反接萼端黑斑病致病菌果實(shí)品質(zhì)的變化

樊國(guó)全，趙曉梅，*，俄熱肯·庫(kù)萬(wàn)別克，吳玉鵬

（1.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院，新疆烏魯木齊830091；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)科學(xué)技術(shù)學(xué)院，新疆烏魯木齊830052；3.新疆農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，新疆昌吉831100）

反接萼端黑斑病致病菌果實(shí)品質(zhì)的變化

樊國(guó)全1，趙曉梅1，*，俄熱肯·庫(kù)萬(wàn)別克2，吳玉鵬3

（1.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院，新疆烏魯木齊830091；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)科學(xué)技術(shù)學(xué)院，新疆烏魯木齊830052；3.新疆農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，新疆昌吉831100）

從庫(kù)爾勒香梨萼端黑斑病感病果中提取致病菌，反接至健康果中，通過(guò)對(duì)貯藏的健康果和感病果進(jìn)行色差、可溶性固形物、果實(shí)硬度的測(cè)定，研究萼端黑斑病對(duì)庫(kù)爾勒香梨品質(zhì)的影響。結(jié)果表明，健康果中L值較感病果高，而感病果中a值和b值的較高。隨著貯藏期的延長(zhǎng)，健康果和感病果中a值和b值均呈上升趨勢(shì)，感病果a值和b值始終大于健康果；L值的變化趨勢(shì)與a值和b值相反，感病果L值始終小于健康果。貯藏過(guò)程中，庫(kù)爾勒香梨健康果和感病果中可溶性固形物含量和果實(shí)硬度均呈下降趨勢(shì)，但感病果下降幅度較健康果大。

庫(kù)爾勒香梨；萼端黑斑??；果實(shí)品質(zhì)

新疆無(wú)污染的生態(tài)環(huán)境和獨(dú)特的氣候條件，造就了新疆林果外觀絢麗、個(gè)頭飽滿、果香濃郁、營(yíng)養(yǎng)豐富的品質(zhì)優(yōu)勢(shì)。據(jù)報(bào)道，2015年新疆特色林果種植面積突破2 200萬(wàn)畝，總產(chǎn)量650萬(wàn)噸[1]。隨著果樹(shù)盛果期的到來(lái)，林果產(chǎn)量成幾何倍數(shù)增加，果品質(zhì)量問(wèn)題凸現(xiàn)。庫(kù)爾勒香梨是新疆最具特色的林果之一，由于其皮薄，肉質(zhì)細(xì)膩、多汁，芳香濃郁，品質(zhì)優(yōu)良，深受消費(fèi)者的喜愛(ài)。目前，庫(kù)爾勒香梨也是新疆貯藏量最大的水果之一[2]。據(jù)統(tǒng)計(jì)[3]，2013年巴州庫(kù)爾勒香梨面積73.26萬(wàn)畝，總產(chǎn)量達(dá)36.18萬(wàn)噸，占新疆香梨產(chǎn)量的42%。但近年來(lái)，由于庫(kù)爾勒香梨萼端黑斑病的出現(xiàn)，嚴(yán)重影響果實(shí)的品質(zhì)和外觀，同時(shí)造成大量腐爛，嚴(yán)重時(shí)病果率高達(dá)30%[4]，給果農(nóng)和果品經(jīng)營(yíng)者造成了巨大損失。因此，本課題從庫(kù)爾勒香梨萼端黑斑病病果中提取、分離、純化該致病菌，再將其反接至健康香梨果實(shí)中，對(duì)貯藏后的健康果和感病果進(jìn)行果皮色差、果實(shí)可溶性固形物和硬度的測(cè)定，旨在為庫(kù)爾勒香梨萼端黑斑病的控制提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)

室內(nèi)試驗(yàn)于2015、2016年在新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物質(zhì)能源研究所進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)材料

1.2.1 原料與試劑

試驗(yàn)原料庫(kù)爾勒香梨來(lái)源于巴州沙依東園藝場(chǎng)；試驗(yàn)試劑馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（簡(jiǎn)稱PDA培養(yǎng)基）；0.85%生理鹽水。

1.2.2 儀器設(shè)備

FHM－5型果實(shí)硬度計(jì)：日本竹村電械制作所制造；PAL－1型0－53%手持糖量計(jì)：日本ATAGO公司制造；CR－10型果實(shí)色差計(jì)：日本美能達(dá)公司。

