陳小芳 鐘曉明 黃真 應(yīng)夏麗 梁利

浙江中醫(yī)藥大學(xué) 杭州 311402

海芋多糖提取工藝優(yōu)化及其單糖組成分析

陳小芳 鐘曉明 黃真 應(yīng)夏麗 梁利

浙江中醫(yī)藥大學(xué) 杭州 311402

[目的]優(yōu)選海芋Alocasia macrorrhiza(Lour.)Schott多糖的最佳提取工藝，并分析其單糖組成。[方法]通過L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以多糖提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選海芋多糖的最佳提取工藝；多糖經(jīng)酸水解、PMP衍生化，高效液相色譜分析其單糖組成。[結(jié)果]海芋多糖的最佳提取工藝：95℃，料液比1:20，回流提取3次，每次2h；在此條件下，多糖提取率為11.20%；PMP衍生化高效液相色譜法分析得海芋多糖主要由甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等單糖組成。[結(jié)論]本實(shí)驗(yàn)成功建立簡便、穩(wěn)定可行的海芋多糖提取工藝，并對其單糖組成進(jìn)行了研究，為合理地開發(fā)海芋資源提供了一定理論依據(jù)。

海芋多糖；提取工藝；正交試驗(yàn)；優(yōu)化；葡萄糖；單糖；柱前衍生化

海芋為天南星科Araceae海芋屬Alocasia植物海芋Alocasia macrorrhiza(Lour.)Schott的干燥根莖，又名天荷、滴水芋、廣東狼毒、野芋頭等[1]。海芋味辛，性寒，有毒，具有清熱解毒、行氣止痛、散結(jié)消腫之功，常被用于高熱流感、風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、疔瘡腫毒、蛇蟲叮咬等方面的治療[2]。海芋主要成分有凝集素、多糖、腦苷、氰苷等[2-4]?，F(xiàn)代研究表明，海芋具有一定的抗腫瘤[5-6]、解熱[7-8]、抗炎鎮(zhèn)痛[9]、抗真菌[10-11]、抗氧化[12]等生物活性。

近年來，多糖的藥理活性研究已成為熱點(diǎn)，大量研究表明多糖具有促進(jìn)免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化等多種生物活性[13-14]。而海芋多糖作為海芋的主要有效成分之一，其相關(guān)研究較少[2]。本文旨在對海芋多糖提取工藝優(yōu)化及單糖組成進(jìn)行系統(tǒng)探討，為海芋多糖的深入研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)及理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 BS124S型電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司），RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠），5430R高速冷凍離心機(jī)（德國艾本德公司），UV-1800紫外分光光度計(jì)（島津中國），Waters 1525型泵、2489型紫外檢測器、breeze 2色譜工作站（美國waters公司）。

1.2 試藥 海芋自采于重慶地區(qū)，經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥資源鑒定研究所陳孔榮副教授鑒定為天南星科Araceae海芋屬Alocasia植物海芋Alocasia macrorrhiza(Lour.)Schott的干燥根莖。阿拉伯糖（批號(hào)：1506-200001）、D-半乳糖醛酸（批號(hào)：111646-200301）、D-無水葡萄糖（批號(hào)：110833-200904）、D-甘露糖（批號(hào)：140651-200301）、D-半乳糖（批號(hào)：100226-201105）購自中國食品藥品檢定研究院。乙腈為色譜純（美國TEDIA），其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 海芋多糖的提取 稱取海芋粉末3g，95%乙醇回流提取6h，進(jìn)行脫脂預(yù)處理，抽濾，藥渣揮盡醇，加入60mL蒸餾水，95℃回流提取2h，過濾，濾液蒸餾水定容至100mL容量瓶中，取1mL加入5倍預(yù)冷95%乙醇，4℃靜置過夜，離心（4000r/min）10min，棄上清得海芋粗多糖，加入熱蒸餾水溶解，稀釋，即得海芋多糖供試品溶液[15-17]。

References:

