混合大孔樹脂純化海蘆筍總黃酮工藝的研究

段筱杉, 張朝輝, 應(yīng) 銳, 趙騰飛, 侯 虎, 趙 雪

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混合大孔樹脂純化海蘆筍總黃酮工藝的研究

段筱杉, 張朝輝, 應(yīng) 銳, 趙騰飛, 侯 虎, 趙 雪

(中國海洋大學食品科學與工程學院, 山東青島266003)

以黃酮的吸附率、解吸率和回收率作為主要評價指標, 對海蘆筍(Torr)總黃酮的純化工藝進行了研究。結(jié)果表明, 在5種大孔樹脂中選取D101型、HPD600型兩種樹脂混合用于純化, 最佳混合比例為3︰2?；旌蠘渲瑢ＬJ筍黃酮的最佳純化工藝參數(shù)為: 黃酮濃度為0.5 g/L時, pH為5的上樣液以1.0 mL/min的上樣流速進行吸附, 上樣量最大為27BV。待吸附完全, 用4BV蒸餾水沖洗混合樹脂柱后, 用8BV60%的乙醇溶液進行洗脫, 洗脫流速0.5 mL/min。采用該工藝純化后, 海蘆筍黃酮的純度提高至45.91%±0.44%, 黃酮回收率為86.74%±0.46%, D101、HPD600混合樹脂對海蘆筍黃酮純化效果良好, 可用于海蘆筍總黃酮的純化。

海蘆筍(Torr); 黃酮; 混合樹脂; 純化

海蘆筍(Torr)別名海蓬子、鹽角草等, 是藜科(Chenopodiaeea)鹽角草屬(),莖高度肉質(zhì)化, 有梗無葉的一年生真鹽生植物, 其主要生長于海灘、鹽沼、鹽堿地。鹽角草屬植物在全世界范圍存在30多個品種, 其中以歐洲海蓬子(L.)和北美海蓬子(Torr)、L.等研究最多。北美海蓬子于1999年引進到我國, 目前在江蘇、浙江、福建等東南沿海地區(qū)都有較為廣泛的栽培[1-3]。海蘆筍不僅具有耐鹽度高(5% NaCl)的優(yōu)良生物學特性, 而且具有豐富的活性物質(zhì), 黃酮類、多糖、有機酸和三萜皂苷類為海蘆筍的主要有效成分, 營養(yǎng)價值較高[4]。2004年P(guān)ark等[5]在L.中鑒定出了異鼠李素3-O-β-D葡萄糖苷、槲皮素3-O-β-D葡萄糖苷, 為海蘆筍中黃酮類化合物的研究提供了重要基礎(chǔ)。

黃酮化合物又稱類黃酮、黃酮體、黃堿素, 在植物的次生代謝過程中產(chǎn)生, 黃酮類化合物的基本結(jié)構(gòu)是以2-苯基色原酮為母核, 多以苷的形式或游離態(tài)廣泛存在于植物中[6]。黃酮類化合物不僅種類繁多結(jié)構(gòu)復(fù)雜, 而且具有強而廣的生物活性, 它在植物的抗菌防病等方面發(fā)揮著重要作用, 是茶[7]及銀杏[8]、葛根[9]等植物的重要活性成分。黃酮類物質(zhì)除了能夠抑制和清除自由基, 是有效的抗氧化劑、自由基清除劑[10]外, 研究表明, 黃岑甙、蘆丁對紫外線具有一定吸收作用[11], 杜仲葉黃酮被證明有良好的降血脂作用[12], 互花米草總黃酮被證明是一種免疫活性物質(zhì)且可起到降血脂、降血糖的作用[13-14], 因此, 黃酮類化合物在醫(yī)藥、化妝品、食品等多個領(lǐng)域開發(fā)前景良好。目前國內(nèi)對海蘆筍黃酮的提取方法如回流法[15]、溫浸法[16]、微波輔助提取法[17-18]已經(jīng)有較為廣泛的研究, 而在海蘆筍黃酮純化方面的相關(guān)報道較少, 徐青等[17]將AB-8與D101型樹脂進行比較后, 選取AB-8型樹脂對海蘆筍黃酮的純化工藝進行了研究, 樹脂的選擇范圍較小。因此, 進一步研究并優(yōu)化海蘆筍總黃酮的純化工藝對于海蘆筍總黃酮的開發(fā)應(yīng)用具有重要意義。

