費(fèi)曉青

摘 要：本文采用AB-8大孔樹脂對(duì)雙黃連粉針連翹苷的精制工藝進(jìn)行研究。以連翹苷為指標(biāo)，采用高效液相進(jìn)行測(cè)定，色譜條件為固定相為USA Agilent ZORBAXSB-C18柱（5μm，4.6mm×150mm），乙腈-水（25：75）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為277nm，流速1.0ml/min。本實(shí)驗(yàn)對(duì)大孔樹脂精制雙黃連粉針中連翹的工藝進(jìn)行研究。

關(guān)鍵詞：雙黃連粉針；大孔吸附樹脂；研究

雙黃連粉針，是由雙花、黃芩、連翹等制成的天然藥物注射劑，具有清熱解毒，辛涼解表的功效。雙黃連粉針用于外感風(fēng)熱，邪在肺衛(wèi)，證見發(fā)熱，微惡風(fēng)寒或不惡寒，咯痰色黃，咽紅腫痛；急性上呼吸道感染、急性扁桃腺炎、輕型肺炎等，目前已成為全國臨床治療肺炎、上呼吸道感染等多種疾病的常用藥物之一。連翹具有清熱，解毒，散結(jié)，消腫的功效。《日華子本草》記載：“通小腸，排膿。治瘡癤，止痛，通月經(jīng)。”大孔吸附樹脂是可以通過物理吸附從水溶液中有選擇地吸附有機(jī)物，具有良好的大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和較大的比表面積，具有選擇性好，再生處理方便，吸附速度快等特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)大孔樹脂精制雙黃連粉針中連翹的工藝進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

P1201高效液相色譜儀（大連依利特分析儀器有限公司）； SB-4200DTN超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；TG16-WS臺(tái)式高速離心機(jī)（湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；YP1004萬分之一電子分析天平（南京麒麟分析儀器有限公司）；MW實(shí)驗(yàn)室級(jí)超純水器（北京盈安美誠科學(xué)儀器有限公司）；Orion Star A 臺(tái)式/便攜式 基礎(chǔ)型pH測(cè)量?jī)x（賽默飛世爾科技水質(zhì)分析儀器）。甲醇（成都市福田精細(xì)化工有限公司）、乙腈（濟(jì)南世紀(jì)通達(dá)化工有限公司）、冰乙酸（成都市福田精細(xì)化工有限公司）。磷酸二氫鉀（成都市福田精細(xì)化工有限公司）、三乙胺（東光鑫源化工有限公司）、甲酸（東光鑫源化工有限公司）、磷酸（成都市福田精細(xì)化工有限公司）。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果[1-5]，確定色譜條件如下。色譜條件為固定相為USA Agilent ZORBAXSB-C18柱（5μm，4.6mm×150mm），乙腈-水（25：75）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為277nm，流速1.0ml/min。

2.2 供試品溶液的制備

精密稱取樣品適量，置于容量瓶?jī)?nèi)，加適量流動(dòng)相超聲溶解，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取連翹苷對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每1mL含連翹苷300μg的溶液，即得。

2.4 流動(dòng)相考察

分別考察乙腈-磷酸-0.2moloL-1磷酸二氫鉀（50∶0.01：50），甲醇-0.1moloL-1磷酸二氫鉀-三乙胺 （50∶50：0.01），乙腈一水一甲酸（17：80：0.5），甲醇∶2%冰醋酸水溶液（20∶80），乙腈-水-三乙胺（30：70：0.1），乙腈-0.1%磷酸溶液（50：50），乙腈-水（25：75）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-水（25：75）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-水（25：75）為流動(dòng)相。

3 樹脂的預(yù)處理

先用乙醇浸泡二十四小時(shí)以上，使樹脂充分溶脹。采用濕法裝柱，分別用20倍柱體積乙醇通過樹脂層，用去離子水洗盡乙醇，用20倍柱體積的5%HCl溶液流速通過樹脂層， ，而后用去離子水流速洗至中性。再用20倍柱體積的2% NaOH溶液通過樹脂層，用去離子水洗至中性即處理完畢。

4靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)

4.1樹脂吸附容量及吸附率的測(cè)定

稱取預(yù)處理好的AB-8大孔樹脂，裝入三角瓶中，精密稱取一定量干膏粉加適量水溶解也裝入三角瓶中，在恒溫水浴振蕩器上振搖十二小時(shí)，過濾，測(cè)定濾液中連翹苷的濃度，計(jì)算吸附容量及吸附率。

