李 蘇，譚元生

復(fù)方鉤藤降壓片對SHR血壓及心肌、腎動脈形態(tài)學(xué)的影響

李 蘇1，譚元生2

目的 觀察復(fù)方鉤藤降壓片對自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)血壓及靶器官組織形態(tài)學(xué)改變。方法 將32只11周齡SHR，隨機分為SHR-M組(SHR-M組)、復(fù)方鉤藤降壓片組(SHR-G組)、替米沙坦組(SHR-T組)，分別為8只、16只、8只，同時以8只Wistar大鼠為空白對照組(WKY組)，干預(yù)8周測量5次血壓；取心肌、腎動脈，觀察HE、Masson染色后形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果 SHR-G組、SHR-T組血壓與SHR-M組比較明顯降低(P<0.05)；SHR-M組心肌細(xì)胞分布紊亂，細(xì)胞直徑增大，心肌纖維明顯增粗，視野下有斷裂現(xiàn)象，SHR-G組心肌細(xì)胞輕度肥大，細(xì)胞間質(zhì)輕度增生，心肌纖維無明顯增粗，無斷裂現(xiàn)象；SHR-G組、SHR-T組腎動脈內(nèi)膜、中膜、外膜較SHR-M組明顯改善。結(jié)論 復(fù)方鉤藤降壓片可降低SHR血壓，延緩高血壓左室重構(gòu)，減慢心肌纖維化進程同時減輕SHR腎動脈血管重塑。

自發(fā)性高血壓；大鼠；復(fù)方鉤藤降壓片；血壓；組織形態(tài)學(xué)

高血壓病是常見的慢性病之一，也是心腦血管病重要危險因素之一。近年來我國人群高血壓病患病率呈明顯上升趨勢，按2010年我國人口的數(shù)量與結(jié)構(gòu)推算，目前我國約有2億高血壓病病人，約占全球高血壓病總?cè)藬?shù)的1/5，估計我國每年新增高血壓病病人1 000萬人。近幾十年來，高血壓病發(fā)病機制研究不斷深入，降壓藥物研究迅速發(fā)展[1]。但高血壓病對心、腦、腎等靶器官損害并未得到良好控制，致殘率、病死率均呈遞增趨勢[2-5]。中醫(yī)藥治病求本，其作用具有多靶點性、多層次性，且作用溫和、療效確切，在高血壓病及其靶器官損害防治中，中醫(yī)藥作用受到較多關(guān)注。因此結(jié)合多年臨床與科研經(jīng)驗，提出“陰虛陽亢，瘀血阻絡(luò)證”是高血壓病的常見證型，確定“養(yǎng)陰、活血通脈”治法，并據(jù)此精選藥物組方成復(fù)方鉤藤降壓片。本實驗探究復(fù)方鉤藤降壓片降壓及延緩、逆轉(zhuǎn)靶器官損害的效果，為復(fù)方鉤藤降壓片臨床廣泛應(yīng)用提供理論依據(jù)及實驗數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 11周齡雄性健康SPF級自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)[SCXK(京)2012-0001]32只；11周齡SPF級雄性健康WKY大鼠[SCXK(京)2012-0001]8只；所有大鼠均購買自(北京)維通利華實驗技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2 實驗藥物 復(fù)方鉤藤降壓片，由鉤藤、川芎、麥冬等藥物組成，規(guī)格：每片0.4 g，湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑科生產(chǎn)；替米沙坦片(邦坦)，規(guī)格：每片40 mg，江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)。

1.3 實驗主要試劑與儀器 水合氯醛、蘇木精、伊紅、甲醛溶液，湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥藥理(心血管)實驗室；電子天平(TP-2200B型)，湘儀天平儀器設(shè)備有限公司；智能無創(chuàng)血壓計(BP-98A)，日本；顯微圖像分析系統(tǒng)，日本OLYMPUS公司；切片機，成都泰盟科技有限公司等。