1.3 試驗(yàn)處理

從萼端黑斑病庫(kù)爾勒香梨（感病果）提取、分離、純化致病菌→將致病菌反接至正常的庫(kù)爾勒香梨（健康果）→對(duì)貯藏的健康果和感病果進(jìn)行果皮色差、果實(shí)可溶性固形物和硬度的測(cè)定

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 庫(kù)爾勒香梨黑斑病病原菌的分離及純化

參照許玲等[5－7]并略作改動(dòng)，將感病梨用75%的酒精擦拭1遍，用無(wú)菌水淋洗3遍，待其干燥后在病健交界處切下病組織5 mm，移至PDA平板培養(yǎng)基上，于25℃下培養(yǎng)28 h～36 h觀察。再將初分離的菌落接回于健康梨進(jìn)行致病性的確定，重復(fù)上述步驟再次得到初分離菌落，將其在PDA平板上進(jìn)行稀釋純化培養(yǎng)，直到分離出菌落大小、形狀、顏色、表面光滑濕潤(rùn)程度、菌絲生長(zhǎng)快慢、菌絲形狀、產(chǎn)孢情況、孢子顏色、形狀等一致的若干菌株。分離的過(guò)程：懸浮液→適當(dāng)稀釋→涂布平板→單菌落。

1.4.2 庫(kù)爾勒香梨黑斑病病原菌的反接

2016年3月28日，選擇大小適中、無(wú)病蟲(chóng)、無(wú)機(jī)械損傷的果實(shí)，將其裝入聚乙烯保鮮袋，每箱裝30個(gè)果實(shí)，共16箱，分為兩組，一組接分離純化后的病原菌，一組不接菌，均貯藏于常溫（25℃）條件下，于2016年3月28日～4月3日每天分別取樣（健康梨、感病梨）10個(gè)進(jìn)行生理生化指標(biāo)的測(cè)定，重復(fù)3次。

1.5 測(cè)定內(nèi)容

果實(shí)硬度采用果實(shí)硬度計(jì)（高10 mm，探頭徑12 mm的半球體）進(jìn)行測(cè)定；可溶性固形物含量采用0%～53%手持糖量計(jì)進(jìn)行測(cè)定；果實(shí)萼端的色澤L、a、 b值用果實(shí)色差計(jì)進(jìn)行測(cè)定。

1.6 數(shù)據(jù)處理

采用SigmaPlot 10.0軟件制作曲線圖，采用LSD法進(jìn)行差異性顯著分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 庫(kù)爾勒香梨萼端黑斑病的發(fā)病癥狀

庫(kù)爾勒香梨黑斑病在病原菌可冬天潛伏在樹(shù)體，主要危害果實(shí)，第二年發(fā)病，果實(shí)在生長(zhǎng)后期未達(dá)成熟時(shí)便可發(fā)病，在采后貯藏期發(fā)病更為嚴(yán)重。圖1為庫(kù)爾勒香梨萼端黑斑病發(fā)病果照片，圖2和圖3分別為健康的庫(kù)爾勒香梨果實(shí)在反接萼端黑斑病致病菌之前和之后的照片。

圖1 萼端黑斑病香梨Fig.1 Korla fragrant pear of calyx end black spot

圖2 果實(shí)接菌前Fig.2 The fruit before the inoculation

圖3 果實(shí)接菌后Fig.3 Fruit after inoculation

2.2 庫(kù)爾勒香梨健康果接種致病菌對(duì)果實(shí)色差的影響

在果實(shí)成熟和貯藏過(guò)程中，果皮顏色會(huì)發(fā)生變化，通過(guò)對(duì)色差值的量化，從理論上判定果實(shí)衰老的程度。L值的大小反映果皮色澤的明度，a值表示果實(shí)表皮色澤由紅色向綠色的轉(zhuǎn)變，b值表示果實(shí)表皮色澤由黃色到藍(lán)色的轉(zhuǎn)變。庫(kù)爾勒香梨萼端黑斑病對(duì)果皮色差值L、a和b的影響見(jiàn)圖4。

圖4 萼端黑斑病對(duì)庫(kù)爾勒香梨果皮L、a和b值的影響Fig.4 Calyx end black spot impact on the L，a and b value in skin of Korla fragrant pear

