彭焱，吳翠嬌，向桂玲

(1青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山東青島266021；2臨沂市人民醫(yī)院)

甲狀腺癌組織中神經(jīng)細(xì)胞黏附分子、β-catenin的表達(dá)及意義

彭焱1，2，吳翠嬌1，向桂玲1

(1青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山東青島266021；2臨沂市人民醫(yī)院)

目的 觀察甲狀腺癌組織中神經(jīng)細(xì)胞黏附分子(NCAM)、β-catenin的表達(dá)，探討其在甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法 取70例甲狀腺癌組織和36例甲狀腺良性病變組織，采用免疫組化SP法檢測NCAM、β-catenin表達(dá)，分析NCAM、β-catenin表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 NCAM在甲狀腺癌組織中的陽性表達(dá)率低于甲狀腺良性病變組織，β-catenin在甲狀腺癌組織中的異常表達(dá)率高于甲狀腺良性病變組織(P均<0.05)。甲狀腺癌組織中NCAM陽性表達(dá)率和β-catenin異常表達(dá)率與患者的性別、年齡、腫瘤直徑及病理分期均無關(guān)(P均>0.05)，NCAM陽性表達(dá)率與腫瘤淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。甲狀腺癌各組織學(xué)類型中NCAM、β-catenin異常表達(dá)率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。甲狀腺癌組織中NCAM的表達(dá)與β-catenin呈負(fù)相關(guān)(r=-0.025，P<0.05)。結(jié)論 甲狀腺癌組織中NCAM和β-catenin的異常表達(dá)共同參與了甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展過程，可能成為判斷甲狀腺癌惡性程度、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的指標(biāo)。

甲狀腺癌；神經(jīng)細(xì)胞黏附分子；β-catenin

甲狀腺癌是頭頸部最常見的惡性腫瘤，近年來甲狀腺癌發(fā)病率呈上升趨勢，文獻(xiàn)報道以每年3%的速度遞增[1]。典型的甲狀腺癌根據(jù)其組織的砂粒體、核特征、纖維化腫瘤等可確診，但對于特殊組織學(xué)類型、形態(tài)不典型的病變及微小癌的診斷存在困難，且與良性病變出現(xiàn)的乳頭狀增生極易發(fā)生混淆。其中部分難治性甲狀腺癌如髓樣癌、未分化癌等通過手術(shù)和131I、抑制TSH治療難以獲得良好的治療效果，而放療和化療對于甲狀腺癌的療效均較差。神經(jīng)細(xì)胞黏附分子(NCAM)在神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)育過程中具有重要作用，其表達(dá)缺失可能與某些惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后差密切相關(guān)。β-catenin最早作為黏附因子被發(fā)現(xiàn)，其主要介導(dǎo)細(xì)胞間黏附和參與基因的表達(dá)。本研究通過檢測甲狀腺癌及甲狀腺良性病變組織中NCAM、β-catenin的表達(dá)，探討其在甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2008年1月～2015年12月在我院行手術(shù)治療的甲狀腺癌患者70例(觀察組)，男22例、女48例，年齡20～71歲、平均40歲。術(shù)前未行放化療及其他生物學(xué)治療。其中甲狀腺乳頭狀癌33例，甲狀腺濾泡癌15例，甲狀腺髓樣癌12例，未分化甲狀腺癌10例。另取20例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和16例甲狀腺腺瘤作為對照組。

