通迪膠囊的長期毒性研究

鄭東森++季暉++胡慶華

【摘 要】 目的：觀察通迪膠囊對(duì)SD大鼠的長期毒性作用，為臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。方法：將120只SD大鼠分成4組，通迪膠囊高劑量組、中劑量組、低劑量組和陰性對(duì)照組，連續(xù)給藥26周，恢復(fù)4周，每周記錄攝食量和體重，分別于第13周、26周和恢復(fù)4周后處死三分之一大鼠，檢測血液學(xué)、血液生化學(xué)指標(biāo)，系統(tǒng)尸解并計(jì)算臟器系數(shù)，對(duì)重要臟器做病理組織學(xué)檢查。結(jié)果：通迪膠囊各劑量組與對(duì)照組比較，攝食量、體重和臟器系數(shù)未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），血液學(xué)、血液生化指標(biāo)和病理組織學(xué)檢查未見與通迪膠囊相關(guān)異常，恢復(fù)期未見遲發(fā)性毒性。結(jié)論：實(shí)驗(yàn)設(shè)置的最低劑量為臨床劑量的15.5倍，故該藥在臨床劑量下長期使用毒性低，安全性良好。

【關(guān)鍵詞】 通迪膠囊；長期毒性；SD大鼠

【中圖分類號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2017）09-0040-06

Long-term Toxicity Study of Tongdi Capsule

ZHENG Dongsen JI Hui HU Qinghua*

China Pharmaceutical University， Nanjing 210009， China

Abstract：Objective To study the long-term toxicity of tongdi capsule in SD rats and provide a reference for clinical application. Methods 120 SD rats were randomly divided into four groups： high dose group， middle dose group， low-dose group and negative control group. All rats were administrated for 26 weeks and then recovered for 4 weeks， recorded food intake and body weight weekly. 1/3 rats were killed after 13 weeks， 26 weeks and the remaining recovered for 4 weeks. The hematological and biochemical parameters， organ coefficient and histopathology of major organs were measured. Results There was no significant influence of tongdi capsule on food intake， body weight，histopathology，organ coefficient， hematological and biochemical parameters（P>0.05）.Conclusion The lowest dose set by the experiments is 15.5 times of clinical dose，therefore the tongdi capsule is safe in clinical use.

Keywords：Tongdi Capsule；Long-Term Toxicity；SD Rats

通迪膠囊由三七、紫金蓮、延胡索、七葉蓮、細(xì)辛、雞屎藤六味中藥組成，主要包含人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、細(xì)辛酯素、白花丹醌等活性成分[1]，具有活血行氣，散瘀止痛的功效，臨床用于治療癌痛、術(shù)后疼痛、跌打傷痛、肩頸痹痛、頭痛、痛經(jīng)等[2]，已取得了良好療效。為進(jìn)一步證明該藥在臨床上長期應(yīng)用安全無毒副作用，故進(jìn)行大鼠連續(xù)重復(fù)進(jìn)口給藥長期毒性實(shí)驗(yàn)，觀察是否會(huì)由于藥物蓄積而對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒性反應(yīng)及其嚴(yán)重程度，確定無毒性反應(yīng)劑量，為臨床安全用藥提供參考。

1 儀器與材料

1.1 藥物 通迪膠囊（半成品，批號(hào)：20160211，貴州景誠藥業(yè)）。本實(shí)驗(yàn)室常溫密閉保存，臨用時(shí)用蒸餾水溶解并稀釋為所需質(zhì)量濃度混懸液。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠120只，6周齡，體重100～120g，雌雄各半，由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)合格證號(hào)：2008001658379。于恒溫恒濕動(dòng)物房雌雄分籠飼養(yǎng)，每籠5只。室溫：22～26℃，相對(duì)濕度：60%～70%，12h交替光照，標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲水，籠具每天清洗消毒1次，通風(fēng)良好，室內(nèi)配有空調(diào)。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物在動(dòng)物房內(nèi)適應(yīng)性喂養(yǎng)7d。

1.3 儀器 邁瑞B(yǎng)C-5800全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；貝克曼庫爾特AU5800全自動(dòng)生化分析儀（日本Beckman Coulter K.K.）；徠卡ASP 200s全封閉式組織脫水機(jī)（德國Leica）；徠卡EG1140半自動(dòng)包埋機(jī)（德國Leica）；徠卡RM2245半自動(dòng)輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)（德國Leica）；徠卡ST4040半自動(dòng)染色機(jī)（德國Leica）；奧林巴斯DP72-BX45病理顯微成像系統(tǒng)（日本Olympus）。

2 方法

2.1 劑量分組 將適應(yīng)性喂養(yǎng)后的大鼠，隨機(jī)分為四組，每組30只，雌雄各半，分別為通迪膠囊高劑量組、中劑量組、低劑量組和陰性對(duì)照組。

