張暉, 薛洪寶

(蚌埠醫(yī)學(xué)院化學(xué)教研室，安徽 蚌埠 233030)

毛細(xì)管電泳測(cè)定維C銀翹片中維生素C和撲熱息痛*

張暉, 薛洪寶

(蚌埠醫(yī)學(xué)院化學(xué)教研室，安徽 蚌埠 233030)

建立了毛細(xì)管電泳測(cè)定維C銀翹片中維生素C和撲熱息痛的方法。采用55 cm(40 cm處檢測(cè)窗口)×75 μm i. d.熔融石英毛細(xì)管，選擇pH=8.89的30 mmol·L-1Na2HPO4-30 mmol·L-1脫氧膽酸鈉混合溶液作為緩沖溶液，分離電壓為+20 kV，以二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明維生素C和撲熱息痛的測(cè)定線性范圍都比較寬，回收率均大于97.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于3.2%。方法操作簡(jiǎn)便、快速、樣品消耗極少，能夠用于維C銀翹片中維生素C和撲熱息痛的含量測(cè)定。

毛細(xì)管電泳；維C銀翹片；維生素C；撲熱息痛

維C銀翹片由連翹、維生素C、對(duì)乙酰氨基酚等13味中西藥和硬脂酸鎂等8種輔料制成的復(fù)方制劑，其功效是辛涼解表、清熱解毒，主要用于治療流行性感冒引起的發(fā)熱頭痛、咳嗽、口干、咽喉疼痛等。其中，維生素C 又名抗壞血酸，具有增強(qiáng)免疫力、預(yù)防感冒等疾??；對(duì)乙酰氨基酚是乙酰苯胺類解熱鎮(zhèn)痛藥，臨床上常稱撲熱息痛。

近年來(lái)，維C銀翹片中維生素C、撲熱息痛的測(cè)定方法主要有高效液相色譜(HPLC)法[1- 4]、紫外分光光度法[5- 6]、紅外光譜法[7-8]、電化學(xué)分析法[9]等。本實(shí)驗(yàn)采用毛細(xì)管電泳(CE)法同時(shí)測(cè)定維C銀翹片中的維生素C和撲熱息痛，能夠得到準(zhǔn)確測(cè)定結(jié)果的同時(shí)，具有樣品處理簡(jiǎn)單、分析時(shí)間短、峰形好等諸多優(yōu)點(diǎn)[10-12]。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

P/ACETMMDQ毛細(xì)管電泳系統(tǒng)(二極管陣列檢測(cè)器)(Beckman Coulter, Fullerton, CA, USA)，未涂層熔融石英毛細(xì)管(河北永年銳灃色譜器件有限公司)；Lab Tech高效液相色譜儀(Lab Tech UV 600型紫外-可見檢測(cè)器和P600型高壓輸液泵兩臺(tái))(北京萊伯泰科儀器有限公司)，Thermo Scientific APS-ZHYPERSIL Dim色譜柱(5 μm, 250 mm×4.6 mm i.d.)，Platisil NH2氨基色譜柱(5 μm, 150 mm×4.6 mm i.d.)；BS224S電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；SB25-12DTN超聲波清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)；pHS-3C酸度計(jì)(上?？茖W(xué)儀器有限公司)；0.22 μm水相混合纖維素酯膜(上海半島實(shí)業(yè)有限公司凈化器材廠)。

NaH2PO4、Na2HPO4、植酸鈉、脫氧膽酸鈉、NaOH、NCl、H3PO4、冰醋酸、乙醇、維生素C對(duì)照品、撲熱息痛對(duì)照品等試劑均為分析純；甲醇、乙腈等為色譜純；維C銀翹片A、B購(gòu)于本市藥店；蒸餾水為雙蒸水(本實(shí)驗(yàn)室提供)。

1.2 維生素C和撲熱息痛對(duì)照品溶液、維C銀翹片樣品溶液的制備

用φ=50%乙醇溶液分別配制維生素C和撲熱息痛對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，然后再各取適量混合制備維生素C和撲熱息痛對(duì)照品的混合儲(chǔ)備溶液，再逐級(jí)稀釋得到所需濃度的維生素C和撲熱息痛對(duì)照品的混合溶液(棕色容量瓶配制，存放于陰涼避光處，最好隨用隨配)。