貯藏7 d內(nèi)，隨著貯藏時(shí)間延長(zhǎng)，a值和b值均呈上升趨勢(shì)，3月30日后上升幅度平緩。貯藏期內(nèi)，不同處理間a值和b值差異多表現(xiàn)為不顯著（P＞0.05），隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，處理間差異顯著（P＜0.05）。貯藏7 d，感病梨a值和b值始終大于健康梨，感病梨a值和b值分別比健康梨高4%～12%和6%～10%。L值的變化趨勢(shì)與a值和b值相反，隨著貯藏時(shí)間延長(zhǎng)，L值均呈下降趨勢(shì)，貯藏第5天后，處理間差異顯著，感病梨L值始終小于健康梨，變幅在2%～8%之間。這說(shuō)明貯藏過(guò)程中果實(shí)果皮色澤a值和b值會(huì)逐漸增大，L值會(huì)逐漸變小，色澤由綠逐漸變黃、變淡和變暗，感病梨比健康梨變黃、變淡和變暗速度更為迅速。

2.3 庫(kù)爾勒香梨健康果接種致病菌對(duì)果實(shí)可溶性固形物含量的影響

可溶性固形物是檢測(cè)果蔬品質(zhì)和貯藏效果的重要指標(biāo)。庫(kù)爾勒香梨萼端黑斑病對(duì)果實(shí)可溶性固形物含量的影響見(jiàn)圖5。

隨著貯藏時(shí)間延長(zhǎng)，果實(shí)中的可溶性固形物含量均呈下降趨勢(shì)，但感病梨下降幅度較健康梨大。貯藏7 d內(nèi)，庫(kù)爾勒香梨不同處理間可溶性固形物差異達(dá)顯著水平（P＜0.05），健康梨可溶性固形物含量大于感病梨，健康梨可溶性固形物含量比感病梨高10%～24%。這可能是由于感病梨中致病菌的感染，引起呼吸作用的增強(qiáng)，可溶性固形物含量的消耗增加，因此感病梨中可溶性固形物含量比健康梨中下降速度更快。

2.4 庫(kù)爾勒香梨健康果接種致病菌對(duì)果實(shí)硬度的影響

果實(shí)硬度是衡量果實(shí)成熟度和貯藏品質(zhì)的重要指標(biāo)。庫(kù)爾勒香梨萼端黑斑病對(duì)果實(shí)硬度的影響見(jiàn)圖6。

圖5 萼端黑斑病對(duì)庫(kù)爾勒香梨可溶性固形物含量的影響Fig.5 Calyx end black spot impact on the soluble solids content of Korla fragrant pear

圖6 萼端黑斑病對(duì)庫(kù)爾勒香梨果實(shí)硬度的影響Fig.6 Calyx end black spot impact on the fruit hardness of Korla fragrant pear

隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，果實(shí)硬度均呈下降趨勢(shì)。貯藏第4天后，果實(shí)硬度下降幅度增加。貯藏3 d內(nèi)，不同處理間果實(shí)硬度差異不顯著（P＞0.05），貯藏第4天至第7天，各處理間差異達(dá)顯著水平（P＜0.05）；貯藏期內(nèi)，健康梨果實(shí)硬度始終大于感病梨，健康梨果實(shí)硬度比感病梨高5%～22%。表明隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，果實(shí)硬度逐漸下降，由于致病菌的侵染，造成感病梨果肉硬度的軟化，所以硬度下降速度較快。

3 討論

1）庫(kù)爾勒香梨因其自身多汁、皮薄、衰變、易受損傷的特點(diǎn)，極易受病原菌的侵染，造成果實(shí)品質(zhì)下降，腐爛率極高，貯藏期間生理病害造成的損失高達(dá)30%左右。高腐爛率會(huì)引起果實(shí)硬度下降、果皮表面黃化等品質(zhì)下降的現(xiàn)象，產(chǎn)后必須進(jìn)行商品化貯藏、保鮮等，從而提高果實(shí)的商品價(jià)值。黑斑病是梨、蘋(píng)果[8]等薔薇科水果的三大病害之一，由真菌的鏈格孢侵染引起[9]。鏈格孢屬引起貯藏果實(shí)腐爛病原物，可在花期和果實(shí)生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期通過(guò)各種途徑潛伏侵染，直到果實(shí)貯藏期發(fā)病[10]。