1.做好成果轉(zhuǎn)化的流程銜接。研究發(fā)現(xiàn)，就整個(gè)科研成果轉(zhuǎn)化過程而言，需要重點(diǎn)關(guān)注選題、銜接、推廣、交流、配套五個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，實(shí)做好應(yīng)用型研究導(dǎo)向、科研項(xiàng)目與生產(chǎn)實(shí)踐的對接、科研成果的推廣傳播、博士后及相關(guān)技術(shù)人員的培訓(xùn)、轉(zhuǎn)化應(yīng)用配套條件。

2.2 海芋多糖的測定

結(jié)合新聞報(bào)道、學(xué)術(shù)研究以及裁判文書網(wǎng)，筆者發(fā)現(xiàn)針對共享單車不法行為類型繁多，處罰方式各異?？偨Y(jié)對共享單車的不法行為，筆者發(fā)現(xiàn)三種較為典型的不法行為：私藏共享單車、給共享單車上私鎖以及毀壞共享單車。相較于傳統(tǒng)犯罪，針對共享單車的犯罪屬于“新生事物”，因而理論界和司法界對于針對共享單車的刑法規(guī)制眾說紛紜，各執(zhí)一詞。以下，筆者將對這三種典型不法行為的刑事責(zé)任進(jìn)行探討。

2.2.1 葡萄糖對照品溶液的配制 精密稱取干燥至恒重的葡萄糖對照品20.00mg，溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶，蒸餾水定容至刻度，即得2.00mg·mL-1的葡萄糖對照品溶液，備用。

2.2.2 檢測波長 精密吸取葡萄糖對照品溶液0.1mL，定容至25mL容量瓶中，后吸取2mL對照品溶液，置于具塞試管，加入1mL 5%苯酚溶液，渦旋混勻，再快速加入5mL濃硫酸，渦旋20s，沸水浴20min，取出，冰水浴冷卻10min，另取上述海芋多糖溶液2mL，同法操作，蒸餾水作為空白試驗(yàn)，在300～800nm波長范圍內(nèi)掃描[17-18]。結(jié)果海芋多糖溶液在489nm 波長處有最大吸收與葡萄糖對照品溶液在490nm波長處的最大吸收非常接近。因此，最終確定檢測波長為490nm，如圖1-1、1-2。

圖1-1 葡萄糖紫外掃描譜圖Fig.1-1 Ultraviolet absorption spectrum of glucose

圖1-2 海芋多糖紫外掃描譜圖Fig.1-2 Ultraviolet absorption spectra of Polysacharide

2.5.6 海芋多糖的單糖組成測定 精密稱取海芋多糖3份，每份20mg，按2.5.3項(xiàng)下制備樣品，2.5.4項(xiàng)下進(jìn)行衍生化處理，在上述色譜條件下進(jìn)行測定，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算各單糖含量。測定結(jié)果表明海芋多糖主要由甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖構(gòu)成，其含量分別為 4.04%、4.08%、82.50%、7.97%、1.40%，見圖2。

2.2.4 海芋多糖提取率的測定 取海芋多糖供試品溶液2mL，按2.2.2項(xiàng)下操作測定吸光度。根據(jù)回歸方程計(jì)算海芋多糖供試品溶液中多糖的質(zhì)量濃度。再按下列公式計(jì)算海芋多糖提取率。

海芋多糖提取率=多糖質(zhì)量濃度（mg·mL-1）×液體體積（mL）×稀釋倍數(shù)/海芋粉末質(zhì)量（mg）×100%。

2.3 海芋多糖提取條件的優(yōu)化 通過預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以海芋多糖提取率為考察指標(biāo)，對提取溫度（A）、料液比（B）、提取時(shí)間（C）、提取次數(shù)（D）4個(gè)因素進(jìn)行考察，因素水平見表1。稱取海芋粉末3g，平行9份，置于圓底燒瓶中，按L9(34)正交試驗(yàn)表分別進(jìn)行回流提取，按2.1項(xiàng)下處理提取液，2.2項(xiàng)下測定及計(jì)算。試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表2。不考慮交互作用，進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3。

[4]NQ Tien,PH Ngoc,PH Minh,et al.New ceramide from Alocasia macrorrhiza[J].Arehiv of Pharm Res,2004,27(10): 1020-1022.