分別取不同批次維C銀翹片A、B各10 片，除去包衣，研細(xì)。各取細(xì)粉約0.3g(相當(dāng)于一片去包衣維C銀翹片的質(zhì)量)，準(zhǔn)確稱量，分別置于25mL棕色容量瓶中，加入適量φ=50%乙醇，超聲40min，冷卻，再用φ=50%乙醇定容，搖勻。過濾，各取續(xù)濾液1.00mL，分別置于25mL棕色容量瓶中，加φ=50%乙醇至刻度，搖勻，即得維C銀翹片樣品A、B的待測(cè)溶液。

1.3 空白對(duì)照溶液的制備

依據(jù)處方量和工藝制備不含維生素C和撲熱息痛的空白模擬制劑，按照“1.2”配制空白對(duì)照溶液。

1.4 電泳條件

在25 ℃下，采用55cm(40cm處檢測(cè)窗口)×75μmi.d.熔融石英毛細(xì)管，選擇pH=8.89的30mmol·L-1Na2HPO4-30mmol·L-1脫氧膽酸鈉混合溶液作為緩沖溶液，進(jìn)樣壓力為0.5psi，進(jìn)樣時(shí)間為3.0s，分離電壓為+20kV，以二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。

每次進(jìn)樣前順次用0.1mol·L-1NaOH溶液、0.1mol·L-1HCl溶液、甲醇、緩沖溶液沖洗毛細(xì)管各2min。

2 結(jié) 果

2.1 線性范圍和檢出限

分別取“1.2”配制的維生素C和撲熱息痛對(duì)照品的系列溶液，在“1.4”電泳條件下進(jìn)樣分析，電泳圖見圖1(c)。

圖1 維生素C和撲熱息痛對(duì)照品的電泳圖(a) 空白對(duì)照溶液;(b) 維C銀翹片樣品A溶液; (c) 維生素C和撲熱息痛對(duì)照品溶液 Fig.1 Electrophorograms of (a) blank control solution,(b) Vitamin C Yinqiao Tablet A solution, (c) a standard mixture solution containing Vitamin C and Paracetamol

以兩組分峰面積(y)對(duì)相應(yīng)的質(zhì)量濃度(x, μg·mL-1)進(jìn)行線性回歸，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到兩者的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)(r)；按照信噪比(S/N)=3時(shí)計(jì)算它們的檢出限,結(jié)果見表1。表1說(shuō)明：在比較寬的濃度范圍內(nèi)，維生素C和撲熱息痛兩者的峰面積與相應(yīng)的濃度線性關(guān)系良好，具有較高的靈敏度。

表1 維生素C和撲熱息痛的定量分析參數(shù)Table 1 Equations, correlation coefficients, linear ranges and detection limits (S/N=3)

2.2 回收率試驗(yàn)

在已經(jīng)定量的樣品A溶液中加入適量的維生素C和撲熱息痛對(duì)照品，用φ=50%乙醇定容，搖勻。按“1.4”電泳條件進(jìn)樣分析，重復(fù)6次。維生素C和撲熱息痛的回收率(Recovery)、峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)見表2。

2.3 精密度試驗(yàn)

按“1.4”電泳條件，對(duì)維生素C和撲熱息痛對(duì)照品溶液進(jìn)行電泳分析，重復(fù)6次。維生素C和撲熱息痛峰面積的RSD分別為1.4%、2.5% (n=6)；遷移時(shí)間的RSD分別為1.1%、1.5% (n=6)。表明儀器的精密度很好。

2.4 干擾試驗(yàn)

取“1.3”制備的空白對(duì)照溶液，按“1.4” 電泳條件進(jìn)樣分析，重復(fù)6次(n=6)，電泳圖見圖1(a)。圖1(a)顯示：本試驗(yàn)電泳條件下，維C 銀翹片中的其它成分對(duì)維生素C和撲熱息痛的測(cè)定無(wú)干擾。

2.5 維C銀翹片樣品溶液測(cè)定

分別取“1.2”配制的維C銀翹片樣品A、B的溶液，按“1.4”電泳條件進(jìn)樣分析測(cè)定，重復(fù)6次，樣品A的電泳圖見圖1(b)。

依據(jù)表1中維生素C和撲熱息痛線性回歸方程，由電泳峰面積分別計(jì)算A、B樣品中維生素C和撲熱息痛的濃度，結(jié)果見表2。

依據(jù)2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》[13]中HPLC法分別測(cè)定維C銀翹片A、B樣品溶液中維生素C和撲熱息痛，結(jié)果見表2。