2）大量研究表明，庫(kù)爾勒香梨在貯藏期間果實(shí)發(fā)生后熟作用，色澤從綠色逐漸向黃色轉(zhuǎn)變[11]。溫度是影響庫(kù)爾勒香梨品質(zhì)的主要因素之一，溫度高低影響果皮葉綠素的降解和果蔬體內(nèi)各種酶的活性，低溫可以抑制香梨果實(shí)葉綠素降解酶的活性，保持果實(shí)良好的色澤[12]。貯藏7 d內(nèi)，庫(kù)爾勒香梨隨著貯藏時(shí)間延長(zhǎng)a值和b值均呈上升趨勢(shì)。貯藏期內(nèi)不同處理間a值和b值差異多表現(xiàn)為不顯著（P＞0.05），后隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)處理間差異顯著（P＜0.05）。感病梨a值和b值始終大于健康梨，感病梨a值和b值分別比健康梨高4%～12%和6%～10%。L值的變化趨勢(shì)與a值和b值相反，貯藏第5天后，處理間差異顯著，感病梨L值始終小于健康梨，變幅在2%～8%之間。這可能是由于庫(kù)爾勒香梨在貯藏過(guò)程中果實(shí)表面色澤a值和b值會(huì)逐漸增大，色澤由綠逐漸變黃、變淡和變暗，而感病梨比健康梨變黃、變淡和變暗速度更為迅速的緣故。

3）果實(shí)采后可溶性固形物含量呈下降趨勢(shì)，與其呼吸代謝有關(guān)，果實(shí)中可溶性糖和有機(jī)酸可作為呼吸底物而被逐漸消耗[13]。低溫貯藏可抑制果實(shí)采后呼吸作用，從而維持果實(shí)較高的可溶性固形物含量，保持果實(shí)的食用品質(zhì)[14]。果實(shí)采后可溶性固形物含量呈下降趨勢(shì)。硬度決定了果實(shí)的口感與質(zhì)地，香梨果實(shí)采收后硬度呈下降趨勢(shì)。本試驗(yàn)中隨著貯藏時(shí)間延長(zhǎng)果實(shí)中可溶性固形物和果實(shí)硬度均呈下降趨勢(shì)，但感病梨下降幅度較為健康梨大。這是因?yàn)楦胁±媸艿街虏【那秩?，引起果?shí)呼吸作用突然增強(qiáng)[15]，造成呼吸底物主要是可溶性固形物的含量消耗增加，促使感病果中可溶性固形物含量迅速下降；致病菌的侵染也同時(shí)造成酶系統(tǒng)等生理活性的增加，造成果實(shí)硬度下降劇烈。

4 結(jié)論

健康果中L值較感病果高，而感病果中a值和b值的較高。隨著貯藏期的延長(zhǎng)，健康果和感病果中a值和b值均呈上升趨勢(shì)，感病果a值和b值始終大于健康果；L值的變化趨勢(shì)與a值和b值相反，感病果L值始終小于健康果。貯藏過(guò)程中，庫(kù)爾勒香梨健康果和感病果中可溶性固形物含量和果實(shí)硬度均呈下降趨勢(shì)，但感病果下降幅度較健康果大。

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The Change of Fruit Quality after Calyx End Black Spot Pathogenic Bacteria Reversed the Fruit

FAN Guo-Quan1，ZHAO Xiao-mei1，*，E Reken·Kuwanbieke2，WU Yu-peng3
（1.Xinjiang Academy of Agricultural Sciences，Urumqi 830091，Xinjiang，China；2.College of Science and Technology，Xinjiang Agricultural University，Urumqi 830052，Xinjiang，China；3.Xinjiang Vocational College of Agriculture，Changji 831100，Xinjiang，China）

It studied the calyx end black spot affected on fruit quality through the determination of color difference，soluble solids content and fruit hardness in health and disease pear in the process of storage，when the calyx end black rot pathogenic bacteria extracted from Korla fragrant pear disease fruit and reversed connect to healthy fruit.The results showed that the healthy fruit had higher L value than infected fruit，and infected fruit had higher a and b value.With the extension of storage period，a and b value in the healthy fruit and infected fruit was rising，while a and b value in infected fruit was always greater than healthy fruit；L value changed trendly in contrast to a and b values，and L value in infected fruit was always less than healthy fruit.Soluble solids content and fruit hardness were declining in Korla fragrant pear health fruit and infected fruit in storage process，but there was a big drop in infected fruit.

Korla fragrant pear；calyx end black spot；fruit quality

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.10.042

2016－08－31

自治區(qū)財(cái)政林業(yè)科技專項(xiàng)“新疆特色林果質(zhì)量控制發(fā)展戰(zhàn)略研究”

樊國(guó)全（1980—），男（漢），助理研究員，碩士，研究方向：園藝學(xué)。

*通信作者：趙曉梅（1980—），女（漢），副研究員，博士，研究方向：果樹(shù)學(xué)。