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      IVF中未見原核卵裂胚胎囊胚滋養(yǎng)層細胞的CNV檢測價值研究*

      2017-06-05 14:20:16趙杰陳秀娟劉芳杜琛
      關(guān)鍵詞:滋養(yǎng)層卵裂原核

      趙杰,陳秀娟,劉芳,杜琛

      (內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 生殖中心,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010050)

      臨床報道

      IVF中未見原核卵裂胚胎囊胚滋養(yǎng)層細胞的CNV檢測價值研究*

      趙杰,陳秀娟,劉芳,杜琛

      (內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 生殖中心,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010050)

      目的對常規(guī)體外受精(IVF)中未見原核卵裂胚胎囊胚滋養(yǎng)層細胞>10 MB拷貝數(shù)變異進行分析。方法對IVF受精的未見原核卵裂胚胎囊胚培養(yǎng),利用全基因組測序的方法對D5評級>3BC囊胚的滋養(yǎng)層細胞進行>10MB的拷貝數(shù)變異檢測,判斷未見原核卵裂胚胎囊胚非整倍體變異程度。結(jié)果共選擇未見原核卵裂胚胎69例,形成囊胚51例(73.91%);囊胚評級>3BC者共33例,對其進行滋養(yǎng)層細胞活檢并進行拷貝數(shù)變異檢測,檢測成功23例(70%),其中正常核型(46,XN)17例(73.9%),異常6例(26.1%)。結(jié)論未見原核卵裂胚胎經(jīng)囊胚培養(yǎng)可以獲得較高比例染色體正常胚胎,結(jié)合胚胎植入前遺傳學(xué)診斷及產(chǎn)前診斷技術(shù),未見原核卵裂囊胚具有利用價值。

      未見原核卵裂胚胎;囊胚;拷貝數(shù)變異

      在實施體外受精(in vitro fertilization,IVF)操作過程中,有一部分卵子在受精后17~19 h不能看到原核(primary nucleus,PN),但是卻能夠卵裂,這些胚胎一般情況下被認為是異常胚胎,不用做胚胎移植,本研究將未見原核卵裂胚胎進行囊胚培養(yǎng),并利用測序技術(shù)對發(fā)育到囊胚階段的滋養(yǎng)層細胞進行基因拷貝數(shù)變異(copy number variation detection,CNV)檢測,分析其>10 MB的拷貝數(shù)是否存在異常,探討未見原核卵裂胚胎經(jīng)囊胚培養(yǎng)篩選判斷其是否具有利用價值。

      1 資料與方法

      1.1 患者選擇、促排卵及獲卵

      選取2016年1月-2016年3月在本院生殖中心行常規(guī)IVF助孕治療的患者,共35個周期,患者年齡24~40歲,不孕年限1~10年,原發(fā)不孕20例,繼發(fā)不孕15例。所有患者夫妻雙方染色體檢測為正常,不孕原因為輸卵管因素;患者均采用常規(guī)長方案促排卵,促性腺激素釋放激素激動劑降調(diào)節(jié)后適時啟動Gn,當1個主導(dǎo)卵泡直徑≥18 mm或2個主導(dǎo)卵泡≥17 mm時肌注人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)(上海麗珠制藥有限公司)4000~10 000 u,HCG注射后36~38 h取卵。

      1.2 受精及胚胎選擇

      精液經(jīng)優(yōu)化處理后,在HCG 39~40h進行受精,授精濃度為1.0~1.5萬條活動精子/個卵子。受精后4.5~5.0 h拆卵。加精17~19 h觀察原核情況,未見原核、見極體者作為研究對象,轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基微滴中培養(yǎng)。培養(yǎng)到第3天,對其進行激光打孔,打孔直徑10~20 μm,繼續(xù)體外培養(yǎng)至第5和6天,對發(fā)育到>3BC并有滋養(yǎng)層細胞滲出的囊胚活檢3~10個滋養(yǎng)層細胞,送北京貝瑞和康公司進行CNV檢測。

