溫 泉，施揚佳，李加位（廣西壯族自治區(qū)欽州市靈山縣：佛子鎮(zhèn)衛(wèi)生院，廣西靈山5546；衛(wèi)生監(jiān)督所，廣西靈山55400；檀圩鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院，廣西靈山554）

·臨床與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)·

乙型肝炎e抗原陰性表面抗原攜帶者的危險因素及預(yù)防措施

溫 泉1，施揚佳2，李加位3（廣西壯族自治區(qū)欽州市靈山縣：1佛子鎮(zhèn)衛(wèi)生院，廣西靈山535426；2衛(wèi)生監(jiān)督所，廣西靈山535400；3檀圩鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院，廣西靈山535413）

目的：探討乙型肝炎e抗原（HBeAg）陰性、表面抗原（HBsAg）陽性慢性乙型肝炎患者的危險因素及預(yù)防措施．方法：選取廣西壯族自治區(qū)欽州市靈山縣佛子鎮(zhèn)衛(wèi)生院感染性疾病科2013／01－2015／12收治的HBeAg陰、陽性，且HBsAg陽性慢性乙型肝炎共108例患者作為研究對象，對其進(jìn)行血常規(guī)、尿常規(guī)、大便常規(guī)、生化全套、肝炎全套、梅毒、艾滋、彩超、心電圖、胸片等常規(guī)檢查，應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)、流式細(xì)胞儀進(jìn)行HBV?DNA、T淋巴細(xì)胞亞群檢測．結(jié)果：HBeAg陰性慢性乙型肝炎患者常規(guī)檢查出現(xiàn)異常的例數(shù)與HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0．05）．HBeAg陰性、HBsAg陽性患者HBV?DNA水平與CD8＋T淋巴細(xì)胞呈正相關(guān)（r＝0．686），而與CD4／CD8比值呈負(fù)相關(guān)（r＝－0．508，P＜0．05）；與總T、CD4＋T細(xì)胞無明顯相關(guān)性．HBeAg陽性、HBsAg陽性組患者的HBV?DNA水平與總T、CD4＋T、CD8＋T淋巴細(xì)胞水平均無明顯相關(guān)性．結(jié)論：HBeAg陰性、HBsAg陽性患者HBV?DNA水平與機體細(xì)胞免疫密切相關(guān)，應(yīng)充分重視此類患者的診斷與治療．

乙型肝炎；慢性；T淋巴細(xì)胞亞群；病毒；DNA

0 引言

國內(nèi)大多數(shù)學(xué)者曾經(jīng)認(rèn)為，對慢性乙型病毒性肝炎患者而言，e抗原（HBeAg）陰轉(zhuǎn)是病情趨向好轉(zhuǎn)、穩(wěn)定或無傳染性的表現(xiàn)之一．但隨后臨床發(fā)現(xiàn)，一部分HBeAg轉(zhuǎn)陰的慢性乙型肝炎患者病情反而加重．近年來，隨著人們對乙型肝炎認(rèn)識的不斷加深，HBeAg陰性慢性乙型肝炎的特殊性逐漸被重視，遂有學(xué)者將其列為慢性乙型肝炎的一個獨立臨床類型，并進(jìn)行相關(guān)研究．然而，迄今為止，對于HBeAg陰性乙肝患者的認(rèn)識及研究仍然較為薄弱，一些機理、診斷、治療等實際問題未能充分認(rèn)識并得到滿意解決［1－3］．本研究對HBeAg陰性及HBeAg陽性、HBsAg陽性患者的常規(guī)檢查、乙型肝炎病毒DNA（HBV?DNA）水平、細(xì)胞免疫狀態(tài)進(jìn)行相關(guān)分析，現(xiàn)報道如下．

1 資料和方法

1.1 一般資料選取廣西壯族自治區(qū)欽州市靈山縣佛子鎮(zhèn)衛(wèi)生院感染性疾病科2013／01－2015／12收治的慢性乙型肝炎患者108例，其中HBeAg陰性60例，HBeAg陽性48例；輕度40例，中度32例，重度36例；男88例，女20例；年齡18～68（平均40．5± 5．0）歲．