[5] 趙俊.不同溶劑海芋提取物的體外抗腫瘤活性研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2008,19(8):1865-1866. ZHAO Jun.Anticancer Effects of Diffenent Solvent Extracts from Alocasia Macrorrhizain Vitro[J].Lishizhen Medicine and Materia Medica Research,2008,19(8):1865-1866.

表1 海芋多糖提取工藝的因素水平表Tab.1 Factors and levels of polysaccharide extraction process

表2 L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果表Tab.2 Results of L9(34)orthogonal array design and range analysis

表3 方差分析Tab.3 Analysis of varlance

2.5 海芋多糖的組成分析

2.5.1 色譜條件 色譜柱：Sunfire TM C18（4.6×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.02mol·L-1乙酸銨溶液（20: 80），0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣；流速：0.8mL·min-1；柱溫：30℃；檢測器：紫外檢測器，檢測波長為250nm；進(jìn)樣體積：10μL。

2.5.2 混合對照品溶液的配制 分別精密稱取對照品甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖3.01、6.01、40.01、5.06、2.57mg，溶解，轉(zhuǎn)移至20mL容量瓶，蒸餾水定容至刻度，混勻，即得混合對照品溶液。

在2016年1月—2018年1月之間展開本次研究，選擇對應(yīng)研究時(shí)間段內(nèi)的50例多發(fā)性骨髓瘤患者作為研究對象，50例患者的年齡為40～79歲，平均年齡為（62.38±2.34）歲，患者的病程為10天～8個(gè)月，平均病程為（6.94±1.39）個(gè)月；患者中27例男性、23例女性，其均伴隨有不同程度的全身疼痛現(xiàn)象，且15例患者主訴腰背疼痛感明顯、8例患者有肩痛不適感；除過以疼痛感覺為主要表現(xiàn)外，多數(shù)患者存在頭暈、心悸等不適癥狀。本次研究前患者或家屬均已經(jīng)了解研究概況，入選者均在知情的基礎(chǔ)上同意參加本次研究[2]。

2.5.3 樣品溶液的制備 精密稱取由最佳工藝提取的海芋多糖20mg，置頂空瓶中，1.0mL蒸餾水溶解，加3.0mol·L-1鹽酸溶液3mL，封口，混勻，110℃水解1h，放冷，3.0mol·L-1NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至中性，蒸餾水定容至10mL容量瓶，離心（5000r·min-1）10min，取上清，備用[19-20]。

2.5.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取海芋多糖6份，每份20mg，按2.5.3項(xiàng)下制備樣品，2.5.4項(xiàng)下進(jìn)行衍生化處理，在上述色譜條件下進(jìn)行測定，測定結(jié)果表明甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖的峰面積RSD分別為1.64%、3.92%、1.59%、1.14%、3.25%，表明本方法重復(fù)性較好。

2.5.5 方法學(xué)考察

2.5.5.1 混合對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取混合對照品溶液0.25、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置于10mL量瓶中，蒸餾水定容至刻度線，搖勻，作為系列對照品溶液。按2.5.4項(xiàng)下進(jìn)行衍生化處理，按上述色譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖。以對照品溶液濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)X，相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品峰面積為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算回歸方程。甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖的回歸方程及其線性關(guān)系，見表4。

表4 5種單糖的回歸方程和線性范圍Tab.4 Linear equations with correlation coefficients and linear ranges of five monosaccharose

2.5.5.2 精密度試驗(yàn) 取混合對照品溶液，按2.5.4項(xiàng)下進(jìn)行衍生化處理，在上述色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定結(jié)果表明甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖的峰面積RSD分別為0.71%、2.37%、0.42%、0.37%、0.41%，表明儀器精密度良好。