1.4 動物分組及給藥方法 32只SHR隨機分為3組：SHR-M組(SHR-M組，8只)、復(fù)方鉤藤降壓片組(SHR-G組，16只)，替米沙坦組(SHR-T組，8只)；同時以8只Wistar大鼠為空白對照組(WKY組)，將成人體重按60 kg換算，按照成人臨床用藥劑量折合大鼠等效劑量用藥。治療組按10 mL/kg，采用43.2 mg/mL溶液灌胃大鼠；對照組按10 mL/kg，采用0.36 mg/mL溶液灌胃大鼠；SHR-M組和WKY組予以蒸餾水灌胃，按10 mL/kg計算灌胃水量，每天08：00灌胃1次，共8周。

1.5 實驗室指標(biāo)檢查 血壓測量時間分別在實驗前、2周、4周、6周、8周，在周末灌胃后2 h開始測量。采血后處死大鼠，開胸取出心臟后，剪取左室心肌，顯微鏡下，HE、Masson染色下觀測心肌、腎動脈組織形態(tài)學(xué)改變。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠收縮壓比較 SHR-M組與WKY組比較，收縮壓明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；血壓升高程度與喂養(yǎng)周齡成正比；同SHR-M組比較，SHR-G組及SHR-T組收縮壓水平均明顯降低；但SHR-G組降壓程度較SHR-T組大，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。詳見表1。

表1 各組大鼠收縮壓比較(±s) mmHg

2.2 各組大鼠心肌細(xì)胞病理組織學(xué)改變

2.2.1 HE染色 HE染色×400鏡下可見：WKY組心肌纖維排列大致正常，心肌細(xì)胞排列較整齊，大小、形態(tài)正常；SHR-M組：心肌纖維大多排列不整齊，心肌細(xì)胞間質(zhì)增寬紊亂，心肌細(xì)胞中度腫脹，可見顯著玻璃樣變；SHR-G組：心肌纖維排列較整齊，心肌細(xì)胞輕度水腫，間質(zhì)稍增寬，間質(zhì)內(nèi)未見明顯炎癥細(xì)胞；SHR-T組：心肌纖維排列較整齊，心肌細(xì)胞輕度水腫，間質(zhì)稍增寬，少量炎癥細(xì)胞浸潤?？梢娭兴帍?fù)方鉤藤降壓片組可明顯改善心肌肥大程度，其效果與西藥替米沙坦組相當(dāng)。詳見圖1。

圖1 各組大鼠心肌細(xì)胞病理組織學(xué)(HE×400)

2.2.2 Masson染色 光鏡下可見，WKY組心肌間質(zhì)膠原無增生；SHR-M組部分心肌纖維壞死，心肌間質(zhì)膠原增生明顯；SHR-G組心肌間質(zhì)膠原輕度增生；SHR-T組心肌纖維排列較整齊，心肌間質(zhì)膠原稍增生。詳見圖2。

圖2 各組大鼠心肌細(xì)胞病理組織學(xué)(Masson染色)

2.3 各組大鼠腎動脈形態(tài)學(xué)改變 HE染色×400鏡下可見：WKY組腎動脈內(nèi)膜與內(nèi)膜上皮完整，中膜平滑肌細(xì)胞核、纖維完整，外膜正常；SHR組腎動脈內(nèi)膜與內(nèi)膜上皮大多數(shù)完整，局部有缺損，中膜平滑肌細(xì)胞核、纖維排列紊亂，外膜正常；SHR-G組腎動脈內(nèi)膜與內(nèi)膜上皮完整，中膜平滑肌細(xì)胞核、纖維排列正常，外膜正常；SHR-T組腎動脈內(nèi)膜與內(nèi)膜上皮完整，中膜平滑肌細(xì)胞核、纖維基本正常，外膜正常。詳見圖3。

圖3 各組大鼠腎動脈形態(tài)學(xué)改變(HE×400)

3 討 論

復(fù)方鉤藤降壓片(鉤藤、川芎、麥冬等)是譚元生教授在長期臨床治療大量高血壓病左室肥厚的病例中總結(jié)出來的有效經(jīng)驗方[6-9]。譚元生教授認(rèn)為，高血壓病左室肥厚是一種常見的慢性心血管疾病，病人以中老年居多，顯示出不同程度“虛”、“風(fēng)”、“瘀”的征象[10-13]。虛責(zé)之于肝腎陰虛；風(fēng)責(zé)之于陰虛陽亢，風(fēng)陽上擾；瘀貫穿于高血壓左室肥厚的全過程，或源于肝失調(diào)達、心絡(luò)澀滯，或源于肝郁化熱、陰虛津虧，煎熬營血、氣血郁結(jié)[14-16]。鑒于此，譚元生教授針對本病發(fā)病的陰虛-陽亢-絡(luò)阻三個病機演變環(huán)節(jié)，制定出藥味精簡，針對性較強的復(fù)方鉤藤降壓片以養(yǎng)陰柔肝、活血通絡(luò)。

