劉建文

(四川省甘孜州職業(yè)技術學校，四川 瀘定 626100)

甘孜州殺螺植物資源的篩選及活性研究

劉建文

(四川省甘孜州職業(yè)技術學校，四川 瀘定 626100)

本試驗以8種植物為對象，研究其不同提取物對福壽螺的毒殺活性，并篩選出具有明顯殺螺效果的植物提取物，進一步測定其LC50值，以期為開發(fā)和合理利用植物源殺螺劑提供參考。

甘孜州；植物資源；殺螺活性；篩選

近年來，福壽螺(Pomacea canaliculata)對我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的危害和生物安全的威脅越來越嚴重。如何有效控制福壽螺的危害，已經(jīng)成為社會關注的焦點。目前，福壽螺的防治技術逐漸趨于多樣化，但化學防治法由于方便快捷，成本低，控螺效果明顯，一直是農(nóng)民控制福壽螺危害的主要方式。常用殺螺劑主要有五氯酚鈉、貝螺殺、百螺殺、百螺敵、硫酸銅等?；瘜W殺螺劑的使用或多或少都有副作用，如硫酸銅是重金屬鹽，會嚴重污染水體[1]。多數(shù)殺螺產(chǎn)品使用過程中產(chǎn)生的環(huán)境污染、人畜中毒、殺傷天敵、破壞生態(tài)平衡等一系列公害問題，導致化學農(nóng)藥在實際應用中有很大局限性[2-4]。因此，探索高效、經(jīng)濟、安全的植物源殺螺劑，將是未來防控福壽螺的有效途徑。本試驗利用甘孜州豐富的特種植物資源，開展植物源殺螺植物的篩選，為進一步開發(fā)植物源滅螺劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試植物 通過查閱文獻資料和民間走訪調(diào)查，以具有毒性和醫(yī)用價值的植物資源為取樣方向，從四川省甘孜州境內(nèi)采集8種潛在殺螺植物樣品，將樣品置于室溫下晾干后備用。植物名錄如下：

狼毒(Stellerachamaejasme)

厚樸(MagnoliaofficinalisRehd. et Wils.)

川牛膝(CyathulaofficinalisKuan)

麻牛膝(CyathulacapitataMoq)

秦艽(GentianamacrophyllaPall.)

澤漆(EuphorbiahelioscopiaLinn.)

毛葉薔薇(RosamaireiLevl.)

DZN-1

1.1.2 供試福壽螺 福壽螺(Pomaceacanaliculata)：市場購買后于實驗室標準化飼養(yǎng)7d后，剔除掉活性較差個體，保留活力較好個體用于實驗。

1.1.3 供試溶劑 甲醇(A.R.)、乙酸乙酯(A.R.)、石油醚(A.R.)、二甲基亞砜(A.R.60～90℃)等，以上溶劑均由成都市科龍化工試劑廠提供。

1.1.4 儀器 儀器設備如表1所示。

表1 儀器

1.2 試驗方法

1.2.1 植物提取物的制備 采用索氏提取法，選用極性差異較大的3種提取溶劑(甲醇、乙酸乙酯、石油醚)依次對植物樣本進行提取[5]：將植物樣本用粉碎機粉碎至20目，稱取一定量裝于提取器中，用甲醇提取3次，將提取液過濾，濾液裝于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮，待濃縮液較粘稠時，倒入燒杯，放進烘箱內(nèi)烘干至恒重，稱重后計算提取率，然后將提取物放入冰箱4℃冷藏備用。甲醇提過的植物樣本繼續(xù)用乙酸乙酯提取3次，后續(xù)參考甲醇。接著用石油醚提取植物樣本3次，后續(xù)參考甲醇。

提取率(%)=[濃縮后各分離成分的質(zhì)量/植物材料質(zhì)量]×100%

1.2.2 殺螺活性植物的篩選 參考駱悅等[6]試驗方法，采用浸殺法。設置各植物提取液的濃度200μg/mL的懸浮液，進行浸殺實驗。每次殺螺活性測定均設置3次重復，取500mL燒杯，然后在燒杯中倒入300mL配好的藥液。每個燒杯中放入20只大小均勻，長勢相同的福壽螺。并設置對照，清水對照(對照甲醇提取物)，二甲亞砜和清水混合液對照(對照乙酸乙酯提取物)，石油醚和清水混合液對照(對照石油醚提取物)。最后用紗布將燒杯封口，避免福壽螺逃逸，放在室內(nèi)培養(yǎng)(溫度為25～28℃)。測定處理48h后福壽螺死亡率，以初步篩選具有殺螺活性的植物提取物。選取殺螺活性較高的植物提取物，用200μg/mL提取物懸浮液進行浸殺實驗，分別測定24h、48h、72h后福壽螺死亡率，進一步確定其殺螺活性，若在72h死亡率為100%的提取物則進入復篩。復篩配制濃度分別為10μg/mL，50μg/mL，100μg/mL的植物提取物藥液進行實驗。分別在24h，48h和72h觀察各燒杯福壽螺的死亡情況，并做好記錄。

表2 各植物提取物對福壽螺的毒殺活性

福壽螺死亡標準[7]：在清水中不伸出觸須或腳墊爬行，觸碰上浮至水面的福壽螺并不下沉，厴殼完全張開露出頭角等部位，觸碰也不關閉厴殼。

1.2.3 毒力測定 采用浸殺法。設置提取物濃度分別為10μg/mL，20μg/mL，40μg/mL，80μg/mL，160μg/mL，進行實驗。分別在24h和48h觀察各燒杯福壽螺的死亡情況，并做好記錄，計算校正死亡率。根據(jù)結(jié)果，建立毒力回歸方程，并計算植物提取物的LC50。