      2 結(jié)果

      35個周期的患者,年齡24~40歲,平均(30.66± 3.87)歲;不孕年限1~10年,平均(3.99±2.45)年;共獲得卵子587例,平均(16.77±7.27)例;受精474例(80.75%);正常受精304例(51.79%);異常受精170例(28.96%),其中未見原核卵裂胚胎69例,對其進行囊胚培養(yǎng),形成囊胚51例(73.91%);囊胚評級> 3BC者33例,活檢取滋養(yǎng)層細胞進行拷貝數(shù)變異檢測,檢測成功并得到結(jié)果23例,成功率為70%;23例中正常核型(46,XN)17例(73.9%);異常6例(26.1%)。其中1例為21三體(47,XN,+21),1例為復(fù)合型異常,1例 21號染色體缺失 33.8 MB(-21q11.2q22.3,33.8MB),1例在5號染色體重復(fù)(Chr5:90820000-175420000-2.3),1例在 6號、21號染色體上重復(fù)(Chr6:4260000-156860000-2.5;Chr21:15740000-42500000-2.5),1例16三體(47,XN,+16)。見附圖。

      附圖 CNV檢測結(jié)果

      3 討論

      未見原核卵裂胚胎的出現(xiàn)可能是由于卵子發(fā)生孤雌激活、原核形成機制或染色體分裂異常,以及卵子受到刺激使原核出現(xiàn)過早或過晚錯過觀察時間,倘若2個原核出現(xiàn)過早或晚,那么該胚胎仍可能具有正常的核型。NOYES等[1]在對未見原核卵裂胚胎卵裂球核型進行研究,發(fā)現(xiàn)<3%的胚胎具有2倍體核型,所以認為,未見原核卵裂胚胎常存在染色體異常,胚胎質(zhì)量及發(fā)育潛能差,無移植價值[2]。正常受精胚胎在發(fā)育到8細胞之前其發(fā)育主要由卵細胞決定,在胚胎發(fā)生融合之后,胚胎的基因組被激活,并決定胚胎的進一步發(fā)育,所以認為能發(fā)育到囊胚階段的胚胎的染色體異常比例較低[3]。如果通過延長未見原核卵裂胚胎體外培養(yǎng)時間,篩選出囊胚,該胚胎有可能是正常,再通過遺傳學(xué)檢測加以證明,無疑會增加胚胎使用率[4]。本研究對D5發(fā)育到>3BC級的23例未見原核卵裂囊胚行滋養(yǎng)層細胞活檢,并進行拷貝數(shù)變異檢測,發(fā)現(xiàn)在有檢出的胚胎中,17例胚胎的染色體核型是正常的(73.9%),而該比例與2原核受精胚胎接近。

      綜上所述,本研究對于未見原核卵裂胚胎經(jīng)囊胚培養(yǎng),并進行染色體核型及>10 MB拷貝數(shù)變異檢測,發(fā)現(xiàn)其正常核型的比例較高,但是否將該方法作為一種常規(guī)方式,還需要大樣本的研究,但如果結(jié)合胚胎植入前遺傳學(xué)診斷技術(shù),從囊胚中篩選出正常核型的胚胎,進行移植,在妊娠后,利用產(chǎn)前篩查技術(shù)及早判斷妊娠胎兒是否異常,避免出生缺陷,是一種切實可行的方法[5]。

      [1]NOYES N,FINO ME,KREY L,et al.Embryo biopsyl:the fate of abnormal pronuclear embryos[J].Reprod Biomed Online,2008, 17(6):782-788.

      [2]REICHMAN D E,JACKSON K V,RACOWSKY C.Incidence and development of zygotes exhibiting abnormal pronuclear disposition afteridentification oftwopronucleiatthefertilization check[J].Fertil Steril,2010,94(3):965-970.

      [3]GARDER D K,BALABAN B.Choosing between day 3 and day 5 transfers[J].Clin Obstet Gynecol,2006,49(1):85-92.

      [4]馬水英,李梅,李城,等.體外受精周期中不同原核數(shù)發(fā)育囊胚使用價值的探討[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展,2014,23(6):452-454.

      [5]戴善軍.體外受精-胚胎移植周期中胚胎染色體非整倍體分析及移植價值探討[D].鄭州:鄭州大學(xué),2007:26.

      (李科 編輯)

      R711.6

      B

      10.3969/j.issn.1005-8982.2017.09.031

      1005-8982(2017)09-0141-02

      2016-09-29

      內(nèi)蒙古自然科學(xué)基金(No:2015BS0802);內(nèi)蒙古教育廳基金(No:NJZY16118);內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)科技百萬工程(No:YKD2014KJ BW007、YKD2015KJBW023)

      陳秀娟,E-mail:90098687@sina.com

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