徐佳+陳魁敏+陳冬梅

[摘要]目的 了解健康成年人上呼吸道菌群多樣性及優(yōu)勢菌群構(gòu)成，為從微生態(tài)角度預(yù)防以口咽部為門戶的呼吸道感染提供科學(xué)依據(jù)。方法 隨機(jī)選取2012年4～6月60名沈陽市區(qū)30～50歲健康成人作為研究對象，使用無菌咽拭子采集標(biāo)本，對菌群進(jìn)行定量分析、定性鑒定。結(jié)果 60名沈陽市區(qū)30～50歲健康成人咽后壁的需氧菌群與厭氧菌群之比為2.51：1；檢出率較高的需氧菌及厭氧菌包括緩癥鏈球菌、口腔鏈球菌、唾液鏈球菌、干燥奈瑟球菌、灰色奈瑟球菌及麻疹孿生球菌、普氏厭氧球菌、韋榮球菌、丙酸丙酸桿菌等，檢出率較高的菌，其菌株構(gòu)成比也較高。結(jié)論 沈陽市區(qū)30～50歲健康成人咽后壁檢出率和構(gòu)成比都較高的需氧菌和厭氧菌共同構(gòu)成上呼吸道口咽部優(yōu)勢菌群，在維持呼吸系統(tǒng)微生態(tài)固有平衡中起重要作用，進(jìn)一步闡明其生態(tài)學(xué)意義，能夠?yàn)楹粑酪嫔膫溥x菌株應(yīng)用于呼吸道活菌制劑的開發(fā)研究提供理論依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]呼吸道；需氧菌；厭氧菌；微生態(tài)；成人

[中圖分類號] R117 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）03（a）-0156-03

[Abstract]Objective To understand the diversity of the upper respiratory tract microflora and the constitution of dominant microflora in healthy adults so as to provide a scientific basis for the prevention of respiratory tract infections via oral approach.Methods Altogether 60 healthy adults aged 30 to 50 years old in the urban area of Shenyang from April to June in 2012 were randomly selected as the objects of this research.The samples were collected through aseptic throat swab.The quantitative analysis and qualitative identification of microflora were made.Results The proportion between postpharyngeal aerobic bacteria and anaerobic bacteria in 60 healthy adults aged 30 to 50 years old in the urban area of Shenyang was 2.51：1；the aerobic and anaerobic bacteria with higher detection rate included Streptococcus mitis，Streptococcus oralis，Streptococcus salivarius，Neisseria sicca，Neisseria cinerea and Measles twin cocci，Anaerococcus prevotii，Veillonella，Propionibacterium propionicus etc.；the bacteria with higher detection rate also had higher constituent ratio of strains.Conclusion The dominant microflora of upper respiratory tract pharynx is constituted by both the postpharyngeal aerobic bacteria and anaerobic bacteria with higher detection rate and higher constituent ratio in healthy adults aged 30 to 50 years old in the urban area of Shenyang，which plays an important role in maintaining the inherent ecological balance in the respiratory system，further clarifies its ecological significance，and provides a theoretical basis for the research on application of alternative probiotic strains in development of respiratory bacteria preparation.

[Key words]Respiratory tract；Aerobic bacteria；Anaerobic bacteria；Micro-ecology；Adult

呼吸道是與外界相通的開放性腔道，受環(huán)境的影響較大。在健康人的咽部寄居著一定種類和數(shù)量的正常微生物群，即呼吸道正常菌群。在外界因素影響下，這些正常菌群不斷演替以維持呼吸系統(tǒng)微生態(tài)的動態(tài)平衡[1]。在環(huán)境污染、抗生素濫用等因素的影響下，正常菌群中的某些菌株會轉(zhuǎn)變?yōu)闂l件致病菌[2]。由于呼吸道菌群定性與定量上的穩(wěn)定性受外環(huán)境的影響較大，因此給臨床呼吸道感染的治療增加了很多難度，這使得從微生態(tài)學(xué)角度預(yù)防和治療呼吸道感染勢在必行。通過適時(shí)、適當(dāng)、適量補(bǔ)充呼吸道正常生理性菌群來維持呼吸道微生態(tài)的協(xié)調(diào)平衡，利用原籍菌群的生理性拮抗作用，抑制致病菌的生長，從而達(dá)到預(yù)防和治療呼吸道感染的目的。目前，已有應(yīng)用益生菌預(yù)防兒童抗生素相關(guān)性腹瀉的報(bào)道[3]，但應(yīng)用益生菌預(yù)防和治療呼吸道感染的相關(guān)報(bào)道尚少。本研究隨機(jī)選取60名沈陽市區(qū)30～50歲健康成人作為研究對象，對呼吸道正常菌群中的可培養(yǎng)菌進(jìn)行定量定性研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

