張順平 張順吉

【摘要】目的：建立高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定腸炎安康膠囊中芍藥苷的含量。方法：采用十八烷基鍵合硅膠色譜柱（46mm×250mm，5μm）；以乙腈-水（14：86）為流動(dòng)相，流速為10mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm。結(jié)果：芍藥苷進(jìn)樣量在01556～15560μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（r=09999）；平均回收率為9886%（RSD為037%）。結(jié)論：本方法準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便，結(jié)果穩(wěn)定，可用于腸炎安康膠囊中芍藥苷的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】腸炎安康膠囊；芍藥苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

【中圖分類號(hào)】R2841【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2017）07-0021-03

Determination of Paeoniflorin in Changyanankang capsule by HPLC

ZHANG Shun ping1ZHANG Shun ji2

1Qujing Inspection Center for Food and Drug，Qujing 655000，China；2The First Peoples Hospital of Qujing，Qujing 655000，China

Abstract：Objective To establish an HPLC method for the determination of Paeoniflorin in changyanankang capsule.Methods Using octadecyl bonded silica gel chromatography column （46mm×250mm， 5μm）； With acetonitrile - water （14∶86） were as mobile phase， flow rate of 10mL/min； Column temperature： 30 ℃ detection wavelength 230 nm.Results Good linearity was shown in the range of 01556～15560μg.Paeoniflorin with the average recovery of 9886%（RSD=037%）.Conclusion This method is accurate， rapid， simple and stable results. can be used for determination the content of Paeoniflorin in Changyanankang capsule.

Keywords：Changyanankang； Paeoniflorin； HPLC； Content Determination

腸炎安康膠囊是云南省曲靖市第一人民醫(yī)院的院內(nèi)制劑，處方由白芍、金蕎麥、黨參等十味藥組成，具有補(bǔ)中益氣、健胃化濕、消炎止痛的功效，臨床主要用于治療結(jié)腸炎和其他腸道炎癥。在現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]中未建立含量測(cè)定方法。白芍作為處方中的主藥，其有效成分為芍藥苷，因此本研究應(yīng)用HPLC法對(duì)芍藥苷進(jìn)行含量測(cè)定。

1儀器與材料

11儀器Agilent1200型高效液相色譜儀（四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱， VWD檢測(cè)器美國(guó)安捷倫科技公司）；KQ-300UDB型雙頻數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；METTLE MS205DU電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；一體式超純水儀（PURELAB Flex 3，英國(guó)ELGA公司）。

12試藥腸炎安康膠囊（規(guī)格為04g×50粒/瓶，批號(hào)：20150502、20150711、20151119，云南省曲靖市第一人民醫(yī)院制劑室）；芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)： 110736-201539，含量964%，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；乙腈為色譜純，甲醇為分析純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

21色譜條件色譜柱：Amethyst C18-H（200 mm×46，5μm）； 流動(dòng)相：乙腈-水 （14∶86）， 流速：10mL/min； 柱溫：30℃，；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；進(jìn)樣量：5μL。

22溶液制備

221供試品溶液制備取本品內(nèi)容物20粒，混勻，取約09g，精密稱定，置25mL容量瓶中，加入甲醇約15mL，超聲（頻率：40KHz；功率：500W）40min，取出，放冷，定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，用045μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

222對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品2018mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備溶液（濃度為：07781mg/mL）再精密量取上述溶液5mL置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品使用溶液（濃度為01556mg/mL）。

223陰性樣品溶液制備按處方及工藝制備缺白芍藥材的陰性樣品（由云南省曲靖第一人民醫(yī)院提供），再按“221”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液。

23線性關(guān)系的考察分別精密吸取“222”項(xiàng)下制備的芍藥苷對(duì)照品溶液1、2、3、5、8、10μL在上述色譜條件進(jìn)樣分析，分別重復(fù)進(jìn)樣三次，記錄峰面積，以對(duì)照品質(zhì)量X為橫坐標(biāo)，峰面積平均值（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算線性回歸方程：Y=13235000X-16769（r=09999）。結(jié)果表明芍藥苷進(jìn)樣量在01556～15560μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。

24重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品（批號(hào)20151119），精密稱取6份，每份約09g。按221”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，照上述色譜條件進(jìn)樣5μL測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果測(cè)得每1g樣品中含芍藥苷33628mg，RSD=063%。

25精密度試驗(yàn)精密吸取在“222”項(xiàng)下制備的芍藥苷對(duì)照品溶液在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD為047%，表明該儀器精密度良好。

[JP4]26穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一樣品溶液（批號(hào)20151119），[JP+2]在同1色譜條件下，分別于制備后0、2、4、8、12、24h進(jìn)行分析，記錄峰面積。結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD為076%，表明樣品溶液在24h較穩(wěn)定。[JP]

27回收率試驗(yàn)分別取同一批樣品（批號(hào)20151119）6份，每份約045g，精密稱定，分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備溶液（濃度為07781mg/mL）25mL，按“221”項(xiàng)下的方法處理，制備供試品溶液，分別測(cè)定，計(jì)算回收率。平均回收率為9886%，RSD為037%。結(jié)果見(jiàn)表1。

28專屬性試驗(yàn)分別精密吸取供試品溶液、芍藥苷對(duì)照品使用溶液和陰性樣品溶液各5μL，在上述色譜條件下，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果詳見(jiàn)圖1。結(jié)果可見(jiàn)，在與對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上樣品具有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性樣品在對(duì)應(yīng)位置無(wú)吸收，供試品中主峰與其相鄰色譜峰均能達(dá)到基線分離，對(duì)本品中芍藥苷的測(cè)定無(wú)干擾。

3討論

31提取方法的確定本試驗(yàn)中采用稀乙醇提取[2]、超純水直接提取、甲醇直接提取。結(jié)果采用甲醇超聲40min后，芍藥苷含量較前兩種方法提取有較大提高，表面第三種方法更能將樣品中的芍藥苷提取完全，最終確定采用甲醇超聲提?。l率：45KHz；功率：240W）時(shí)間確定為40min。

32流動(dòng)相的確定參考中國(guó)藥典及相關(guān)文獻(xiàn)中芍藥苷的含量測(cè)定報(bào)道[3-4]，分別采用：乙腈：01%磷酸（14∶86，V/V） 、甲醇-002mol/L磷酸二氫鉀溶液（28∶72，V/V）和乙腈：水（14：86，V/V），同時(shí)試用了不同比例進(jìn)行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)三種方法均能達(dá)到要求，綜合經(jīng)濟(jì)、高效的原則，最終確定采用乙腈-水 （14∶86，V/V）保留時(shí)間合適且各成分獲得較好的分離。

33在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，進(jìn)樣體積不易過(guò)大，當(dāng)進(jìn)樣體積≥15μL時(shí)，色譜峰就會(huì)出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，而且隨著進(jìn)樣量的提高會(huì)越來(lái)越嚴(yán)重，因此考慮，進(jìn)樣量盡量控制在10μL以內(nèi)。

綜上，該方法準(zhǔn)確、快速、結(jié)果穩(wěn)定，可用于腸炎安康膠囊中芍藥苷的含量測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2017-01-23編輯：程鵬飛）