4.2樹脂解吸率測(cè)定

取上述吸附飽和的樹脂，準(zhǔn)確加入一定體積的乙醇溶液，置恒溫水浴振蕩器上振蕩十二小時(shí)，過濾，測(cè)定解吸液中連翹苷濃度，計(jì)算解吸率。

5 樹脂的動(dòng)態(tài)吸附和洗脫實(shí)驗(yàn)

5.1 上樣液濃度對(duì)吸附效果的影響

取不同克數(shù)的連翹干膏用水溶解，上樣質(zhì)量濃度分別為生藥0.1克/毫升、0.2克/毫升、0.3克/毫升、0.4克/毫升、0.5克/毫升進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)表明，上樣質(zhì)量濃度為生藥0.3克/毫升時(shí)上樣吸附效果最好。分別采用每小時(shí)一倍柱體積、每小時(shí)二倍柱體積、每小時(shí)三倍柱體積、每小時(shí)四倍柱體積、每小時(shí)五倍柱體積的流速上藥，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，每小時(shí)一倍柱體積、每小時(shí)二倍柱體積、每小時(shí)三倍柱體積的流速上藥吸附效果相當(dāng)優(yōu)于每小時(shí)四倍柱體積、每小時(shí)五倍柱體積，每小時(shí)一倍柱體積、每小時(shí)二倍柱體積上藥速度較慢，所以采用每小時(shí)三倍柱體積的流速上藥。

5.2 洗脫劑乙醇濃度對(duì)連翹苷解吸效果的影響

上樣質(zhì)量濃度為生藥0.3克/毫升，每小時(shí)三倍柱體積的流速上藥，分別采用20%乙醇、30%乙醇、40%乙醇、50%乙醇、60%乙醇洗滌，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明30%乙醇洗滌效果最好。

5.3 pH值對(duì)洗脫液的影響

上樣質(zhì)量濃度為生藥0.3克/毫升，每小時(shí)三倍柱體積的流速上藥，分別采用ph值為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0的30%乙醇洗滌，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明ph值為7.0的30%乙醇洗滌效果最好。

5.4 洗脫劑的用量

上樣質(zhì)量濃度為生藥0.3克/毫升，每小時(shí)三倍柱體積的流速上藥，洗脫劑為ph值為7.0的30%乙醇，分別采用洗脫劑的用量為4倍量樹脂柱體積、5倍量樹脂柱體積、6倍量樹脂柱體積、7倍量樹脂柱體積、8倍量樹脂柱體積進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果洗脫劑的用量為6倍量樹脂柱體積洗脫效果最好。

6 結(jié)果

最佳工藝為：上樣質(zhì)量濃度為生藥0.3克/毫升，每小時(shí)三倍柱體積的流速上藥，洗脫劑為ph值為7.0的30%乙醇，洗脫劑的用量為6倍量樹脂柱體積。

參考文獻(xiàn)

[1]HPLC法同時(shí)測(cè)定雙黃連口服液中綠原酸連翹苷和黃芩苷的含量[J].劉剛，譚生建，張華，王杰松，薛克昌，史寧，謝雅君，魏涵.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào). 2009（05）.

[2]高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法同時(shí)測(cè)定雙黃連片劑中的12種化合物[J].趙洪濤，吳曉雯，安益強(qiáng)，湯道權(quán).中國醫(yī)院藥學(xué)雜志. 2012（04）.

[3]高效液相色譜法測(cè)定雙黃連口服液中綠原酸、黃芩苷、連翹苷、漢黃芩苷的含量[J].黃敬群，楊娟，李紅.中國中醫(yī)藥信息雜志. 2008（05）.

[4]HPLC同時(shí)測(cè)定雙黃連即型凝膠中綠原酸、黃芩苷及連翹苷的含量[J].陳兩綿，王錦玉，仝燕，彭新君，馬振山，王琳.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2008（12）

[5]不同采收期連翹葉中連翹苷、連翹酯苷和蘆丁的含量測(cè)定[J].張杲，李發(fā)榮，段飛，靳謹(jǐn)，郭穎，王喆之.天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 2005（06）.