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)HBeAg陰性、HBsAg陽性慢性乙型肝炎的診斷均符合中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會2005年聯(lián)合制訂并于2010年修訂的慢性乙型肝炎防治指南［4－5］中的診斷標(biāo)準(zhǔn)．

1.3 方法

1．3．1 常規(guī)檢測 所有患者入院后均行血常規(guī)、尿常規(guī)、大便常規(guī)、生化全套、肝炎全套、梅毒、艾滋、彩超、心電圖、胸片等常規(guī)檢查．

1．3．2 HBV?DNA水平、細(xì)胞免疫狀態(tài)的檢測 患者于入院后第2天清晨抽取空腹靜脈抗凝血5 mL，使用美國Coulter流式細(xì)胞分析儀進(jìn)行T淋巴細(xì)胞亞群檢測，每份標(biāo)本均重復(fù)操作2次后取平均值．HBV?DNA的檢測采用聚合酶鏈反應(yīng)結(jié)合熒光探針的體外DNA擴(kuò)增、檢測技術(shù)．PCR診斷試劑盒由中山大學(xué)達(dá)安基因診斷中心生產(chǎn)，在核酸擴(kuò)增儀（PE5700，美國）上擴(kuò)增．分析HBeAg陰性、HBeAg陽性患者的HBV?DNA水平與T淋巴細(xì)胞亞群之間的相關(guān)情況．

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS16．0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，將HBV?DNA水平數(shù)值進(jìn)行對數(shù)轉(zhuǎn)換，再采用Spearman法與T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行相關(guān)性分析，P＜0．05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義．

2 結(jié)果

2．1 HBeAg陰性、HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者常規(guī)檢查項目比較HBeAg陰性慢性乙型肝炎患者常規(guī)檢查出現(xiàn)異常的例數(shù)與HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者例數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0．05，表1）．

表1 HBeAg陰性、HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者常規(guī)檢查項目比較

2．2 HBV?DNA水平與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性分析HBV?DNA水平與總T淋巴細(xì)胞、CD4＋／CD8＋比值、CD4＋T、CD8＋T細(xì)胞均不存在相關(guān)性（P＞0．05，表2）．

表2 HBV?DNA水平與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性

表2 HBV?DNA水平與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性

2．3 HBeAg陰性乙肝患者HBV?DNA與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性分析在60例HBeAg陰性乙肝患者中，HBV?DNA與T細(xì)胞中的總T、CD4＋T無相關(guān)性，但與CD8＋T呈正相關(guān)（P＜0．05）；而與CD4＋／CD8＋呈負(fù)相關(guān)（P＜0．05，表3）．

表3 HBeAg陰性患者HBV?DNA與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性

表3 HBeAg陰性患者HBV?DNA與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性

2．4 HBeAg陽性乙肝患者HBV?DNA與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性分析在48例HBeAg陽性乙肝患者中，HBV?DNA與T細(xì)胞亞群中的總T、CD4＋／CD8＋、CD4＋T、CD8＋T均無相關(guān)性（P＞0．05，表4）．

表4 HBeAg陽性患者HBV?DNA與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性

表4 HBeAg陽性患者HBV?DNA與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性

3 討論

迄今為止，乙型病毒性肝炎的發(fā)病機制尚未完全明確．機體感染HBV后，病情嚴(yán)重程度、臨床表現(xiàn)特征等很大程度上取決于HBV病毒誘發(fā)的機體免疫反應(yīng)．以前的大多數(shù)觀點認(rèn)為，HBV在機體內(nèi)處于持續(xù)存在且復(fù)制的狀態(tài)時，可分泌HBeAg；隨著患者病情的發(fā)展、轉(zhuǎn)歸，HBV停止復(fù)制時，抗HBe出現(xiàn)和／或HBeAg轉(zhuǎn)陰．但是，近年來隨著對HBV及慢性乙型肝炎研究的深入，越來越多的臨床資料［6－7］表明，一部分HBeAg陰性的HBV感染者，不僅HBV?DNA呈高滴度狀態(tài)，而且病情進(jìn)展迅速．臨床與基礎(chǔ)研究［8－9］表明，HBeAg陰性、HBsAg陽性在慢性乙型肝炎患者中所占的比例逐年增高，HBeAg陰性患者在臨床特征、抗病毒治療、預(yù)后等諸多方面與HBeAg陽性患者比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義．HBeAg陰性、HBsAg陽性患者HBV存在CP區(qū)（基本核心C基因啟動子）變異和／或前C區(qū)基因突變，這種形式突變后的基因，盡管對HBV復(fù)制沒有任何影響，但是能直接影響HBeAg的合成和分泌，該現(xiàn)象導(dǎo)致的結(jié)局是在HBV仍然復(fù)制的患者血清中檢測不到HBeAg的存在．