2.5.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取海芋多糖20mg，按2.5.3項(xiàng)下制備樣品，2.5.4項(xiàng)下進(jìn)行衍生化處理，在上述色譜條件下，于0、2、4、6、8、12、24h分別進(jìn)樣，測定結(jié)果表明12h內(nèi)甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖的峰面積RSD分別為0.72%、5.3%、0.52%、0.42%、0.41%，12h后半乳糖醛酸極不穩(wěn)定，表明衍生化后的海芋多糖水解液在12h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.5.4 PMP衍生化方法 精密吸取混合對照品溶液或海芋多糖溶液400μL，加0.5mol·L-1PMP甲醇溶液與0.3mol·L-1氫氧化鈉溶液各400μL，混勻，70℃水浴反應(yīng)100min。冷卻至室溫，加500μL 0.3mol·L-1的鹽酸溶液，混勻，氯仿洗滌3次，每次2mL，離心取上清，0.45μm微孔濾膜過濾，即得[19-21]。

⑵工作原理，用戶通過Web節(jié)目提前了解所需停車附近區(qū)域的各個(gè)停車場信息，包括停車數(shù)量、到達(dá)路線等信息來選擇合適的停車點(diǎn)。當(dāng)車低速抵達(dá)停車場入口時(shí)自動(dòng)遠(yuǎn)程讀寫設(shè)備就會(huì)探測到車輛的電子標(biāo)簽，然后車輛的相關(guān)信息就會(huì)被讀入系統(tǒng)，并將這些信息傳送給物聯(lián)網(wǎng)數(shù)據(jù)平臺(tái)，經(jīng)過數(shù)據(jù)處理決定是否給予停車權(quán)限并同時(shí)記錄相關(guān)信息。當(dāng)車輛正常入庫則平臺(tái)系統(tǒng)會(huì)記錄相關(guān)信息，更新停車數(shù)量、車位等信息，并通過Web來更新信息。如果車輛無法被識(shí)別那么系統(tǒng)會(huì)反饋信息，由停車管理系統(tǒng)引導(dǎo)用戶停車，并自動(dòng)存儲(chǔ)記錄該車輛信息，同時(shí)更新Web信息[3]。

2.5.5.5 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品6份，每份10mg，分別精密加入已知含量的混合對照品溶液，按2.5.3項(xiàng)下制備樣品，2.5.4項(xiàng)下進(jìn)行衍生化處理，在上述色譜條件下進(jìn)行測定，測定結(jié)果表明甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖的平均回收率分別為99.6%、102.1%、96.4%、98.8%、98.0%；其RSD分別為1.72%、3.12%、1.15%、0.90%、1.37%。

2.2.3 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取葡萄糖對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL分別置25mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻。分別吸取上述溶液2mL，按2.2.2項(xiàng)下操作測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)Y，葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)X，繪制回歸曲線，計(jì)算得回歸方程Y=0.0581X+0.0285，r=0.9992。結(jié)果表明葡萄糖濃度在2.95～11.56ug·mL-1之間與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

3 討論

苯酚-硫酸法是目前測量多糖含量常用方法之一，其中單糖對照品的合理選用是多糖含量測定過程中普遍存在的問題。有學(xué)者使用苯酚-硫酸法對同一植物多糖含量進(jìn)行測定，研究發(fā)現(xiàn)以半乳糖為對照所測多糖含量值較葡萄糖大30%以上[22]。由于不同單糖所繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率不同，只有選擇合適的對照品才能得到最佳測定結(jié)果。有文獻(xiàn)[23]報(bào)道對于未知的雜多糖應(yīng)以主要組成單糖為其對照品進(jìn)行測定。本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)[15,24]及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇以葡萄糖為對照品，而最大吸收波長及PMP柱前衍生化分析結(jié)果均體現(xiàn)了該對照品選擇的合理性。