大孔吸附樹脂是一類由人工合成的、具有多孔性的、有機高分子聚合物的吸附劑, 大孔樹脂所具有的網(wǎng)狀空穴結(jié)構(gòu)產(chǎn)生分子篩作用, 以及它的極性基團所產(chǎn)生的吸附性, 使不同的化合物根據(jù)吸附力及分子質(zhì)量大小可以在大孔樹脂上經(jīng)某種溶劑的洗脫實現(xiàn)分離純化。近年來, 大孔吸附樹脂因其穩(wěn)定性良好, 比表面積大, 吸附、解吸迅速且條件溫和, 吸附容量大再生方便, 可重復(fù)使用等優(yōu)點[20-21], 廣泛用于黃酮、皂甙等天然產(chǎn)物的分離純化。本文將海蘆筍黃酮粗提物作為純化對象, 在5種不同類型的大孔樹脂中, 通過靜態(tài)吸附與解吸實驗選取最適合海蘆筍黃酮純化用的大孔樹脂, 并通過動態(tài)吸附及解吸實驗研究了海蘆筍總黃酮的大孔樹脂純化工藝條件, 為進一步開發(fā)利用海蘆筍提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

海蘆筍購于鹽城綠苑鹽土農(nóng)業(yè)科技有限公司, 將海蘆筍清凈烘干后, 將海蘆筍粉碎制成干粉備用。

蘆丁標準品由南京替斯艾么中藥研究所提供; 無水乙醇, HCl, NaNO2, Al(NO3)3, NaOH等均為國產(chǎn)分析純; D101由Sigma公司生產(chǎn), HPD600大孔吸附樹脂由深藍科技有限公司生產(chǎn), DM130, D101-1, AB-8 大孔吸附樹脂由安徽三星樹脂科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 儀器與設(shè)備

HY-881-2型電熱鼓風干燥箱, 蘇州市豪悅電熱設(shè)備制造廠; UV-2100型紫外可見分光光度計, 尤尼柯(上海)儀器有限公司; 低溫高速離心機, Sigma公司; SHA-B 恒溫振蕩器, 江蘇常州國華電器有限公司; pH計, 上海精密科學儀器有限公司; AL204 電子天平, 梅特勒托利多(上海)有限責任公司; 蠕動泵, 保定蘭格恒流泵有限公司; 真空冷凍干燥機, 北京思達興業(yè)儀器有限公司; BSZ-100 自動部分收集器, 上海青浦瀘西儀器制造廠。

1.3 實驗方法

1.3.1 海蘆筍總黃酮溶液的制備

準確稱取適量海蘆筍干粉, 以65%的乙醇溶液為提取溶劑, 按照1︰60(g/mL)的料液比, 于35℃提取2次, 每次3.5 h, 以7 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心后, 取上清液, 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除盡溶液中的乙醇后, 冷凍干燥, 備用。

1.3.2 海蘆筍中黃酮含量的測定

1.3.2.1 標準曲線的繪制[22]

將10.00 mg蘆丁標準品以95%乙醇溶液充分溶解, 室溫下定容至50 mL, 搖勻, 即得濃度為0.2 g/L。采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法在510 nm波長下測定不同濃度的蘆丁標準品溶液的, 以濃度(g/L)為橫坐標繪制標準曲線, OD值為縱坐標, 得到回歸方程和相關(guān)系數(shù)為:

=6.177 4+0.001,2=0.999 7 (1)