2.2 給藥方法及周期 灌胃給藥，每周6d，每天1次。高劑量組給藥劑量為2.8g/kg（相當(dāng)于成人臨床用量62倍），中劑量組為1.4g/kg（相當(dāng)于成人臨床用量31倍），低劑量組為0.7g/kg（相當(dāng)于成人臨床用量15.5倍），各劑量組給予等體積、不等濃度的通迪膠囊溶液，對(duì)照組給予等體積溶劑（蒸餾水）。給藥周期為26周，停藥后再觀察4周。

2.3 觀察指標(biāo) 一般觀察包括動(dòng)物外觀體征、行為活動(dòng)、腺體分泌、呼吸、糞便等，攝食量和體重每周稱量記錄1次。給藥中期13周時(shí)每組處死雌雄各5只，給藥26周結(jié)束時(shí)每組處死雌雄各5只，停藥4周后再處死每組剩下的雌雄各5只。計(jì)算臟器系數(shù)，檢測血液學(xué)、血液生化學(xué)指標(biāo)以及系統(tǒng)尸解和病理組織學(xué)檢查。

2.4 數(shù)據(jù)處理 采用Microsoft Excel和GraphPad Prism進(jìn)行數(shù)據(jù)處理檢驗(yàn)，計(jì)算均值（x）及標(biāo)準(zhǔn)差（s），各劑量組與對(duì)照組比較，進(jìn)行One Way ANOVA檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 一般狀況 在26周給藥過程及恢復(fù)期間，大鼠精神狀態(tài)、反應(yīng)，行為活動(dòng)，排便情況、口、眼及孔道分泌物、毛色，清潔度等日常觀察指標(biāo)均未見異常。

3.2 體重增長的影響 對(duì)大鼠每周體重進(jìn)行1次統(tǒng)計(jì)，各組大鼠體重增長情況良好。各給藥組與陰性對(duì)照組之間并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），體重增長呈線性增加。

3.3 攝食量的影響 對(duì)各組大鼠攝食量每周進(jìn)行一次統(tǒng)計(jì)，各組與陰性對(duì)照組相比未見明顯異常。

3.4 臟器及其系數(shù)的影響 給藥組大鼠給藥13周、26周及恢復(fù)期后心、肝、肺、腎、腦、脾、胸腺、前列腺、睪丸、子宮、卵巢等臟器系數(shù)與對(duì)照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明通迪膠囊連續(xù)長期給藥后對(duì)大鼠各臟器無明顯毒性影響。

3.5 血液學(xué)指標(biāo)的影響 給藥組大鼠在給藥期和恢復(fù)期后，其白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（LYM）、單核細(xì)胞計(jì)數(shù)（Mon）、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)（Eos）、嗜堿性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)（Bas）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）、凝血時(shí)間（CT）等主要血常規(guī)指標(biāo)與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。給藥26周后，高劑量組中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)（Neu%）與陰性對(duì)照組相比存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），13周及恢復(fù)期后Neu%與對(duì)照組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3.6 生化指標(biāo)的影響 給藥組大鼠在給藥期和恢復(fù)期，其總膽紅素（TBIL）、總蛋白（TP）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素氮（Urea）、肌酐（Cr）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、A/G等主要血液生化指標(biāo)與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。給藥13周及恢復(fù)期后，各劑量組天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（AST）與對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。給藥26周后，高劑量組AST與對(duì)照組相比存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。

3.7 對(duì)臟器病理組織學(xué)的影響 給藥13周后，少數(shù)大鼠個(gè)別臟器出現(xiàn)下列病變：①高劑量2只大鼠肝細(xì)胞輕微空泡變和小葉炎癥；4只大鼠有輕度間質(zhì)性肺炎；3只大鼠結(jié)腸粘膜輕微或輕度變性壞死，炎細(xì)胞浸潤。②對(duì)照組3只大鼠肝細(xì)胞輕微空泡變，4只大鼠輕度間質(zhì)性肺炎；2只腎臟間質(zhì)見極少量炎細(xì)胞浸潤。給藥26周后，少數(shù)大鼠個(gè)別臟器出現(xiàn)下列病變：①高劑量1只大鼠周圍肺組織間質(zhì)出血，充血。5只大鼠有輕度間質(zhì)性肺炎；5只大鼠小腸粘膜輕微或輕度變性壞死，炎細(xì)胞浸潤。②對(duì)照組5只大鼠輕度間質(zhì)性肺炎；5只大鼠輕度小腸粘膜糜爛?；謴?fù)期后，少數(shù)大鼠個(gè)別臟器出現(xiàn)下列病變：①高劑量1只大鼠周圍肺組織間質(zhì)出血，充血。4只大鼠有輕度間質(zhì)性肺炎；5只大鼠小腸粘膜輕微或輕度變性壞死。②對(duì)照組5只大鼠輕度間質(zhì)性肺炎；5只大鼠輕度小腸粘膜糜爛。上述肺組織及腸黏膜病變高劑量及對(duì)照組均出現(xiàn)，無劑量相關(guān)性，肺組織病變屬于動(dòng)物自發(fā)性病變[9]。腸黏膜病變可能為標(biāo)本固定不當(dāng)所致。其他病變例數(shù)少。其余受檢臟器實(shí)質(zhì)細(xì)胞無變性壞死，間質(zhì)無炎癥等毒性病理變化。

