新鄉(xiāng)市某羊場(chǎng)球蟲(chóng)感染情況調(diào)查及藥物治療試驗(yàn)

陳金山 朱惠麗 王憲文 劉俊偉 李金輝 李英 杜少甫

摘要[目的]了解新鄉(xiāng)地區(qū)規(guī)?；驁?chǎng)球蟲(chóng)感染情況。[方法]采用糞便壓片法、飽和鹽水漂浮法和卵囊培養(yǎng)法對(duì)新鄉(xiāng)市某羊場(chǎng)的球蟲(chóng)感染情況進(jìn)行調(diào)查和鑒定，并開(kāi)展了幾種寄生蟲(chóng)藥物的治療試驗(yàn)。[結(jié)果]該羊場(chǎng)球蟲(chóng)感染率為25%，其中夏季的感染率最高，且1～3月齡的羔羊感染最嚴(yán)重。形態(tài)學(xué)分析表明，該場(chǎng)羊群體內(nèi)存在2種球蟲(chóng)，分別為錯(cuò)亂艾美耳球蟲(chóng)和和雅氏艾美耳球蟲(chóng)。藥物治療試驗(yàn)結(jié)果表明，磺胺喹噁啉片對(duì)艾美耳球蟲(chóng)的防治有良好效果，其價(jià)格便宜，用藥方便。[結(jié)論]研究結(jié)果可為規(guī)?；驁?chǎng)寄生蟲(chóng)的防治工作提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐。

關(guān)鍵詞羊場(chǎng)；球蟲(chóng)感染；防治；新鄉(xiāng)市

中圖分類(lèi)號(hào)S852.72文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2017）21-0113-02

Investigation on the Infection of Coccidian and Its Drug Treatment Experiment in a Sheep Farm in Xinxiang City

CHEN Jinshan1 ， ZHU Huili1 ， WANG Xianwen1， LI Ying2* et al

（1.College of Animal Science and Veterinary Medicine， Henan Institute of Science and Technology， Xinxiang，Henan 453003；2.College of Agriculture and Animal Husbandry of Qinghai University， Xining，Qinghai 810016）

Abstract[Objective]To understand the infection conditions of coccidian of largescale sheep farms in Xinxiang City. [Method]The infection conditions of coccidian in a sheep farm in Xinxiang City were investigated and identified by fecal compression method，the method of saturated solution floating and method of oocysts cultivating， and treatment experiment of several kinds of parasite drugs was carried out in the farm. [Result]The overall prevalence of coccidial infection in the farm was 25%， the infection rate of sheep in summer was the highest， and the infection of 1-3 monthold lamb was the most serious. Two species of Eimeria were identified in the body of sheep by morphological analysis. They were E. intricata and E. ninakohlyakimovae respectively. The results of medicine treatment trial showed that sulfaquinoxaline had a good effect in treatment of Eimeria， and it was cheaper and more convenient in use. [Conclusion]The research results can provide theoretical basis and technical support for the prevention and control of parasites in the farms.

Key wordsSheep farm；Coccidial infection；Prevention and control；Xinxiang City

羊球蟲(chóng)病是由原生動(dòng)物門(mén)的球蟲(chóng)寄生于綿羊或山羊腸道引起的以下痢、消瘦、貧血為主要癥狀的寄生性原蟲(chóng)病[1]。該病對(duì)羔羊的危害尤為嚴(yán)重，可使其生長(zhǎng)發(fā)育停滯，青年羊和成年羊通常為帶蟲(chóng)者，羊患病后沒(méi)有明顯的臨床癥狀，但一般呈慢性消耗性通過(guò)，導(dǎo)致飼料轉(zhuǎn)化率降低，畜產(chǎn)品質(zhì)量下降，從而影響?zhàn)B羊業(yè)的發(fā)展。為了解新鄉(xiāng)地區(qū)規(guī)?；驁?chǎng)球蟲(chóng)的感染情況，制訂有效的防治方案，筆者于2016年1—12月對(duì)新鄉(xiāng)市某規(guī)模化羊場(chǎng)進(jìn)行球蟲(chóng)感染情況調(diào)查與鑒定，并進(jìn)行藥物治療試驗(yàn)，旨在為規(guī)?；驁?chǎng)寄生蟲(chóng)的防治工作提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1羊場(chǎng)飼養(yǎng)管理。