1.3.2.2 樣品溶液中黃酮濃度的測定

準確移取適量樣品溶液置于10 mL比色管內(nèi), 以標準曲線的測定方法顯色后, 測定OD值, 帶入回歸方程計算樣品溶液中黃酮的質(zhì)量濃度。

1.3.2.3 樣品純度的測定

準確稱取適量凍干樣品(精確至0.1 mg), 配制成溶液后, 取一定量溶液按照標準曲線的測定方法顯色并測定吸光值, 計算樣品中的黃酮含量, 并按照式(2)計算凍干樣品中總黃酮的純度。

純度(%)=/×100 (2)

式中:為液體中黃酮的質(zhì)量濃度(g/L);為液體的體積(mL);為稱取的凍干樣品的質(zhì)量(mg)。

1.3.3 大孔樹脂的預(yù)處理[21]

分別將AB-8型、D101型、D101-1型、DM130型、HPD600型5種大孔吸附樹脂置于無水乙醇溶液中浸泡至充分溶脹后濕法裝柱, 經(jīng)2BV的95%乙醇溶液淋洗后, 用蒸餾水將其淋洗直至沒有醇味, 之后用2BV的5%HCl溶液淋洗樹脂, 用蒸餾水沖洗至中性, 再用2BV的5%NaoH溶液淋洗, 蒸餾水沖洗至中性, 待用。

1.3.4 大孔樹脂的篩選

取等量且經(jīng)預(yù)處理好的5種大孔樹脂置于錐形瓶中, 移取等體積的已知黃酮含量的海蘆筍黃酮溶液, 于恒溫(25℃)下吸附飽和后取出, 移取等量上層樣液測定其中的黃酮濃度。將剩余樣液濾去后用蒸餾水充分洗滌去除殘留樣液后過濾, 參考文獻[22]以乙醇溶液作為洗脫劑, 分別加入等體積90%乙醇溶液, 25℃恒溫水浴振蕩解吸, 24 h后測定洗脫液中的黃酮濃度, 并計算5種大孔樹脂對海蘆筍黃酮的吸附率和解吸率, 計算公式如下:

吸附量(mg/g)=(0－1)1(3)

吸附率(%)=(01)0×100 (4)

解吸量(mg/g)=22/M (5)

解吸率(%)=22/(0–1)1×100 (6)

公式(3)至(6)中,0為上樣溶液初始質(zhì)量濃度(g/L);1為吸附飽和后上層樣液的黃酮濃度(g/L);2為洗脫液黃酮濃度(g/L);1為上樣溶液體積(mL);2為洗脫液體積(mL);為大孔樹脂質(zhì)量(g)。

1.3.5 大孔樹脂混合比例的確定

根據(jù)上述篩選實驗結(jié)果將樹脂按不同質(zhì)量比例均勻混合后, 分別取等量樹脂置于具塞錐形瓶中, 同1.3.3相同處理后, 分別計算不同混合比例的樹脂對海蘆筍黃酮的吸附率、解吸率及黃酮回收率。

黃酮回收率(%)=22/01×100 (7)

式中,0為上樣溶液初始黃酮濃度(g/L);2為洗脫液黃酮濃度(g/L);1為上樣溶液體積(mL);2為洗脫液體積(mL)。

1.3.6 混合大孔樹脂吸附及解吸條件的研究[23-27]

對最佳比例的混合大孔樹脂純化海蘆筍黃酮的工藝條件進行研究, 通過靜態(tài)吸附實驗, 考察上樣液的不同pH(3、4、5、6、7)、黃酮質(zhì)量濃度(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 g/L)對混合大孔樹脂黃酮吸附率的影響。將混合樹脂濕法裝柱(直徑1.1 cm, 柱高20 cm), 徑高比1︰8, 確保沒有氣泡后動態(tài)上樣, 考察不同上樣流速(0.5、1.0、1.5、2.0 mL/min)對動態(tài)吸附率的影響, 確定動態(tài)吸附的最大上樣體積。取等體積、黃酮濃度相同的上樣溶液以一定上樣流速動態(tài)吸附后, 用一定體積蒸餾水動態(tài)沖洗殘留液后, 考察不同濃度洗脫劑(50%、60%、70%、80%、90%乙醇)、洗脫流速(0.5、1、1.5、2 mL/min)對動態(tài)解吸率的影響, 確定最大洗脫體積。