隨機(jī)選取2012年4～6月沈陽市區(qū)30～50歲健康成人60名，男女各30名。實(shí)驗(yàn)對象要求身體健康，正常飲食，無吸煙史，無呼吸系統(tǒng)疾病，無特殊氣體及粉塵等接觸史，近1個(gè)月無抗生素服用史，無其他急慢性疾病[4]。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集 采樣前2 h禁食，用無菌咽拭子在實(shí)驗(yàn)對象的咽后壁取材[5]，立即置入含1 ml無菌生理鹽水的離心管中，振蕩混勻。采集時(shí)勿觸及口腔咽頰及舌黏膜。

1.2.2分離培養(yǎng) 將標(biāo)本稀釋10、100倍，分別將100 μl不同稀釋倍數(shù)的標(biāo)本用無菌L棒均勻涂布于血平板、厭氧血平板、巧克力平板、麥康凱平板和沙保弱平板。需氧血平板37℃需氧培養(yǎng)18～24 h，厭氧血平板37℃厭氧培養(yǎng)48～72 h，巧克力平板置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)18～24 h，沙保弱平板30℃需氧培養(yǎng)1周，記錄每種平板上的菌落種類和數(shù)量[6]。

1.2.3菌株純化及革蘭染色 分別挑取上述分離培養(yǎng)結(jié)果中的單個(gè)菌落進(jìn)行傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)后進(jìn)行革蘭染色，記錄每種菌株的特征。

1.2.4生化鑒定 根據(jù)革蘭染色結(jié)果選擇相應(yīng)的生化鑒定試劑條（法國梅里埃生物公司），按說明書操作，制備相應(yīng)濃度的菌懸液，加樣、培養(yǎng)，上機(jī)檢測，鑒定菌種名稱[7]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用描述法對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2結(jié)果

2.1定量測定結(jié)果統(tǒng)計(jì)

60名沈陽市區(qū)30～50歲健康成人咽后壁菌群中需氧菌為9.88×1011菌落形成單位（cfu）/ml，厭氧菌為3.94×1011 cfu/ml，需氧菌和厭氧菌的比例為2.51∶1。

2.2需氧菌的檢出率及構(gòu)成比統(tǒng)計(jì)

60名沈陽市區(qū)30～50歲健康成人咽后壁需氧菌中鏈球菌屬和奈瑟菌屬的細(xì)菌檢出率和構(gòu)成比均較高（表1）。

2.3厭氧菌的檢出率及構(gòu)成比

60名沈陽市區(qū)30～50歲健康成人咽后壁厭氧菌中檢出率較高的是麻疹孿生球菌、普氏厭氧球菌、韋榮球菌、丙酸丙酸桿菌、解脲擬桿菌、厭氧消化鏈球菌、內(nèi)氏放線菌、嗜酸乳桿菌，檢出率高的細(xì)菌，其構(gòu)成比也較高（表2）。

3討論

益生菌是一種對人體具有積極的促進(jìn)健康作用的微生態(tài)制劑。近年來，微生態(tài)制劑的開發(fā)和應(yīng)用已成為研究熱點(diǎn)。隨著抗生素和免疫抑制劑的普遍應(yīng)用，人們已經(jīng)認(rèn)識到其在恢復(fù)人體健康的同時(shí)，也帶來某些菌群失調(diào)所引起的疾病，而微生態(tài)制劑能克服機(jī)體菌群失調(diào)的弊端。微生態(tài)制劑與藥物不同，具有“已病輔治、未病防病、無病保健”的作用。臨床上，益生菌可以拮抗感染、炎癥等狀態(tài)下的致病菌，從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，達(dá)到治療和預(yù)防細(xì)菌感染性疾病的目的。

上呼吸道感染是臨床最常見的感染性疾病之一，研制呼吸道微生態(tài)制劑對預(yù)防和治療呼吸道細(xì)菌感染性疾病具有重要意義。在不同年齡階段，健康人的咽部需氧菌和厭氧菌不斷定植和演替，種類和比例也不斷變化，達(dá)到一種動態(tài)平衡[8]。

本研究結(jié)果顯示，從需氧菌的檢出率來看，60名沈陽市區(qū)30～50歲健康成人咽后壁檢出率較高的菌種排在前5位的分別是緩癥鏈球菌、口腔鏈球菌、干燥奈瑟球菌、唾液鏈球菌、微黃奈瑟球菌，其中緩癥鏈球菌、口腔鏈球菌、唾液鏈球菌都屬于甲型鏈球菌群，平均檢出率達(dá)到了91.3%。干燥奈瑟球菌、微黃奈瑟球菌在分類上屬于奈瑟菌屬，平均檢出率為83.0%。另外，本研究結(jié)果也顯示，檢出率較高的菌種，其構(gòu)成比也相對較高。甲型鏈球菌群和奈瑟菌屬的檢出率和構(gòu)成比分別占第1位和第2位，因此，甲型鏈球菌群和奈瑟菌屬中的某些菌種被認(rèn)為可能是健康成人上呼吸道呈優(yōu)勢生長的原籍菌。在厭氧菌中，60名沈陽市區(qū)30～50歲健康成人咽后壁檢出率較高的菌種包括麻疹孿生球菌、普氏厭氧球菌、韋榮球菌、丙酸丙酸桿菌、解脲擬桿菌、厭氧消化鏈球菌、內(nèi)氏放線菌、嗜酸乳桿菌，是上呼吸道的厭氧性優(yōu)勢菌群。這些存在于人類呼吸道黏膜表面的正常微生物群，是該部位重要的生理組成部分，在保持宿主呼吸道正常防御機(jī)制中起著關(guān)鍵作用[9]。