對HBeAg陰性、HBsAg陽性乙肝患者而言，大量研究［10－11］表明，HBV?DNA水平與機體肝臟炎癥、病理損害程度呈正相關(guān)，同時變異后HBV的大量復(fù)制與肝臟病理損害存在著密切的相關(guān)性．但尚未明確機體肝臟這種病理損害是變異的HBV對肝細(xì)胞的直接損害，還是該變異的HBV通過誘導(dǎo)機體一系列的異常免疫應(yīng)答而致的免疫病理損傷？本研究結(jié)果顯示，HBeAg陰性、HBsAg陽性慢性乙型肝炎患者的HBV?DNA滴度與CD8＋T淋巴細(xì)胞呈正相關(guān)，而與CD4＋／CD8＋比值呈負(fù)相關(guān)．該結(jié)果提示，HBV病毒的增殖與活化能夠充分激活機體的細(xì)胞免疫，這體現(xiàn)在CD8＋T淋巴細(xì)胞活性的增高，活化后的CD8＋T可攻擊攜帶有HBV的肝細(xì)胞，進(jìn)而通過此途徑導(dǎo)致機體肝細(xì)胞的免疫病理損傷．然而，對于HBeAg陽性、HBsAg陽性慢性乙型肝炎患者，本研究顯示，HBV?DNA滴度與機體細(xì)胞免疫水平不存在任何相關(guān)性，此結(jié)果與文獻(xiàn)報道［1－2，12－13］中的相關(guān)結(jié)論一致．有學(xué)者認(rèn)為，導(dǎo)致該結(jié)果的原因可能與機體內(nèi)HBeAg的持續(xù)存在相關(guān)，機體內(nèi)HBeAg呈持續(xù)存在狀態(tài)時，其對HBV病毒產(chǎn)生某種特殊耐受性，此種耐受能降低宿主對HBV病毒的抗感染免疫應(yīng)答［14］．

綜上所述，HBeAg陰性、HBsAg陽性的慢性乙型肝炎患者，其肝臟的免疫病理損害程度與HBV?DNA滴度密切相關(guān)，其HBV?DNA水平不僅影響著患者的診斷與治療，而且左右著疾病的發(fā)展與預(yù)后［15］，因此，HBeAg陰性乙肝患者的抗病毒、免疫調(diào)節(jié)治療等相關(guān)措施應(yīng)引起臨床醫(yī)生的足夠重視．

［1］周曉暉．67例慢性乙型肝炎及乙肝后肝硬化患者膽囊病變的B超檢查分析［J］．中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10（14）：89－90．

［2］陳素梅，鄧 勇，林成祖，等．乙型肝炎e抗原陰性的慢性乙型肝炎病毒感染患者肝組織病理和免疫組化特點研究［J］．中國基層醫(yī)藥，2016，23（2）：204－207，208．

［3］謝 蕾，潘克女，駱 欣，等．乙型肝炎病毒e抗原陰性肝硬化患者檢測血清病毒DNA水平的臨床意義［J］．國際流行病學(xué)傳染病學(xué)雜志，2014，41（3）：213－214．

［4］中華醫(yī)學(xué)會．病毒性肝炎防治方案［J］．中華傳染病雜志，2001，19（1）：56－62．

［5］中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會，中華醫(yī)學(xué)會感染病分會．慢性乙型肝炎防治指南［J］．中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2006，40（2）：136－140．

［6］鐘大妮，李國堅，吳繼周，等．廣西地區(qū)乙肝病毒基因分型與臨床表現(xiàn)及機體免疫功能關(guān)系的研究［J］．中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10（2）：1－3．