1.4 驗證實驗

按最佳上樣及洗脫條件對海蘆筍總黃酮進行純化, 按上述公式分別計算純化后海蘆筍黃酮的回收率以及干品中黃酮的純度。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

本實驗所有數(shù)據(jù)均以平均值±標準差表示, 每組試驗重復(fù) 3次, 采用SPSS軟件對實驗結(jié)果進行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 5種大孔樹脂的靜態(tài)吸附與解吸實驗結(jié)果

AB-8型、D101型、D101-1型、DM130型、HPD600型5種大孔樹脂對海蘆筍總黃酮的吸附與解吸結(jié)果如表1所示。

表1 5種大孔樹脂對海蘆筍總黃酮的靜態(tài)吸附與解吸結(jié)果

注: 與HPD600相比, 吸附率*<0.05、**<0.01, 吸附量◇<0.05、◇◇<0.01; 與D101相比, 解吸率#<0.05、##<0.01, 解吸量△<0.05、△△<0.01。

在上樣溶液黃酮含量相同、樹脂用量相同的情況下, 由于這5種大孔樹脂的比表面積、平均孔徑、極性不同, 對海蘆筍總黃酮的吸附與解吸能力也不同。由表1可見, 5種樹脂對海蘆筍黃酮的吸附能力順序為: HPD600>AB-8>D101>D101-1>DM130, 其中HPD600型大孔樹脂對海蘆筍黃酮的吸附效果最佳(26.48 mg/g±0.34 mg/g), 顯著高于D101-1、DM130,<0.01, 但與AB-8、D101相比沒有顯著差異,>0.05。這可能是因為海蘆筍總黃酮具有一定極性, 根據(jù)大孔樹脂的吸附特性, 極性、弱極性樹脂對其具有較好的吸附效果, 而以上5種樹脂中, AB-8型樹脂作為弱極性樹脂, HPD600型樹脂為極性樹脂, 這兩種樹脂對海蘆筍黃酮的吸附率較其他幾種高。5種樹脂對黃酮的解吸性能順序為: D101>HPD600> DM130>D101-1>AB-8, 其中D101型大孔樹脂的黃酮解吸率顯著高于其余四種大孔樹脂(<0.01), 達98.70%±1.00%, 可能是因為D101型大孔樹脂的比表面積和孔徑的疏水性比其他樹脂更強, 因此, 吸附在表面海蘆筍黃酮解吸更容易[28]。由實驗結(jié)果可知, 5種樹脂中, D101型大孔樹脂與HPD600型大孔樹脂的黃酮回收量最大, 最適于海蘆筍黃酮的純化, 因此, 將這兩種樹脂按一定質(zhì)量比例混合對海蘆筍黃酮進行吸附與解吸。

2.2 不同混合比例的樹脂的靜態(tài)吸附與解吸實驗結(jié)果

由表2可以得知, 將D101型樹脂與HPD600型樹脂按照不同質(zhì)量比例混合后, 對海蘆筍黃酮的吸附效率順序為: 3︰2>1︰1>2︰3>0︰1>1︰0, 解吸效率排序為: 3︰2>2︰3>1︰1>1︰0>0︰1。因此, 當D101︰HPD600=3︰2時, 對海蘆筍黃酮的吸附率、解吸率最高, 分別為92.13%±0.29%, 99.38%±0.50%, 同時對海蘆筍黃酮的回收率也最高, 達91.36%±0.75%。由此可知, 當質(zhì)量比例為D101︰HPD600=3︰2時最適合用于海蘆筍總黃酮的分離純化。