該羊場(chǎng)存欄量870只，平時(shí)以人工圈養(yǎng)為主，每年普防羊三聯(lián)四防、羊痘、口蹄疫等疫苗。該羊場(chǎng)實(shí)行嚴(yán)格的防疫制度，非工作人員進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)前，必須通過(guò)紫外線消毒通道，車(chē)輛進(jìn)出要經(jīng)過(guò)消毒池。該羊場(chǎng)對(duì)寄生蟲(chóng)的防治工作采取以下措施：每年春秋兩季各進(jìn)行1次計(jì)劃性驅(qū)蟲(chóng)，發(fā)現(xiàn)羊只患有寄生蟲(chóng)病時(shí)，對(duì)該羊只依據(jù)具體情況單獨(dú)用藥。

1.1.2樣品的采集與保存。

在一年四季采集不同年齡段羊群（1～3月齡、6～12月齡和12月齡以上）的新鮮糞便20～30 g，分別裝入潔凈的封口袋內(nèi)，標(biāo)上年齡、性別、耳號(hào)及臨床情況，帶回實(shí)驗(yàn)室置于4 ℃冰箱中保存待檢。

1.1.3主要試劑與儀器。

食鹽購(gòu)自河南制鹽有限責(zé)任公司；重鉻酸鉀購(gòu)自天津市福晨化學(xué)試劑廠；鹽酸丙硫咪唑片，200 mg/片，購(gòu)自龍暉藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為H23021888；鹽酸氯苯胍片，購(gòu)自重慶桂花獸藥有限公司，批號(hào)為20151006；磺胺喹噁啉片，購(gòu)自青州奧星化工有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為20150514179；數(shù)碼顯微鏡（麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司）；電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)DHP-9162）。

1.2方法

采取糞便壓片法和飽和鹽水漂浮法相結(jié)合的方法檢查糞便樣品中的球蟲(chóng)卵囊，計(jì)算感染率；采用斯陶爾計(jì)數(shù)法測(cè)定每克糞便中球蟲(chóng)卵囊數(shù)（OPG），計(jì)算感染強(qiáng)度。

1.2.1糞便壓片法。

首先在載玻片上加自來(lái)水1滴，然后再用鑷子取糞便少許，并與載玻片上的自來(lái)水混合均勻，用鑷子將大塊的糞渣去掉，蓋上蓋玻片輕壓，用吸水紙吸取多余水分，置于400倍光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。

1.2.2飽和鹽水漂浮法。

取保存在4 ℃冰箱中的糞樣，用分析天平稱(chēng)取2 g糞便，放入50 mL燒杯中，加入30 mL飽和食鹽水，振蕩，使糞便充分溶解，用糞篩將糞液篩入另一個(gè)50 mL燒杯中，靜置漂浮約20 min后，用銅環(huán)蘸取浮膜，抖落在載玻片，蓋上蓋玻片，置于400倍光學(xué)顯微鏡下觀察，并測(cè)量球蟲(chóng)卵囊的大小。

1.2.3斯陶爾計(jì)數(shù)法。

斯陶爾計(jì)數(shù)法參考文獻(xiàn)[2]，在顯微鏡下進(jìn)行蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)，所得球蟲(chóng)卵囊總數(shù)乘以100，即為每克糞便中的球蟲(chóng)卵囊數(shù)。為減小試驗(yàn)誤差，在同一天同一時(shí)間段對(duì)采集樣品進(jìn)行了3次重復(fù)試驗(yàn)。

1.2.4卵囊的收集與培養(yǎng)。

將陽(yáng)性糞樣采用飽和鹽水漂浮法收集卵囊，加入2.5%重鉻酸鉀溶液混勻，在26～28 ℃恒溫箱中培養(yǎng)至卵囊孢子化，孢子化程度達(dá)到85%以上，并在數(shù)碼顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)觀察。

1.2.5卵囊種類(lèi)鑒定。

觀察卵囊大小、顏色和形態(tài)結(jié)構(gòu)，用顯微鏡圖像分析處理系統(tǒng)進(jìn)行拍照，測(cè)量50個(gè)孢子化卵囊大小，采用斯陶爾計(jì)數(shù)法對(duì)陽(yáng)性糞樣進(jìn)行計(jì)數(shù)。用裝有測(cè)微尺的顯微鏡先觀察卵囊形態(tài)、大小、極帽、卵膜孔和外殘?bào)w的有無(wú)、孢子囊大小、內(nèi)殘?bào)w和斯氏體的有無(wú)等，再測(cè)量卵囊長(zhǎng)和寬，與文獻(xiàn)[3]所述的卵囊大小進(jìn)行比較，判斷卵囊類(lèi)別。

