistance.Milrinone reduces the peripheral resistance and increases the heart rate.These dynamics features of milrinone may explain that chronic use may induces high mortality in clinical settings.

deslanoside;milrinone;pressure-volume loop;Ca2+release

CHEN Long,Tel:13584058521,E-mail:longchen@njutcm.edu.cn

R969.1

A

1000-3002-（2017）02-0179-08

10.3867/j.issn.1000-3002.2017.02.09

Foundation items:The project supported by Natural Science Foundation for High Education of Jiangsu Province (14KJA360002);Natural Science Foundation of Jiangsu Province(BK20151355);Natural Science Foundation of Jiangsu Province(BK20131262);and"113 Talent Project"of the Fouth Round High Level Innovation Program in Taizhou China Medical City(2016024)

2016-12-14 接受日期：2017-01-20）

（本文編輯：喬 虹）

2014年度江蘇省高校自然科學(xué)研究重大項目（14KJA360002）；江蘇省自然科學(xué)基金（BK20151355）；江蘇省自然科學(xué)基（BK20131262）；泰州中國醫(yī)藥城第四批次高層次創(chuàng)新人才“113人才計劃”（2016024）

薛書銀，女，碩士研究生，主要從事藥物正性肌力機制研究。Tel：18651691406，E-mail：xsy111314@foxmail.com

陳 龍，Tel：13584058521，E-mail：longchen@ njutcm.edu.cn