表2 不同混合比例樹脂對海蘆筍總黃酮的靜態(tài)吸附與解吸結(jié)果

注: 與3︰2相比, 吸附率*<0.05、**<0.01, 解吸率#<0.05、##<0.01, 回收率△<0.05、△△<0.01。

2.3 不同因素對混合樹脂純化海蘆筍總黃酮的影響

2.3.1 上樣液pH對混合樹脂靜態(tài)吸附率的影響

將等體積、相同黃酮含量的上樣溶液調(diào)節(jié)pH分別為3、4、5、6、7后, 加入1.0 g混合好的樹脂, 其黃酮吸附效果如圖1所示。實驗結(jié)果表明, pH值對吸附率的的影響較大, 當pH=5時, 黃酮吸附率最大, 且與其他pH組差異顯著(<0.01), 這可能由于黃酮類化合物是多羥基酚類, 為弱酸性, 當酸性條件時呈分子狀態(tài), 更容易以氫鍵形式與樹脂結(jié)合。當pH>5時, 隨著pH升高, 黃酮酚羥基上的H易解離成酸根離子, 不易與樹脂結(jié)合, 吸附率降低。當pH<5時, 隨pH降低, 黃酮易形成烊鹽, 不利于大孔樹脂的吸附[29]。

2.3.2 上樣液黃酮濃度對混合樹脂靜態(tài)吸附率的影響

分別配制等體積上樣液, 黃酮質(zhì)量濃度為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 g/L, 將pH調(diào)至5, 加入等量混合樹脂, 其靜態(tài)吸附結(jié)果圖2所示, 當上樣液黃酮濃度在0.5~1.0 g/L時, 樹脂對海蘆筍黃酮的吸附率最高, 隨著黃酮濃度升高, 由于上樣液質(zhì)量濃度過高, 雜質(zhì)造成大孔樹脂表面堵塞, 使樹脂的黃酮吸附率呈現(xiàn)下降趨勢[23]。由方差分析可知, 濃度為0.5 g/L和1.0 g/L時, 吸附率差異不顯著, 因此參考黃酮回收率作為選擇指標, 當上樣液黃酮濃度為0.5 g/L時, 黃酮的回收率最高(<0.05), 由此可見, 上樣液濃度以0.5 g/L最為適宜。

2.3.3 上樣流速對混合樹脂動態(tài)吸附率的影響

上樣流速對混合樹脂動態(tài)吸附效率的影響如圖3所示。取等量的pH=5、黃酮濃度相同的上樣液分別以0.5、1、1.5、2 mL/min動態(tài)上樣, 計算吸附率。實驗結(jié)果表明, 隨著上樣液流速增大, 混合樹脂對海蘆筍黃酮的動態(tài)吸附率降低。因為, 在較慢的流速下, 上樣液與黃酮能夠更加充分的接觸、吸附, 吸附率就高, 反之, 流速升高, 溶液中的黃酮尚未被吸附就被沖走, 吸附率下降[28]。因此當流速為0.5 mL/min時, 吸附效果最佳(<0.05), 但同時, 由于流速較慢, 純化周期隨之延長, 因此選擇1 mL/min作為最適上樣流速, 在不影響吸附率的前提下縮短了純化時間。

2.3.4 最大上樣量的確定

取一定體積的海蘆筍總黃酮溶液(黃酮濃度0.5 g/L),以1 mL/min的上樣流速動態(tài)上樣(樹脂約6.5 g), 每8 mL(1BV)為一份進行收集, 共31份, 收集結(jié)束后, 比色法測定每份收集液中的黃酮質(zhì)量濃度, 以此繪制黃酮泄露曲線, 實驗結(jié)果如圖4所示。

上樣液體積在5~44 mL時, 流出液黃酮濃度增大較快, 當上樣溶液體積在45~170 mL時, 流出液的黃酮濃度增加緩慢, 上樣液體積在170~218 mL時, 流出液黃酮濃度基本不變, 當上樣量大于218 mL后, 流出液中黃酮濃度開始迅速增加, 不適合繼續(xù)上樣[30]。由此可知, 當上樣量為218 mL(27BV)時, 混合樹脂對海蘆筍黃酮的吸附量趨近飽和, 因此27BV為最大上樣體積, 此時樹脂吸附量為16.8 mg/g。