1.2.6藥物治療試驗(yàn)。

隨機(jī)抽取經(jīng)糞便檢查有球蟲(chóng)卵囊自然感染的不同年齡羊40只，分為4組，每組10只，分飼于4個(gè)圈舍中。其中1組為空白對(duì)照組（Ⅰ），另外3組（Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）分別使用鹽酸丙硫咪唑片、鹽酸氯苯胍片和磺胺喹噁啉片進(jìn)行治療。用藥方法如下：①鹽酸丙硫咪唑片，0.33～1.00 mg/kg體重，口服每日1次，連服5 d。②鹽酸氯苯胍片，20 mg/kg體重，口服每日1次，連用5 d。③磺胺喹噁啉片，100 mg/kg體重，每日1次，連用5 d。④空白對(duì)照組不予用藥，自由飲用口服補(bǔ)液鹽。治療組喂藥期間自由飲用口服補(bǔ)液鹽。

投藥后從第2天開(kāi)始每天直腸取糞便帶回實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行蟲(chóng)體檢測(cè)，同時(shí)觀察各試驗(yàn)組羊的精神、食欲、飲水、糞便等情況及臨床表現(xiàn)，并做好記錄。

1.2.7療效判定。

根據(jù)用藥前后羊只卵囊轉(zhuǎn)陰率，來(lái)判定驅(qū)蟲(chóng)效果。按照以下公式計(jì)算卵囊轉(zhuǎn)陰率：

卵囊轉(zhuǎn)陰率=[（驅(qū)蟲(chóng)前動(dòng)物感染數(shù)-驅(qū)蟲(chóng)后動(dòng)物感染數(shù)）/驅(qū)蟲(chóng)前動(dòng)物感染數(shù)]×100%。

2結(jié)果與分析

2.1羊場(chǎng)球蟲(chóng)感染狀況

由表1可知，在4個(gè)季節(jié)共采集480份糞樣，檢出陽(yáng)性樣品120份，總體感染率為25%。其中，夏季感染率最高，為41.7%；冬季感染率最低，為6.7%。此外，飼養(yǎng)環(huán)境和場(chǎng)內(nèi)是否定期驅(qū)蟲(chóng)對(duì)球蟲(chóng)在羊場(chǎng)的蔓延流行起著至關(guān)重要作用，在缺乏良好飼養(yǎng)管理的情況下球蟲(chóng)感染率為62.5%（75/120）；當(dāng)沒(méi)有進(jìn)行定期驅(qū)蟲(chóng)時(shí)，球蟲(chóng)感染率則高達(dá)80%（96/120）。

由表2可知，全年采集的480份羊糞便樣品，包括1～3月齡羊樣品120份、6～12月齡羊樣品120份和12月齡以上的羊樣品240份。陽(yáng)性樣品共120份，總感染率為25%，其中感染率最高的是1～3月齡的羔羊，為75%，而12月齡以上的羊感染率僅為5%。1～3月齡、6～12月齡、12月齡以上3個(gè)年齡段羊感染卵囊的平均OPG值分別為4 286、1 883和500個(gè)/g。

2.2場(chǎng)球蟲(chóng)感染種類(lèi)及形態(tài)特征

經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定，該羊場(chǎng)感染2種球蟲(chóng)，分別為錯(cuò)亂艾美爾球蟲(chóng)（Eimeria intricate）和雅氏艾美耳球蟲(chóng)（Eimeria ninakohlyakimovae）。

錯(cuò)亂艾美爾球蟲(chóng)（E.intricate）卵囊的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征如下：大型卵囊，呈橢圓形或稍呈卵圓形，黃褐色，平均大小為33.7 μm×24.1 μm，平均形狀指數(shù)1.4；卵囊壁2層，呈黃褐色，內(nèi)層褐色，卵膜孔極帽明顯；孢子囊呈長(zhǎng)卵圓形，平均大小為12.469 μm×7.895 μm，平均形狀指數(shù)1.6；無(wú)外殘?bào)w，有內(nèi)殘?bào)w，極粒多，斯氏體不顯著；子孢子呈豆莢狀，頭尾相鄰并

列于孢子囊內(nèi)，含有2個(gè)折光球；孢子化時(shí)間為84～120 h。

雅氏艾美耳球蟲(chóng)（E.ninakohlyakimovae）卵囊的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征如下：卵囊呈橢圓形或亞球形，平均大小為24.9 μm×20.4 μm，形狀指數(shù)1.2；黃褐色，無(wú)極帽，卵膜孔不明顯，孢子囊呈卵圓形，平均大小為139 μm×7.6 μm，平均形狀指數(shù)1.6；內(nèi)殘?bào)w由顆粒狀物組成，多個(gè)極粒，有斯氏體，孢子化時(shí)間為57 h。