設(shè)計(jì)意圖：教師引導(dǎo)學(xué)生明確遺傳物質(zhì)應(yīng)該具有的特點(diǎn)，使學(xué)生能夠理解為什么當(dāng)時(shí)科學(xué)家會(huì)認(rèn)為蛋白質(zhì)是遺傳物質(zhì)。

程磊等[15]對海芋多糖組成進(jìn)行了研究，初步確定海芋多糖由葡萄糖、半乳糖和甘露糖3種單糖組成。王輝等[24]也對海芋多糖的組成進(jìn)行了分析，認(rèn)為其主要由葡萄糖、鼠李糖組成。本實(shí)驗(yàn)通過PMP柱前衍生化高效液相色譜法對海芋多糖組成進(jìn)行了分析，結(jié)果表明其主要由甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖構(gòu)成，對文獻(xiàn)報(bào)道進(jìn)行了補(bǔ)充，數(shù)據(jù)存在一定出入，這可能是因?yàn)闄z測方法的靈敏度或海芋產(chǎn)地的不同所造成。本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，多糖經(jīng)水解衍生化，各單糖衍生物穩(wěn)定性存在差異，其中半乳糖醛酸衍生物信號(hào)衰減較為迅速，故該部分實(shí)驗(yàn)均在自衍生化后12h內(nèi)完成。

圖2 海芋多糖色譜Fig.2 HPLC chromatograms

海芋分布廣泛，易于栽培，具有一定的藥用價(jià)值，屬于民間習(xí)用藥。目前海芋相關(guān)研究主要集中在抗癌、抑菌等方面，而對海芋多糖的相關(guān)研究較少。本實(shí)驗(yàn)對海芋多糖的提取工藝及組成進(jìn)行系統(tǒng)研究，旨在為海芋多糖的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

選定地塊后，應(yīng)考慮土壤生態(tài)環(huán)境對黃芩生長的影響，張向東等研究發(fā)現(xiàn)，隨著土壤緊實(shí)度增大，黃芩根系活力降低，加速植株衰老[25]；土壤中有重金屬元素累積時(shí)，黃芩中重金屬含量與土壤中重金屬含量成正比[26]。黃芩連作障礙來自于生長年限延長，土壤中真菌含量隨之增加，且根際真菌增長幅度顯著高于非根基區(qū)域[27]，提高根腐病發(fā)病幾率[6]。

由于我國東部地面雨量觀測站點(diǎn)多且分布密度大,而西部觀測站點(diǎn)少、分布密度小且地形復(fù)雜(潘旸等,2012;沈艷等,2010,2013;Shen and Xiong,2015)。為了更加客觀地分析IMERG產(chǎn)品在我國大陸地區(qū)的降水估計(jì)精度,本文以100°E為界(廖榮偉等,2015),將中國大陸分為東、西兩部分(記為“東部”和“西部”)進(jìn)行研究。

[1] 中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會(huì).中國植物志 [M].北京:科學(xué)出版社,1986:76-78. Editorial Committee of flora of China,Chinese Academy of Sciences.Flora of China[M].Beijing:Science Press, 1986:76-78.

[2] 陳美婉,陳文榮,李書淵,等.廣東狼毒的化學(xué)成分及藥理作用的研究進(jìn)展[J].中藥藥理與臨床,2011,27(3):128-131. CHEN Meiwan,CHEN Wenrong,LI Shuyuan,et al.Research Progress on chemical constituents and pharmacological effects of Alocasia[J].Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica,2011,27(3):128-131.

[3] 雷霄,徐朝暉,王源,等.海芋屬植物化學(xué)成分及生物活性研究進(jìn)展[J].中國新藥與臨床雜志,2013,32(3):163-166. LEI Xiao,XU Zhaohui,WANG Yuan,et al.Advances in chemical constituents and biological activity of Alocasia [J].Chin J New Drugs Clin Rem,2013,32(3):163-166.