2 結(jié)果與分析

2.1 植物提取物殺螺活性的初步篩選

采用浸殺法對8種植物提取物進行了殺螺活性的初步篩選，并以福壽螺的校正死亡率為指標。由表2可知，狼毒、厚樸、川牛膝、麻牛膝、秦艽、澤漆、毛葉薔薇、DZN-1這8種植物樣本甲醇、乙酸乙酯、石油醚提取率大小依次為：甲醇>乙酸乙酯>石油醚，其中石油醚對厚樸、秦艽、毛葉薔薇的提取率為0。

用200μg/mL的24種提取物懸浮液對福壽螺進行浸殺處理。在甲醇提取物中，麻牛膝的甲醇提取物殺螺活性最高，達到了73.66%，遠高于其他植物甲醇提取物；其次為狼毒，殺螺活性為20.51%；而川牛膝甲醇提取物對福壽螺的校正死亡率為0，表明該植物甲醇提取物對福壽螺并沒有任何影響。乙酸乙酯提取物中，川牛膝和麻牛膝的乙酸乙酯提取物殺螺活性較高，分別為40.85%和56.23%，其余6種植物乙酸乙酯提取物的殺螺活性都較低，24h校正死亡率小于10%。石油醚對各植物的提取率較低，且其基本無殺螺活性。綜上所述，川牛膝乙酸乙酯提取物和麻牛膝甲醇、乙酸乙酯提取物表現(xiàn)出明顯的殺螺活性。

2.2 牛膝植物不同提取物對福壽螺的毒殺活性

根據(jù)活性初篩結(jié)果確定川牛膝乙酸乙酯提取物和麻牛膝甲醇、乙酸乙酯提取物有較高的殺螺活性，因此，設置3種提取物濃度為200μg/mL，進一步對福壽螺進行浸殺實驗，測定牛膝不同提取物處理24h、48h、72h后福壽螺死亡率，其校正死亡率測定結(jié)果如下表3所示。

表3 不同提取物作用下福壽螺的校正死亡率

根據(jù)表3可知，牛膝不同提取物的殺螺活性大小為：麻牛膝甲醇提取物>麻牛膝乙酸乙酯提取物>川牛膝乙酸乙酯提取物。其中，在麻牛膝甲醇提取物處理72h后福壽螺校正死亡率為100%，故對麻牛膝甲醇提取物進行復篩，設置麻牛膝甲醇提取物的濃度為10μg/mL，50μg/mL，100μg/mL，進一步測定其對福壽螺的毒殺活性，測定結(jié)果如下表4所示。

表4 麻牛膝甲醇提取物對福壽螺的校正死亡率

注：同列中字母不同者，表示在0.05水平上差異性顯著(Duncan新復極差法)

根據(jù)表4結(jié)果所示，處理濃度為10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL時，這3個不同濃度之間福壽螺死亡率差異性顯著，并且隨著濃度的增加，死亡率顯著提高。參考表4數(shù)據(jù)，設置麻牛膝甲醇提取物濃度為10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL，測定麻牛膝甲醇提取物對福壽螺的毒力。

2.3 麻牛膝甲醇提取物對福壽螺的毒力測定

設置麻牛膝甲醇提取物濃度為10μg/mL，20μg/mL，40μg/mL，80μg/mL，160μg/mL，測定提取物對福壽螺的毒力。測定結(jié)果如表5所示。

表5 麻牛膝甲醇提取物對福壽螺的毒力測定結(jié)果

根據(jù)表5可知，麻牛膝甲醇提取物處理福壽螺24h，LC50值為76.15μg/mL，處理福壽螺48h，LC50為53.36μg/mL。

3 討論

甘孜州因其獨特的地形地貌與氣候特征，具有豐富的植物資源，尤以橫斷山區(qū)被譽為植物資源的寶庫。已有大量植物用于動物和昆蟲方面的研究，并成效顯著，但至今尚未報道對福壽螺的活性研究。通過多種途徑，積極挖掘、篩選新的殺螺植物，不僅充分利用了甘孜州豐富的植物資源優(yōu)勢，而且對于進一步開發(fā)高效、經(jīng)濟、安全的植物源殺螺劑有著積極的參考價值。

植物源殺螺劑作為目前生物滅螺研究的一個重要方向，已得到學者們的廣泛重視。如今對福壽螺有毒殺作用的植物提取物已達上千種，但絕大多數(shù)植物提取物因殺螺效果差而未能進一步開發(fā)成商品在生產(chǎn)實踐中加以利用。因此，在今后的一段時間內(nèi)，篩選高活性植物滅螺材料是促進植物滅螺劑產(chǎn)業(yè)化開發(fā)的重要方向。本試驗，在四川甘孜州境內(nèi)采集了8種具有潛在殺螺活性的植物樣品，進行殺螺活性研究與毒力測定，成功篩選出具有明顯殺螺活性的植物——麻牛膝。麻牛膝既是常用中藥材，又是重要的出口品種，具有逐瘀通經(jīng)、通利關節(jié)、利尿通淋等功效。目前已有報道麻牛膝在動物和昆蟲方面的研究，而尚未見麻牛膝的滅螺活性報道。因此，我們?nèi)藶槁榕Ｏサ募状继崛∥锞哂休^高的殺螺活性，值得深入進行毒力測定、明確其活性成分及毒理機制研究。

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