2.3藥物治療試驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)糞便卵囊檢查，藥物驅(qū)蟲(chóng)試驗(yàn)羊投藥前Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅰ組球蟲(chóng)感染率分別為85%（17/20）、80%（16/20）、90%（18/20）和85%（17/20）。使用3種藥物驅(qū)蟲(chóng)后，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組球蟲(chóng)卵囊轉(zhuǎn)陰率分別為5.88%、12.50%和8889%，其中磺胺喹噁啉試驗(yàn)組的卵囊轉(zhuǎn)陰率最高，為8889%，藥物使用前后各組羊感染情況變化見(jiàn)表3。

通過(guò)臨床觀察發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組羊病羊經(jīng)過(guò)試驗(yàn)藥物驅(qū)蟲(chóng)后，精神有所好轉(zhuǎn)?；前粪瓏f啉試驗(yàn)組羊只體溫趨于正常，采食量增加，無(wú)腹瀉現(xiàn)象，且皮毛光亮，驅(qū)蟲(chóng)前后羊只狀態(tài)差異顯著。

3討論

糞便直接壓片法是檢查羊球蟲(chóng)病簡(jiǎn)單快捷的方法，可將其作為羊場(chǎng)日常球蟲(chóng)檢測(cè)方法，由于其檢出率相對(duì)較低，對(duì)于輕度或隱性感染的病羊容易漏診。飽和鹽水漂浮法通過(guò)比重大的飽和鹽水濃集卵囊，可提高檢出率。通過(guò)斯陶爾計(jì)數(shù)法計(jì)算出羊群的感染強(qiáng)度，為畜群用藥治療提供理論依據(jù)。

從羊場(chǎng)的球蟲(chóng)感染率來(lái)看，該羊場(chǎng)羊只感染存在季節(jié)差異性，夏季感染率最高，冬季最低。這是由于球蟲(chóng)感染多流行于溫暖濕潤(rùn)的季節(jié)。夏季氣候以濕熱為主，便于球蟲(chóng)卵囊發(fā)育到感染階段而大量感染，加上舍飼羊群活動(dòng)范圍小，飼養(yǎng)密度大，較為擁擠，環(huán)境潮濕，有利于球蟲(chóng)的傳播和感染。

該試驗(yàn)結(jié)果表明，該羊場(chǎng)1月齡羔羊的感染率為75%，而12月齡以上的羊感染率降至5%，呈現(xiàn)幼齡羔羊的感染率最高，隨年齡的增長(zhǎng)呈遞減的趨勢(shì)。這與前人研究報(bào)道[4-7]相一致，由于羔羊尚未建立較為完善的免疫應(yīng)答機(jī)制，所以羔羊易感且呈高強(qiáng)度感染。隨著年齡的增長(zhǎng)，機(jī)體發(fā)育逐漸完善，經(jīng)多次啟動(dòng)細(xì)胞和體液免疫來(lái)抵抗球蟲(chóng)的侵襲，在生產(chǎn)實(shí)際中應(yīng)重點(diǎn)加強(qiáng)對(duì)羔羊球蟲(chóng)病的防治。

磺胺喹噁啉為磺胺類(lèi)廣譜抗球蟲(chóng)藥，具有高效、低毒的特點(diǎn)，是目前用藥濃度最低的一種抗球蟲(chóng)藥。該藥物藥效期短，必須連續(xù)用藥，以防止球蟲(chóng)病的再度暴發(fā)，由于用藥濃度極低，長(zhǎng)期用藥可能出現(xiàn)耐藥性，不宜長(zhǎng)期使用，可結(jié)合其他抗球蟲(chóng)藥，如氨丙啉配伍使用。探討磺胺喹噁啉的用藥程序和方法或研發(fā)療效更為持久的抗球蟲(chóng)藥，仍是今后研究的方向。

此次試驗(yàn)由于現(xiàn)場(chǎng)條件所限，僅從觀察羊只治療前后的臨床狀況和卵囊轉(zhuǎn)陰率來(lái)評(píng)價(jià)藥物的效果，因此存在一定的局限性。在進(jìn)行抗球蟲(chóng)藥的療效評(píng)價(jià)時(shí)，若能結(jié)合糞便記分、病變記分及病變值、OPG、卵囊比較、卵囊值、抗球蟲(chóng)指數(shù)（ACI）等指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，可能會(huì)更科學(xué)可靠地反映藥物的療效[8-9]。因此，在今后的工作中有必要做進(jìn)一步研究。

4結(jié)論

通過(guò)此次調(diào)查了解到新鄉(xiāng)地區(qū)某規(guī)模化羊場(chǎng)的球蟲(chóng)感染率為25%，其中夏季的感染率最高，且1～3月齡的羔羊感染率最高；磺胺喹噁啉片對(duì)于防治艾美耳球蟲(chóng)具有良好的效果，可為規(guī)?；驁?chǎng)寄生蟲(chóng)的防治工作提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐。

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