根據(jù)直觀分析及方差分析結(jié)果可知，各因素對海芋多糖提取工藝的影響程度為D＞A＞C＞B，且表明A、D因素具有顯著影響。直觀分析表明，海芋多糖的最佳提取工藝為A3B1C2D3，即提取溫度為95℃，料水比為1:20（g·mL-1），提取時(shí)間為2h，提取次數(shù)為3次。

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn) 稱取海芋粉末3g，平行3份，按最佳工藝提取，海芋多糖平均提取率分別為11.26%、11.10%、11.25%，平均提取率為11.20%，RSD值為0.80%，表明該工藝穩(wěn)定可行。

[6] 方勝濤,林采余,張全波,等.海芋粗提物對人肝癌細(xì)胞的細(xì)胞毒和凋亡誘導(dǎo)作用[J].腫瘤預(yù)防與治療,2011,24(2): 69-73. FANG Shengtao,LIN Caiyu,ZHANG Quanbo,et al.The Cytotoxic and Apoptotic Effect of Crude Extract of Alocasia Macrorrhiza on Human Hepatocellular Carcinoma Cells[J].J Canc Control Treat,2011,24(2):69-73.

[7] 張俊榮,李育浩,吳清和,等.海芋及其不同炮制品煎劑解熱作用初步實(shí)驗(yàn)研究[J].新中醫(yī),1997,29(8):31-33. ZHANG Junrong,LI Yuhao,WU Qinghe,et al.Preliminary experimental research on antipyretic effect of Alo-casia Decoction and its different processed products[J]. Journal of New Chinese Medicine,1997,29(8):31-33.

[8] 張俊榮,李育浩,吳清和,等.海芋不同提取部位對大鼠酵母性發(fā)熱的抑制作用及對下丘腦中PGE_2含量的影響[J].新中醫(yī),1999,31(5):41-42. ZHANG Junrong,LI Yuhao,WU Qinghe,et al.Inhibitory effects of different extracts of Alocasia yeast induced fever in rats and its effect on the PGE_2 content in the hypothalamus[J].Journal of New Chinese Medicine,1999, 31(5):41-42.

1) 從泵進(jìn)口到出口，壓力逐漸增大；隨著泵進(jìn)口壓力降低，流道內(nèi)低壓區(qū)范圍增大，高壓區(qū)范圍減少以至消失。

[9] 盧先明,黃國均,蔣桂華,等.海芋抗炎鎮(zhèn)痛的藥效學(xué)研究[J].四川中醫(yī),2005,23(10):44-45. LU Xianming,HUANG Guojun,JIANG Guihua,et al. Study on the anti-inflammatory and analgesic effect of Alocasia[J].Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine, 2005,23(10):44-45.

[10]王雅東,廖美德,張競立,等.海芋甲醇提取物的抑真菌作用[J].農(nóng)藥,2006,45(11):744-745,757. WANG Yadong,LIAO Meide,ZHANG Jingli,etal. Tested on antifungal activity of Alocasia odora methanol extract[J].Agrochemicals,2006,45(11):744-745,757.

[11]WANG HX,NG TB.Alocasin,an anti-fungal protein from rhizomes of the giant taro Alocasia macrorrhiza[J].Protein Expression and Purification,2003,28(1):9-14.

[12]P Mandal,TK Misra,ID Singh.Antioxidant activity in the extracts of two edible aroids[J].Indian J Pharm Sci, 2010,72(1):105-108.

[13]韓果萍,段玉峰.我國天然活性多糖藥理研究進(jìn)展[J].中藥材,2003,26(2):138-141. HAN Guoping,DUAN Yufeng.ResearchProgresson pharmacologicalactivitiesofnaturalactivepolysaccharides in China[J].Journal of Chinese Medicinal Materials, 2003,26(2):138-141.

[14]安曉娟,馮琳,宋紅平,等.植物多糖的結(jié)構(gòu)分析及藥理活性研究進(jìn)展[J].中國藥學(xué)雜志,2012,47(16):1271-1275. AN Xiaojuan,FENG Lin,SONG Hongping,et al.Structure analysis and pharmacological activity of plant polysaccharides[J].Chin Pharm J,2012,47(16):1271-1275.