2.3.5 洗脫劑濃度對混合樹脂動態(tài)解吸率的影響

黃酮類化合物易溶于甲醇、乙醇溶液等低級醇溶液中, 在選擇洗脫劑時, 考慮到在乙醇溶液中的黃酮溶解度較大, 易于從樹脂上將其洗脫下來, 且可回收、毒性低[31],因此按上述實驗確定的吸附條件,取適量且相同的上樣液分別動態(tài)上樣后, 以4BV蒸餾水動態(tài)沖洗樹脂間殘留液后, 將等體積的50%、60%、70%、80%、90%的乙醇溶液作為洗脫劑以相同的流速對樹脂進行洗脫, 實驗結(jié)果見圖5。

由圖5可知, 當洗脫劑濃度為60%時, 黃酮的解吸率最高, 與其余洗脫劑濃度條件相比, 差異較為顯著(<0.05)。當濃度大于60%時, 隨著濃度增大, 解吸率降低, 這可能是因為60%的乙醇溶液的極性與海蘆筍黃酮更接近, 根據(jù)相似相溶原理, 海蘆筍黃酮在60%的乙醇溶液中溶解度較高, 以其作為洗脫劑能夠最大程度的將吸附在大孔樹脂表面的黃酮洗脫下來[32]。而且更高濃度的洗脫劑浪費溶劑, 增大成本。因此采用60%的乙醇溶液作為洗脫劑。

2.3.6 洗脫流速對混合樹脂動態(tài)解吸率的影響

按照上述確定的最優(yōu)吸附條件分別動態(tài)上樣后, 用4BV蒸餾水以2 mL/min的流速沖洗上樣殘留液, 收集所有流出液以計算樹脂的吸附量。取等體積的、60%的乙醇溶液, 以0.5、1、1.5、2 mL/min的流速分別對吸附后的樹脂進行洗脫, 收集洗脫液, 測定黃酮濃度, 計算其解吸率。

如圖6所示, 隨著洗脫流速的升高, 樹脂的解吸率逐漸下降。這可能是因為, 在較慢的流速下, 樹脂與洗脫劑有更加充分的接觸, 樹脂上吸附的黃酮能夠更多的溶解到洗脫劑中, 因此以0.5 mL/min作為洗脫流速。

另外, 由圖6可知, 混合大孔樹脂對海蘆筍黃酮的解吸率明顯高于AB-8型大孔樹脂對海蘆筍黃酮的純化工藝中的最大解吸率(85.25%), 因此混合大孔樹脂比AB-8更適于純化海蘆筍黃酮[17]。

2.3.7 最佳洗脫體積的確定

以最大的上樣量按照上述的最佳吸附條件上樣, 使得樹脂吸附飽和后, 再以1 mL/min的洗脫流速, 用一定量60%的乙醇溶液進行洗脫, 對洗脫液每1BV收集為一段, 總共21BV, 測定每段收集液中黃酮的濃度, 以此繪制動態(tài)解吸曲線, 結(jié)果見圖7。

以60%乙醇進行洗脫, 圖7中峰形集中, 無拖尾, 當洗脫劑的用量為3BV時, 洗脫液中的黃酮濃度達到最高點, 之后, 隨著洗脫劑用量增加, 黃酮濃度降低, 當用量為8BV時, 樹脂上的黃酮基本被洗脫下來, 洗脫液中黃酮濃度趨近于0, 繼續(xù)增加洗脫劑用量, 黃酮濃度不再變化, 浪費洗脫劑。因此, 選擇8BV作為最佳洗脫體積[32]。