表2表明，CE與HPLC測(cè)定結(jié)果基本上一致，相對(duì)誤差(Er)<4.7%。說(shuō)明CE法分析數(shù)據(jù)可靠、準(zhǔn)確，能夠用于維C銀翹片中維生素C和撲熱息痛的定量分析。

表2 CE和HPLC法測(cè)定結(jié)果(n=6)Table 2 CE and HPLC analysis of Vitamin C and Paracetamol (n=6)

3 討 論

考察了NaH2PO4- Na2HPO4、NaH2PO4-植酸鈉、Na2HPO4-脫氧膽酸鈉等多種緩沖體系中維生素C和撲熱息痛的基線、峰形、遷移時(shí)間、分離度等的情況。在Na2HPO4-脫氧膽酸鈉緩沖體系中，兩組分分離完全、基線穩(wěn)定、峰形最佳。又進(jìn)一步考察了Na2HPO4(10～50 mmol·L-1)、脫氧膽酸鈉(10～50 mmol·L-1)的濃度，緩沖體系的酸度(pH 8～10)，分離電壓(+12～+28 kV)對(duì)峰形、遷移時(shí)間等的影響。綜合考慮各種因素，最終選擇pH=8.89的30 mmol·L-1Na2HPO4-30 mmol·L-1脫氧膽酸鈉混合溶液為運(yùn)行緩沖溶液、分離電壓為+20 kV作為電泳條件。

緩沖溶液的選擇取決于樣品分離所需的pH，即使具有相同pH不同的緩沖溶液往往顯示出不同的分離能力。分析物在不同pH緩沖溶液里的解離度不同，電泳速率也因之改變，因而呈現(xiàn)不同的分離度和靈敏度。

緩沖溶液的離子強(qiáng)度隨濃度升高而增大，導(dǎo)致電滲流變小，其結(jié)果分析物的遷移時(shí)間將增加；另一方面，電流變強(qiáng)，熱效應(yīng)使分析物蜂形展寬，分離效率反而變低。

分離電壓增加時(shí)，分析物的遷移速度升高，分析時(shí)間減少，然而焦耳熱相應(yīng)升高，致使基線穩(wěn)定性減小，靈敏度下降；分離電壓減小，分離效果變佳，但是分析時(shí)間增加，峰形展寬變差。

比較CE和HPLC兩種方法的測(cè)定結(jié)果顯示：CE法操作簡(jiǎn)便、快速、樣品消耗極少，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，能夠用于維C銀翹片中維生素C和撲熱息痛的含量測(cè)定。

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Determination of Vitamin C and Paracetamol in Vitamin C Yinqiao Tablets using CE

ZHANGHui,XUEHongbao

(Department of Chemistry, Bengbu Medical College, Bengbu 233030，China)

A novel and sensitive method was established for the determination of Vitamin C and Paracetamol in Vitamin C Yinqiao Tablets using Capillary Electrophoresis (CE) equipped with a photo-diodearray detector. The running buffer solution was 30 mmol·L-1sodium hydrogen phosphate solution containing 30 mmol·L-1sodium deoxycholate (pH=8.89). The capillary column efficient length was 40 cm (i. d. 75 μm) with the separation voltage +20 kV. The result indicated that the peak area of Paracetamol and Vitamin C had a good linear relationship with their concentrations in a certain concentration range. The recoveries of both were more than 97.6% with RSDs less than 3.2%. CE method was simple and rapid in operation, sensitive and reliable in determination results with very little sample consumption, which can be used for the determination of Paracetamol and Vitamin C in Vitamin C Yinqiao Tablets.

capillary electrophoresis (CE); Vitamin C Yinqiao Tablet; Vitamin C; Paracetamo

2016-06-06 基金項(xiàng)目：安徽省高校自然科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(KJ2016A485)；安徽省高校自然科學(xué)研究一般項(xiàng)目(KJ2015B037by)；安徽省高校省級(jí)優(yōu)秀青年人才基金重點(diǎn)項(xiàng)目(2013SQRL051ZD)；安徽省高等教育振興計(jì)劃重大教學(xué)改革研究項(xiàng)目(2015zdjy101)

張暉(1966年生)，男；研究方向：生物分析技術(shù)；E-mail：zhanghuicsu688@163.com

薛洪寶(1979年生)，男；研究方向：色譜分析技術(shù)；E-mail:hongbaoxueqhd@126.com

10.13471/j.cnki.acta.snus.2017.01.004

O657.8；R971+.1

A

0529-6579(2017)01-0024-04