[15]程磊,周秀佳.海芋中海芋多糖的組成和含量測定[J].中草藥,2004,35(6):49-51. CHENG Lei,ZHOU Xiujia.Composition and content determination of Polysaccharides of Alocasia macrorrhiza[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs,2004,35(6):49-51.

[16]孫曉燕,萬穎,鄧雪濤,等.間接高效液相色譜法分析測定金鐵鎖多糖的單糖組成[J].藥物生物技術(shù),2010,17(2): 165-167. SUN Xiaoyan,WAN Ying,DENG Xuetao,et al.Determination of monosaccharide composition of p.tunicoides indirectly by HPLC[J].Pharmaceutical Biotechnology,2010, 17(2):165-167.

黑背心拿上包，泰森套上汗衫，我不知道他們忙碌起來要干什么，仍吃著鍋巴。泰森惡狠狠地說：“不吃了，出發(fā)！”

[17]趙云生,毛福英,姚?；?等.麻黃多糖提取工藝優(yōu)化研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2014,25(4):787-789. ZHAO Yunsheng,MAO Fuying,YAO Haihua,etal. Study on Optimized Extraction Technology of Polysaccharides from Ephedra sinica Stapf[J].Lishizhen Medicine and Materia Medica Reseaech,2014,25(4):787-789.

[18]肖志偉,樂智勇,朱國雪,等.人參多糖檢測方法及提取工藝優(yōu)選[J].中國現(xiàn)代中藥,2016,18(1):106-109. XIAO Zhiwei,LE Zhiyong,ZHU Guoxue,et al.Optimization of Detection Method and Extraction Technology of Ginseng Polysaccharides[J].Mod Chin Med,2016,18(1): 106-109.

白煞留下和鐵衛(wèi)連夜清理黑旗會(huì)分壇，因?yàn)榕c黑旗會(huì)博弈須要充裕的銀子作基礎(chǔ)，所以蕭飛羽臨走時(shí)吩咐將所有值錢的東西帶去安和莊，余下的事情交給樊虎帶領(lǐng)的伙計(jì)。白煞和鐵衛(wèi)搜索發(fā)現(xiàn)天問大師和紫陽道長要找的少林俗家弟子之首的白云飛竟然囚禁在地牢里。

使用水力清淤混合器可以清除河道淤泥，效果比較好。要確定清淤器的水噴嘴和喉管的比例，噴嘴和吸泥管的比例范圍，需在一定的標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)才行。像喉管橫截面的長度和直徑要相同，才能保證混合泥漿處于穩(wěn)的狀態(tài)；擴(kuò)散管需做成錐形，減少能量轉(zhuǎn)化時(shí)的能量損失，提高泥漿的位能；泥漿吸入時(shí)需要于泥漿相等量的高壓水，保證充分的混合稀釋，保證泥漿的流速；保證噴嘴處的高壓水流速適宜，水壓比例在噴嘴水壓的有效值內(nèi)。一般來說，清淤機(jī)的工作效率并不高，不到水泵效率的的一半。10%-40%。

[19]周桂芬,呂圭源.柱前衍生化HPLC分析不同來源、不同生長年限鐵皮石斛多糖的組成和含量[J].中國藥學(xué)雜志, 2011,46(8):626-629. ZHOU Guifen,LV Guiyuan.Analysis of Monosaccharide Compositions and Contents in Polysaccharide of Dendrobium officinale from Different Sources and Growth Years by Pre-column Derivatization-HPLC[J].Chin Pharm J,2011, 46(8):626-629.