［7］劉鴻生，胡志剛，俞 蕾，等．HBeAg陰性乙型肝炎患者HBV?LP及HBV?DNA檢測分析［J］．中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2012，22（13）：2743－2745．

［8］林家新．胸腺肽α1聯(lián)合恩替卡韋治療HBeAg陽性慢性乙型肝炎的療效觀察［J］．臨床合理用藥雜志，2011，4（3A）：73－74．

［9］白占杰．論酶聯(lián)免疫吸附試驗中影響因素及解決方法［J］．實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2012，30（2）：185．

［10］張茂海，吳建業(yè)，陸玲娜，等．膠體金與酶聯(lián)免疫法檢測乙肝表面抗原結(jié)果分析［J］．國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2011，32（14）：1625－1626．

［11］劉 瑩，王 蘇，張桂華．前S1抗原在乙型肝炎病毒檢測中的臨床意義［J］．中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2016，10（1）：31－32．

［12］周紅星，江應(yīng)安．乙型肝炎病毒表面抗原在慢性乙型肝炎病毒感染后不同臨床階段的定量檢測及臨床意義［J］．中國醫(yī)師進(jìn)修雜志，2014，37（24）：15－18．

［13］趙旭宏．聯(lián)合免疫對乙型肝炎表面抗原陽性的慢性乙型肝炎病毒感染孕婦子女的免疫效果［J］．中國醫(yī)師進(jìn)修雜志，2014，37（12）：43－45．

［14］陳 紅，韓 靜，楊海珊．乙肝表面抗原攜帶者不同喂養(yǎng)對嬰兒的影響［J］．中國婦幼健康研究，2008，19（4）：316－318．

［15］王 青，徐佳薇，姚 寧．乙型肝炎病毒表面抗原攜帶者配偶感染乙型肝炎危險因素調(diào)查［J］．重慶醫(yī)學(xué)，2014，43（21）：2767－2769．

The risk factors and preventive measures of HBsAg carriers of HBeAg?negative hepatitis B

WEN Quan1，SHI Yang?Jia2，LI Jia?Wei3

1Fozi Township Hospital，lingshan 535426；2Health supervision Institute，Lingshan 535400；3Tanxu Central Health Hospital，Lingshan 535413，China

AIM：To investigate the risk factors and preventive measures of HBsAg carriers of HBeAg?negative hepatitis B．METHODS：A total of 108 cases of patients with HBeAg?nega?tive，HBeAg?positive and HBsAg?positive chronic hepatitis B admitted into Prevention and Care Group of Fozi Township Hospital from January 2013 to December 2015 were selected as the objects of study．All the patients was given routine examinations such as blood routine，urine routine，routine stool，a full set of biochemistry examination，a full set of hepatitis examination，syphilis，HIV，color doppler ultrasound，electrocardiogram，chest radiograph and so on．HBV?DNA level was tested by fluorescent quantity PCR，and T lymphocyte subsets were examined by flow cytometry．RESULTS：There's no significant statistical difference on abnormal cases number bewtween patients with HBeAg?negative chronic hepatitis B and patients with HBeAg?positive chronic hepatitis B（P＞0．05）．The HBV?DNA level in patients with HBeAg?nega?tive，HBsAg?positive chronic hepatitis B had a postive correlation with the CD8＋T lymphocyte（r＝0．686，P＜0．05），a negative correlation with the ratio of CD4＋／CD8＋T lymphocyte（r＝－0．508，P＜0．05），and no remarkable correlation with the total T cells and CD4＋T lymphocyte．However，for patients with HBeAg?positive，HBsAg?positive chronic hepatitis B，there was no correlation betweenthe HBV?DNA level and the total T cells，CD4＋T lympho?cyte，CD8＋T lymphocyte．CONCLUSION：HBV?DNA level is closely correlated with the cellular immune status in the patients with HBeAg?negative，HBsAg?positive chronic hepatitis B，it is necessary to pay attention to the diagnosis and treatment of these patients．

hepatitis B；chronic；T lymphocyte subsets；virus；DNA

R512．6＋2；Q523

A

2095?6894（2017）03?53?03

2016－09－25；接受日期：2016－10－13

溫 泉．E?mail：wagfsx＠163．com