本課題組前期研究表明，復(fù)方鉤藤片對SHR有顯著降壓作用，同時能明顯降低高血壓病病人血壓，顯著改善其臨床癥狀及體征。復(fù)方鉤藤降壓片具有抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的作用，其效果與血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑相似；復(fù)方鉤藤降壓片同時能減少心肌組織中血管緊張素受體水平，使心肌組織中血管緊張素Ⅱ-2型受體蛋白的表達水平降低，作用類似于血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑。復(fù)方鉤藤降壓片能降低高血壓病病人血壓，其改善脂聯(lián)素、同型半胱氨酸水平作用與替米沙坦相似，但在改善病人癥狀、體征方面明顯優(yōu)于替米沙坦[17-19]。

本實驗研究顯示，復(fù)方鉤藤降壓片降低SHR血壓、延緩高血壓左室重構(gòu)、減輕SHR腎動脈血管重塑療效是肯定的，以后可進一步深入開展藥理和動物實驗研究，從細(xì)胞、分子、代謝、基因等深層次來探討其對高血壓病及其靶器官損害神經(jīng)、體液、物質(zhì)代謝和遠期終點指標(biāo)的影響[20]，為其臨床應(yīng)用提供有力的實驗研究基礎(chǔ)。

目前高血壓的發(fā)生發(fā)展機制諸多，但近年來高血壓炎癥機制被逐漸發(fā)現(xiàn)，諸多研究皆證明高血壓的發(fā)生、發(fā)展與炎癥相關(guān)，但具體明確的炎癥機制尚未完全清晰。本課題組正在從事基于G蛋白偶聯(lián)嘌呤受體(P2Y6)相關(guān)信號通路介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥穩(wěn)態(tài)失衡研究“虛、瘀、風(fēng)”病機高血壓病血管重塑的機制及中藥干預(yù)的研究，把握高血壓病的中醫(yī)病機理論，進行緊扣其理法方藥的機制研究，對高血壓病及其血管重塑的預(yù)防、治療、轉(zhuǎn)歸具有重要的科學(xué)價值與臨床意義。

[1] Vasilets LM，Tuev AV，Agafonov AV，et al.Ventricular arrhythmias and arterial hypertension：role of inflammatory biomarkers in arrhythmia development[J].Vestn Ross Akad Med Nauk，2012，25(10)： 12-17.

[2] Fukutomi M，Hoshide S，Eguchi K，et al.Low-grade inflammation and ambulatory blood pressure response to antihypertensive treatment：the ALPHABET study[J].Am J Hypertens，2013，26(6)：784-792.

[3] Bieleeka-Dabmwa A，Aronow WS.The rise and fall of hypertension：lessons learned from eastern Europe[J].Curt Cardiovasc Risk Rep，2011，5(2)：174-179.

[4] 中國高血壓防治指南修訂委員會.中國高血壓防治指南[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：7-9.

[5] Crowley SD.The cooperative roles of inflammation and oxidative stress in the pathogenesis of hypertension[J].Antioxid Redox Signal，2014，20(1)：102-120.

[6] 譚元生，王宇紅.復(fù)方鉤藤片對自發(fā)性高血壓大鼠的降壓作用及其機制[J].中國中醫(yī)急癥，2012，21(1)：52-54.

[7] 張穩(wěn).基于RAA系統(tǒng)探討復(fù)方鉤藤降壓寧片對2K1C-RHR作用效果的實驗及臨床研究[D].長沙：湖南中醫(yī)藥大學(xué)，2011.

[8] 廖若夷，譚元生，張穩(wěn).復(fù)方鉤藤降壓寧片治療高血壓病陰虛陽亢、瘀血阻絡(luò)證患者臨床研究[J].中國中醫(yī)急癥，2013，22(11)：2009-2011.