1.2 NCAM、β-catenin檢測 將標(biāo)本用石蠟包埋，連續(xù)4 μm厚切片。采用免疫組化SP法檢測NCAM、β-catenin水平，具體操作步驟按試劑說明書進(jìn)行。切片抗原修復(fù)采用高壓鍋高溫修復(fù)，封閉。滴加一抗(鼠抗人CD56稀釋度為1∶65，鼠抗人β-catenin稀釋度為1∶65，均為Abcam公司產(chǎn)品)，4 ℃過夜，滴加即用型生物素化二抗，37 ℃孵育20 min，隨即滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37 ℃孵育20 min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹脂封片，顯微鏡下觀察。以封閉血清代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判定 NCAM以細(xì)胞膜染成棕黃色為陽性，陽性細(xì)胞數(shù)>10%為陽性，≤10%為陰性。β-catenin以細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核或細(xì)胞膜上出現(xiàn)棕黃染色為陽性，參照文獻(xiàn)[2]標(biāo)準(zhǔn)，從細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核三方面判斷β-catenin的分布特征：細(xì)胞膜陽性表達(dá)細(xì)胞百分?jǐn)?shù)>70%為正常表達(dá)，反之為表達(dá)減弱或缺失；胞質(zhì)或胞核陽性表達(dá)細(xì)胞百分?jǐn)?shù)>10%為異位表達(dá)；表達(dá)減弱或缺失以及異位表達(dá)統(tǒng)稱為異常表達(dá)。每張切片鏡下隨機(jī)選取10個視野(×200)，每個視野計數(shù)100個甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞，計算各視野中陽性細(xì)胞所占百分比，取平均值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。率的比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組NCAM陽性表達(dá)率、β-catenin異常表達(dá)率比較 觀察組NCAM陽性3例，陽性表達(dá)率為4.26%；對照組NCAM陽性33例，陽性表達(dá)率為91.67%。觀察組NCAM陽性表達(dá)率低于對照組(P<0.05)。觀察組β-catenin異常表達(dá)58例，異常表達(dá)率為82.56%；對照組β-catenin異常表達(dá)3例，異常表達(dá)率為8.33%。觀察組β-catenin異常表達(dá)率高于對照組(P<0.05)。

2.2 甲狀腺癌組織中NCAM、β-catenin表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 觀察組NCAM陽性表達(dá)率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤直徑及病理分期均無關(guān)(P均>0.05)；β-catenin異常表達(dá)率與性別、年齡、腫瘤直徑、病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無關(guān)(P均>0.05)。見表1。

表1 NCAM、β-catenin表達(dá)與甲狀腺癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3 甲狀腺癌組織中NCAM與β-catenin表達(dá)的相關(guān)性 67例NCAM陰性的甲狀腺癌組織中，β-catenin陽性55例(82%);58例β-catenin陽性的甲狀腺癌組織中,NCAM陰性55例(95%)。相關(guān)性分析顯示，甲狀腺癌組織中NCAM與β-catenin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.025，P<0.05)。

3 討論

甲狀腺癌多起病隱匿、進(jìn)展緩慢，初期癥狀和體征與一些良性腫瘤無明顯的區(qū)別，極易誤診。尋找特異性腫瘤標(biāo)記物，建立可靠、可行的檢測甲狀腺癌的手段，是甲狀腺癌研究的熱門領(lǐng)域[3]。從分子水平認(rèn)識細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路異常在甲狀腺癌細(xì)胞發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移中的作用，可以為甲狀腺癌的防治提供新的思路。

NCAM屬于免疫球蛋白超家族，在來源于神經(jīng)外胚層的細(xì)胞和組織中廣泛存在。NCAM抗原正常表達(dá)于神經(jīng)元、星形細(xì)胞、NK細(xì)胞和少數(shù)活化的T淋巴細(xì)胞等，可對腫瘤細(xì)胞的遷移和腫瘤相關(guān)淋巴管的形成產(chǎn)生影響[4]。El Demellawy等[5]報道，NCAM在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)呈陰性，而陽性表達(dá)于除癌以外的多數(shù)病變和良性腫瘤，其特異性接近100%。Ozolins等[6]發(fā)現(xiàn)，NCAM在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)呈陰性，僅在周圍的正常組織中出現(xiàn)表達(dá)，而在甲狀腺腺瘤和甲狀腺腫中表達(dá)呈陽性；認(rèn)為NCAM可以用于輔助鑒別甲狀腺良惡性病變。胡孟鈞等[7]研究表明，NCAM在甲狀腺乳頭狀癌中的陽性率為16%，在良性乳頭狀增生中的陽性率為68%。Scarpino等[8]研究發(fā)現(xiàn)，NCAM在正常甲狀腺組織和良性甲狀腺病變中多數(shù)有表達(dá)，但在多數(shù)甲狀腺癌中表達(dá)降低。進(jìn)一步的研究表明CD56的失表達(dá)可作為甲狀腺乳頭狀癌的鑒別診斷要點(diǎn)[9，10]。本研究顯示，NCAM在甲狀腺癌組織中70例樣本僅3例陽性，陽性表達(dá)率為4.26%，而在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和甲狀腺腺瘤組織中陽性表達(dá)率高達(dá)91.67%，證實(shí)NCAM在甲狀腺癌中存在表達(dá)缺失的現(xiàn)象。NCAM陽性表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，而與性別、年齡、腫瘤直徑及病理分期無關(guān)，表明在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺癌中NCAM陽性表達(dá)率更低，可能與甲狀腺癌轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后差相關(guān)。

甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展和浸潤是一個涉及多分子相互作用的多階段的復(fù)雜過程。在此過程中，不同功能的基因?qū)?xì)胞產(chǎn)生的影響促使細(xì)胞癌變，加速腫瘤發(fā)展，其中原癌基因的過度表達(dá)、腫瘤抑制基因的突變等均與甲狀腺癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[11]。β-catenin廣泛存在于各類型細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞，對這些細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等方面有重要的調(diào)節(jié)。β-catenin基因是原癌基因，其編碼的β-catenin蛋白與胞膜上的鈣黏蛋白E相結(jié)合，共同調(diào)節(jié)細(xì)胞之間的的同質(zhì)性黏附，在Wnt經(jīng)典信號途徑中起著樞紐作用[12]。楊鷺等[13]研究表明，β-catenin在許多惡性腫瘤如乳腺癌中表達(dá)上調(diào)，且與不良預(yù)后相關(guān)。劉瑞等[14]的小鼠黑色素瘤B16-F0細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)證實(shí)，NCAM能夠通過調(diào)控β-catenin促進(jìn)小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖，NCAM對β-catenin信號通路的影響完全獨(dú)立于經(jīng)典的Wnt信號通路。NCAM、β-catenin在甲狀腺侵襲轉(zhuǎn)移方面具有協(xié)同促進(jìn)作用，可能存在一條傳導(dǎo)通路，使NCAM通過調(diào)控β-catenin來掌控黑色素瘤細(xì)胞的增殖。賈金良等[15]報道，分化型甲狀腺癌組織中的β-catenin蛋白表達(dá)率為67.31%，明顯高于正常甲狀腺組織的20.00%。本研究通過免疫組化法檢測甲狀腺癌組織與甲狀腺良性腫瘤中的β-catenin蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示甲狀腺癌組織中β-catenin的異常表達(dá)率高于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和甲狀腺腺瘤組織，提示β-catenin可能對甲狀腺癌的浸潤、轉(zhuǎn)移有促進(jìn)作用。β-catenin異常表達(dá)率在腫瘤淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移及病理分期之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義；其在未分化甲狀腺癌中異常表達(dá)率高于甲狀腺癌其他組織學(xué)類型，但差異也沒有統(tǒng)計學(xué)意義，需要加大樣本量進(jìn)一步研究。進(jìn)一步分析NCAM與β-catenin的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，二者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。這兩種蛋白表達(dá)的反向平衡現(xiàn)象，提示NCAM、β-catenin在甲狀腺癌的發(fā)生、浸潤及轉(zhuǎn)移中關(guān)系密切。

綜上所述，甲狀腺癌組織中NCAM陽性表達(dá)和β-catenin蛋白異常表達(dá)共同參與了甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展過程，可能成為判斷甲狀腺癌惡性程度、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的指標(biāo)。

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吳翠嬌(E-mail: wucjzr@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.06.035

R736.1

B

1002-266X(2017)06-0098-03

2016-10-15)