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      一株副豬嗜血桿菌的鑒定及藥敏試驗(yàn)

      2017-05-15 07:21:03柴強(qiáng)強(qiáng)李潤(rùn)成黎滿香
      湖南畜牧獸醫(yī) 2017年2期
      關(guān)鍵詞:嗜血瓊脂巧克力

      張 磊,柴強(qiáng)強(qiáng),李潤(rùn)成,黎滿香

      (湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,湖南長(zhǎng)沙410128)

      一株副豬嗜血桿菌的鑒定及藥敏試驗(yàn)

      張 磊,柴強(qiáng)強(qiáng),李潤(rùn)成,黎滿香※

      (湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,湖南長(zhǎng)沙410128)

      湖南瀏陽(yáng)地區(qū)某豬場(chǎng)發(fā)生保育豬急性死亡,臨床癥狀為咳嗽、消瘦和被毛粗亂,剖檢可見多發(fā)性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎等病變。取3份死亡豬的肺臟做細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn),根據(jù)臨床癥狀、病理變化、顯微鏡鏡檢和16S rDNA結(jié)果,確定分離到副豬嗜血桿菌。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明,該菌對(duì)丁胺卡那、大觀霉素、頭孢類藥物相對(duì)敏感。

      副豬嗜血桿菌;病原鑒定;16S rDNA;藥敏試驗(yàn)

      副豬嗜血桿菌?。ɑ蚍Q格拉斯?。┦怯筛必i嗜血桿菌(Haemophilus parasuis,Hps)引起的豬的一種以多發(fā)性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎為特征的疾病,主要臨床癥狀為咳嗽、消瘦、跛行和被毛粗亂等,多感染斷奶豬和保育豬,常見于5~8周齡,發(fā)病率一般為15%左右[1]。該病經(jīng)常與豬繁殖與呼吸綜合征、圓環(huán)病毒等免疫抑制性疾病混合感染,給全球的養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。

      1 材料與方法

      1.1 病料

      病料為湖南瀏陽(yáng)地區(qū)某豬場(chǎng)急性死亡的3頭保育豬的肺臟。

      1.2 培養(yǎng)基及試劑

      胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)(Sigma公司);巧克力瓊脂培養(yǎng)基(江門市凱林貿(mào)易有限公司);藥敏紙片(杭州天和微生物試劑有限公司)。

      1.3 方法

      1.3.1 細(xì)菌分離

      無(wú)菌剪取0.5g肺臟組織,放入裝有無(wú)菌鋼珠的離心管,勻漿6分鐘后加入TSB,充分混勻。取20 μL培養(yǎng)液涂抹于巧克力瓊脂培養(yǎng)基,放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。

      1.3.2 染色鏡檢

      取分離到的單菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢,觀察細(xì)菌的染色特性及形態(tài)。

      1.3.3 PCR鑒定

      挑取巧克力瓊脂培養(yǎng)基上的單菌落作模板,利用細(xì)菌16S rDNA通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增[3],PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送金斯瑞生物技術(shù)有限公司測(cè)序。

      1.3.4 藥敏試驗(yàn)

      將培養(yǎng)好的菌液稀釋后用棉簽均勻涂布于巧克力瓊脂培養(yǎng)基,選取13種藥敏試紙片貼于平板上(詳見表1),放入37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h,判定藥敏試驗(yàn)結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn):抑菌圈直徑<15mm為低度敏感;15mm~25mm為中度敏感;>25 mm為高度敏感。

      2 結(jié)果

      2.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)與形態(tài)觀察

      該菌株在巧克力瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)48h后,長(zhǎng)出邊緣整齊、圓形、灰白色透明、針尖大小的菌落。挑取單菌落涂片染色鏡檢,可見多數(shù)呈細(xì)小短桿狀,有的呈細(xì)小長(zhǎng)桿狀的革蘭氏陰性菌,其生長(zhǎng)特性及菌落形態(tài)符合副豬嗜血桿菌特征。

      2.2 PCR鑒定結(jié)果

      將PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,目的片段大小約1500bp,結(jié)果顯示為陽(yáng)性(見圖1)。測(cè)序結(jié)果在Genbank上進(jìn)行分析,結(jié)果顯示該菌與副豬嗜血桿菌的同源性達(dá)到99%,進(jìn)一步證實(shí)該菌株為副豬嗜血桿菌。

      圖1 細(xì)菌通用引物16SrDNA檢測(cè)結(jié)果

      2.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

      藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明該菌對(duì)丁胺卡那、大觀霉素、頭孢類藥物相對(duì)敏感。(詳見表1)。

      表1 分離菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

      3 討論

      本試驗(yàn)對(duì)3份急性死亡的病豬肺臟進(jìn)行鑒定,確定分離到副豬嗜血桿菌。在通過(guò)結(jié)合分離菌株的藥敏試驗(yàn)結(jié)果科學(xué)用藥后,該豬場(chǎng)病情得到顯著控制。目前,大多采用疫苗對(duì)豬副嗜血桿菌病進(jìn)行防制,但副豬嗜血桿菌的血清型較多,且不同血清型之間無(wú)交叉保護(hù)力,若隨意使用商品化疫苗,將無(wú)法有效控制副豬嗜血桿菌病。因此,副豬嗜血桿菌病的綜合防制除加強(qiáng)飼養(yǎng)管理、定期徹底消毒和抗菌素處理外,還應(yīng)精準(zhǔn)化免疫接種。 □

      [1]劉俊偉,安志興,葛亞明,等.副豬嗜血桿菌河南株的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2011,(2):37-39.

      [2]蔡旭旺.副豬嗜血桿菌的分離鑒定及診斷方法與滅活疫苗的研究[D].華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2006.

      [3]黎滿香,林榮高,薛立群,等.湖南豬源糞腸球菌的分離鑒定及16S rDNA系統(tǒng)進(jìn)化分析[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2011,(9):1290-1294.

      S852.6

      A

      1006-4907(2017)02-0035-02

      10.3969/j.issn.1006-4907.2017.02.016

      2017-04-05

      湖南科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015NK3017)

      張磊(1991~),女,碩士在讀,從事預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究。

      ※通訊作者:黎滿香,E-mail:manxiangl@163.com。

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