2.4 驗證實驗結(jié)果

取黃酮濃度為0.5 g/L、pH=5的上樣液50 mL, 根據(jù)上述所得的最佳吸附體條件樣后, 以2 mL/min的流速用4BV的蒸餾水沖洗樹脂。再按照得到的最佳解吸條件進行洗脫。純化結(jié)束后, 測定洗脫液中黃酮含量, 計算回收率, 制得黃酮干品后, 計算黃酮純度, 結(jié)果見表3。結(jié)果表明, 經(jīng)混合大孔樹脂純化后海蘆筍總黃酮的純度提高較大, 由10.13%±0.72%增至45.91%±0.44%, 黃酮回收率較高, 說明混合樹脂適于海蘆筍黃酮的分離純化, 因此, 可利用此方法對海蘆筍黃酮進行兩次純化, 進一步用于研究海蘆筍的生理活性以及實際應(yīng)用。

表3 純化后樣品的黃酮回收率與純度

3 結(jié)論

1) 本實驗研究了海蘆筍總黃酮的大孔樹脂純化工藝, 通過靜態(tài)實驗在5種黃酮純化常用樹脂中挑選出兩種——HPD600型、D101型大孔樹脂混合后用于純化。

2) 最佳純化條件為: 將D101、HPD600按照質(zhì)量比為3︰2進行混合后, 濕法裝柱, 對海蘆筍黃酮進行動態(tài)純化, 在上樣液黃酮質(zhì)量濃度0.5 g/L, pH值為5, 上樣流速為1.0 mL/min的條件下進行吸附, 上樣量最大為27BV。吸附完全后, 以4BV蒸餾水按2 mL/min的流速沖洗殘留液, 之后以0.5 mL/min的流速, 用60%的乙醇溶液進行洗脫, 最佳洗脫體積為8BV。

3) 純化后樣品中總黃酮的含量由10.13%± 0.72%增至45.91%±0.44%, 提高了3倍, 黃酮回收率為86.74%±0.46%。此法簡便可行, 成本較低, 且工藝重復(fù)性良好, 適用于實際生產(chǎn), 且與已有的海蘆筍黃酮AB-8型大孔樹脂純化工藝相比, 黃酮解吸率、回收率更高。

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Purification of total flavonoids fromTorrusingmixed macroporous resin

DUAN Xiao-shan, ZHANG Zhao-hui, YING Rui, ZHAO Teng-fei, HOU Hu, ZHAO Xue

(College of Food Science and Engineering, Ocean University of China, Qingdao 266003, China)

Westudied the purification technology of total flavonoids fromTorrusing adsorption, desorption, and recovery rates of flavonoids as the evaluationindices.D101 and HPD600 were selected from five types ofmacroporous resin for purification and were mixed in a ratio of 3︰2forpurification. We showed that the optimal purification conditions includeflavonoids concentration of sample (0.5 mg/mL), pH value (5), the flow rate (1 mL/min), and the maximum sample volume(27BV). After completeadsorption, themacroporousresin column was washed with 4BV distilled water with a flow rate of 2mL/min and eluted with 8BV60% alcohol and a flow rate of 0.5mL/min. We found that the purity of the sample increased to 45.91%±0.44% after purification, with a recovery rate of 86.74%±0.46%.Thus, the mixed resin improves purification outcome, and thistechnology can also be applied tothe purification oftotal flavonoids fromTorr

Torr; total flavonoids; mixed resin; purification

TS201.1

A

1000-3096(2017)01-0030-09

10.11759/hykx20160331001

2016-03-31;

2016-06-30

國家自然科學基金(31272705)

段筱杉(1992-), 女, 山東青島人, 研究生, 研究方向: 海洋活性物質(zhì), 電話: 18766216072, E-mail: xiaoshanishare@163.com; 張朝輝(1968-), 通信作者, 男, 山東威海人, 副教授, 研究方向: 水產(chǎn)化學、海洋生物活性成分及水產(chǎn)品加工, E-mail: zhangzhh@ouc.edu.cn.

Mar. 31, 2016

[National Natural Science Foundation of China, No.31272705]

(本文編輯: 康亦兼)