將大氣校正后的Sentinel-2B數(shù)據(jù)結(jié)果的第11、12波段帶入表層水分含量指數(shù)模型，得到數(shù)據(jù)結(jié)果見圖4。

[20]梁軍,夏永剛,楊炳友,等.柱前衍生化-HPLC法分析麻黃多糖ESP-B1的單糖組成[J].中草藥,2011,42(10):1985-1988. LIANG Jun,XIA Yonggang,YANG Bingyou,et al.Analysis of monosaccharide compositions of ESP-B1 from Ephedrae Herba by HPLC pre-column derivatization[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs,2011,42(10):1985-1988.

周末，我正在悶頭吃早飯，旅行社給我打來電話。沒錯(cuò)，我給自己報(bào)了個(gè)旅行團(tuán)，我還有點(diǎn)積蓄，等這趟旅行回來，一切從頭開始也來得及。

[21]曾榮香,張清華,管詠梅,等.柱前衍生化高效液相色譜法測定地稔多糖中單糖組成[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2015, 21(10):73-76. ZENG Rongxiang,ZHANG Qinghua,GUAN Yongmei,et al.Analysis of Monosaccharide Composition in Polysaccharides Extract from Melastoma dodecandrum by Precolumn Derivatization HPLC[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2015,21(10):73-76.

[22]孫曉燕,蔡昌利,徐麗莉,等.多糖含量測定方法的比較[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2015,29(3):58-62. SUN Xiaoyan,CAI Changli,XU Lili,et al.Comparison of Methods for Determination of Polysaccharide Content [J].Chin.Med.J.Res.Prac.,2015,29(3):58-62.

[23]李計(jì)萍.中藥新藥研究中多糖含量測定方法探討[J].中國中藥雜志,2014,39(17):3392-3394. LIJiping.Studyon the method fordetermination of polysaccharide content in Chinese traditional medicine[J]. China Journal of Chinese Materia Medica,2014,39(17): 3392-3394.

[24]王輝,陳澤宇,鐘國華,等.海芋多糖的研究[J].華南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2006,3(3):92-95. WANG Hui,CHEN Zeyu,ZHONG Guohua,et al.Study on polysaccharide of Alocasia[J].Journal of South China Normal University(Natural Science Edition),2006,3(3): 92-95.

Optimization of Extraction Process of Polysaccharide from Rhizome of Alocasia Macrorrhiza and Monosaccharide Composition Analysis

CHEN Xiaofang,ZHONG Xiaoming,HUANG Zhen,et al Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou(311402),China

[Objective]To optimize the extraction process for polysaccharide from rhizome of Alocasia macrorrhiza and analyse the monosaccharide composition.[Methods]The rate of polysaccharide from rhizome of Alocasia macrorrhiza was used as the index by L9(34)orthogonal design to optimize the best technique.Pre-column Derivatization HPLC was used to analyse the monosaccharide composition of polysaccharide from rhizome of Alocasia macrorrhiza, which was hydrolyzed by 3.0mol/L HCl.[Results]The optimal technological condition of extraction process for polysaccharide from rhizome of Alocasia macrorrhiza was as followed:the extraction temprature was 95℃,material-liquid ratio was 1:20,the extraction time was 2h for 3 times.With the optimal extraction condition,the yield of polysaccharide from rhizome of Alocasia macrorrhiza was 11.20%;in addition,polysaccharide from rhizome of Alocasia macrorrhiza was composed by D(+)-mannose,D-Galacturonic acid,D(+)-glucose,D(+)-galactose,L(+)-arabinose.[Conclusion]The tests establish a steady, convenient extraction technology of polysaccharide from rhizome of Alocasia macrorrhiza and analyse the monosaccharide composition of polysaccharide, which provides a theoretical basis for the reasonable development of Alocasia macrorrhiza.

polysaccharide from Alocasia macrorrhiza(Lour.)Schott;the extraction technology;orthogonal test;optimization;glucose;monosaccharide; pre-column derivatization

R282

A

1005-5509（2017）04-0265-06

10.16466/j.issn1005-5509.2017.04.001

2016-12-08）

浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(LY15H280004)

Fund project:Zhejiang Provincial Natural Science Foundation(LY15H280004)

鐘曉明，E-mail:k6_zxm@sina.com