[9] 范金茹，王行寬，熊國強.高血壓左室肥厚中醫(yī)病名、病位、病因病機探討[J].中醫(yī)藥通報，2005，4(2)：19-21.

[10] 譚元生，王宇紅.原發(fā)性高血壓陰虛陽亢證辨證論治進展[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2011，9(2)：228-229.

[11] 葉舒婷，譚超，譚元生.中醫(yī)藥對高血壓病左室肥厚的臨床研究進展[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報，2013，19(1)：91-94.

[12] 黃娟娟，譚元生.復(fù)方鉤藤降壓片治療原發(fā)性高血壓陰虛陽亢挾瘀證療效及對Cys-C、hs-CRP的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2013，33(7)：72-75.

[13] 葉舒婷，譚超，譚元生，等.復(fù)方鉤藤降壓片治療高血壓病左室肥厚(陰虛陽亢、瘀血阻絡(luò)證)31例臨床觀察[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報，2013，19(5)：8-10.

[14] 戴小良，范金茹，王行寬，等.滋生青陽片改善高血壓左室肥厚中醫(yī)癥候及降壓的臨床研究[J].中成藥，2007，29(3)：329-333.

[15] 應(yīng)顯星.心可舒合厄貝沙坦改善高血壓左室肥厚心肌缺血療效觀察[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，22(2)：101-102.

[16] 劉麗莉.潛陽寧心湯逆轉(zhuǎn)高血壓左室肥厚的臨床觀察[J].中國中醫(yī)藥科技，2011，18(4)：286.

[17] 魏多.尼索地平、奧美沙坦對原發(fā)性高血壓患者血管內(nèi)皮功能及其影響因素的作用[D].上海：復(fù)旦大學(xué)，2011.

[18] 姬媛媛.TLR4介導(dǎo)AngⅡ的致炎信號通路及PPARr激動劑的干預(yù)[D].西安：西安交通大學(xué)，2009.

[19] 郭小平.厄貝沙坦對原發(fā)性高血壓患者炎癥因子作用分析[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2012，9(8)：61-62.

[20] Wang ZG，Niu QL，Gu W，et al.Association of C602A and T1559C polymerphisms of E-selectin gene and essential hypertension[J].National Medical Journal of China，2011，91(18)：1238-1241.

(本文編輯薛妮)

Effects of Compound Gouteng Jiangya Tablets on Blood Pressure and Morphology of Myocardium and Renal Artery in Spontaneously Hypertensive Rats

Li Su，Tan Yuansheng

The First Affiliated Hospital，Hunan University of Traditional Chinese Medicine，Changsha 410007， Hunan，China

Objective To observe the effects of compound Gouteng Jiangya tablets (CGJT) on blood pressure and morphology of target organ organization in spontaneously hypertensive rats (SHR). Methods Thirty-two 11-week-old SHR were randomly divided into 3 groups：model group(SHR-M group，n= 8)，SHR-CGJT group (n= 16)，and SHR-telmisartan group (n= 8). Eight 11-week-old wistar rats were selected as blank control group.After 8 weeks， blood pressure was measured for 5 times.The morphologic changes of myocardium and renal artery were observed by Hematoxylin-Eosin (HE) and Masson staining.Results Compared with SHR-M group， blood pressure reduced in SHR-CGJT group and SHR-telmisartan group (P<0.05). The morphologic changes of myocardium and renal artery were improved in SHR-CGJT group and SHR-telmisartan group.Conclusion CGJT has antihypertensive effect on SHR， can delays hypertensive left ventricular remodeling，slows down the process of myocardial fibrosis and renal artery vascular remodeling.

spontaneously hypertensive rats；compound Gouteng Jiangya tablets；blood pressure；morphology

國家自然科學(xué)基金(No.81473616)

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院(長沙 410007)，E-mail：619811607@qq.com；2.湖南省中醫(yī)藥研究院

引用信息：李蘇，譚元生.復(fù)方鉤藤降壓片對SHR血壓及心肌、腎動脈形態(tài)學(xué)的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2017，15(8)：931-934.

R544.1 R255.3

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.08.009

1672-1349(2017)08-0931-04

2016-08-03)