研究顯示，機(jī)體上呼吸道黏膜表面的營養(yǎng)狀況和氧化還原電位等因素決定著定植于黏膜表面的微生物種屬和數(shù)量[10-12]。本研究結(jié)果顯示，同一年齡段人群中的多數(shù)個(gè)體的上呼吸道菌群在結(jié)構(gòu)和組成上具有相似性，而不同的個(gè)體之間菌群的種類和數(shù)量也可以存在一定差異；檢出率和構(gòu)成比均較高的菌種，其在成人上呼吸道的分布較為廣泛，個(gè)體間差異較小，是上呼吸道優(yōu)勢菌群，因此可以考慮作為呼吸道黏膜益生菌制劑的備選菌株。

呼吸道感染的預(yù)防和治療是一個(gè)復(fù)雜的過程。從菌群平衡角度來說，保持呼吸道正常菌群平衡對防治呼吸道感染至關(guān)重要[13-14]，因此，加強(qiáng)菌群平衡的監(jiān)測，合理使用抗生素[15]勢在必行。本研究分析了不同年齡的健康成人上呼吸道優(yōu)勢菌群，為研究呼吸道微生態(tài)制劑預(yù)防上呼吸道感染提供了科學(xué)依據(jù)。隨著微生態(tài)學(xué)的發(fā)展，將會研制出更多的微生態(tài)制劑，利于增強(qiáng)和改善機(jī)體的各種生理功能，達(dá)到防病治病、增進(jìn)體質(zhì)、延緩衰老等目的。

[參考文獻(xiàn)]

[1]司小北，安春麗.呼吸系統(tǒng)微生態(tài)演替及其研究進(jìn)展[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2010，22（1）：88-91.

[2]Horton DB，Scott FI，Haynes K，et al.Antibiotic exposure，infection，and the development of pediatric psoriasis：a nested case-control study[J].JAMA Dermatol，2016，152（2）：191-199.

[3]Szajewska H，Canani RB，Guarino A，et al.Probiotics for the prevention of antibiotic-associated diarrhea in children[J].J Pediatr Gastroenterol Nutr，2016，62（3）：495-506.

[4]徐佳，李舒音，陳冬梅，等.沈陽市區(qū)春季3～4歲幼兒上呼吸道微生態(tài)狀況分析[J].中國婦幼保健，2015，30（14）：2188-2190.

[5]孫莉，張利俠，楊淑梅，等.呼吸道感染及其治療過程中咽部菌群密度的研究[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，27（2）：41-43.

[6]張少妮，李黎，李小娥，等.西安醫(yī)學(xué)院大學(xué)生上呼吸道正常菌群的調(diào)查[J].科技信息，2012，（31）：66.

[7]徐靜，陳冬梅，海曉歐，等.2～3歲幼兒上呼吸道菌群分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2014，24（3）：738-742.

[8]Maugein J，Guillemot D，Dupont MJ，et al.Clinical and microbiological epidemiology of streptococcus pneumoniae bacteremia in eight French counties[J].Clin Microbiol Infect，2003， 9（4）：280-288.

[9]Tanaka I，Suzuki K，Tanaka E，et al.Investigation of normal bacterial flora in the upper respiratory tract[J].Acta Otolaryngol Suppl，1996，525：44-50.

[10]Fjalstad JW，Stensvold HJ，Bergseng H，et al.Early-onset sepsis and antibiotic exposure in term infants：a nationwide population-based study in norway[J].Pediatr Infect Dis J，2016，35（1）：1-6.

[11]McKenzie H，Reid N，Dijkhuizen RS.Clinical and microbiological epidemiology of Streptococcus pneumonia bacteraemia[J].J Med Microbiol，2000，49（4）：361-366.

[12]周園，肖純凌，陳冬梅等.兒童上呼吸道微生態(tài)狀況分析[J].中國公共衛(wèi)生，2013，29（4）：584-585.

[13]Brook I.Bacterial interference[J].Crit Rev Microbiol，1999， 25（3）：155-172.

[14]Holt PG，Sly PD，Bjrkstén B.Atopic versus infectious diseases in childhood：a question of balance？[J].Pediatr Allergy Immunol，1997，8（2）：53-58.

[15]Malygina OG，Bazhukova TA.Influence of antibiotics on formation of microecology in premature children with low and extremely low body weight at birth[J].Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol，2014，80（1）：61-65.

（收稿日期：2016-12-23 本文編輯：祁海文）