4 討論

通迪膠囊臨床推薦成人日用量為6粒，用于治療經(jīng)絡(luò)阻滯所致的癌癥疼痛，術(shù)后疼痛，跌打傷痛，肩頸痹痛以及胃脘疼痛，頭痛，痛經(jīng)等[2]，目前關(guān)于通迪膠囊的報(bào)道主要為臨床觀察與含量測定，未見其安全性評(píng)價(jià)的相關(guān)報(bào)道，由于缺乏毒性研究且臨床研究不會(huì)服用過量藥物，本實(shí)驗(yàn)對(duì)其長期毒性進(jìn)行評(píng)價(jià)，為臨床安全用藥提供參考。

參照《藥物重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》，以0.7、1.4、2.8g/kg的劑量，相當(dāng)于成人臨床用量62、3、15.5倍，給藥體積為10 mL/kg。灌胃給藥6個(gè)月，停藥1個(gè)月。研究結(jié)果顯示，通迪膠囊各劑量組大鼠與對(duì)照組相比，一般行為活動(dòng)、攝食量、體重和臟器系數(shù)等均無顯著性差異，未出現(xiàn)動(dòng)物死亡及毒性相關(guān)現(xiàn)象。給藥13周及恢復(fù)期后血常規(guī)與血液生化學(xué)結(jié)果未見顯著差異。給藥26周后，血常規(guī)指標(biāo)僅見高劑量組中性粒細(xì)胞（Neu%）高于對(duì)照組，（P<0.05），該差異僅限于單一劑量組，且在給藥初期及恢復(fù)期并未見明顯異常。差異變化幅度較小，無明顯劑量相關(guān)性，均值在正常值參考范圍內(nèi)[3]，可能為個(gè)體感染及炎性細(xì)胞浸潤所致，與藥物毒性無明顯相關(guān)[4-6]。血液生化指標(biāo)僅見高劑量組AST高于對(duì)照組（P<0.05），上述差異僅見于單一時(shí)期，單一對(duì)照組，其他組別并無顯著性差異，差異幅度較小，無明顯劑量相關(guān)性，均值在正常范圍內(nèi)[7-8]，且在查看相關(guān)肝臟組織病理切片后并未發(fā)現(xiàn)任何肝組織病變，故考慮為動(dòng)物個(gè)體原因所致，與通迪膠囊毒性作用無關(guān)。病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示，鼠肺組織發(fā)生輕度病變，但高劑量和對(duì)照組均出現(xiàn)，且其病變例數(shù)較少，無劑量相關(guān)性，屬于動(dòng)物自發(fā)性病變[9-10]。其余受檢臟器實(shí)質(zhì)細(xì)胞無變性壞死，間質(zhì)無炎癥等毒性病理變化。

綜上所述，通迪膠囊對(duì)SD大鼠長期給藥無明顯毒性作用，其安全性良好，表明臨床使用劑量并不會(huì)對(duì)人體一般狀況、飲食、體重、血液及各主要組織臟器的生長發(fā)育及組織形態(tài)方面產(chǎn)生影響。

參考文獻(xiàn)

[1]許亞玲， 周蘭， 羅曼，等. 通迪膠囊中細(xì)辛脂素含量的高效液相色譜測定[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥. 2011； 22（10）：2458-2459.

[2]王運(yùn)濤. 通迪膠囊治療骨科急慢性疼痛療效觀察[J]. 湖北中醫(yī)雜志， 2012， 34（3）：11-12.

[3]蔣中仁， 徐薇， 金偉，等. SD大鼠血液學(xué)指標(biāo)、血生化指標(biāo)及臟體比正常值范圍探討[J]. 預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志， 2011， 27（10）：789-791.

[4]王蕊， 溫賢濤， 王輝，等. SD大鼠血常規(guī)參考值區(qū)間建立[J]. 醫(yī)療裝備， 2015（7）：11-15.

[5]劉科亮， 王林， 王睿，等. SD大鼠血常規(guī)指標(biāo)正常參考值范圍的探討[C]// 中國西部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)術(shù)年會(huì). 2009.

[6]林健， 鄭麗紅， 張榮標(biāo)，等. 大鼠血常規(guī)正常參考值范圍及評(píng)價(jià)方法的探討[J]. 海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志， 2007， 13（4）：57-58.

[7]李罡， 劉建勛， 葛爭艷. 清潔級(jí)SD大鼠血液學(xué)指標(biāo)及生化指標(biāo)正常值的大樣本分析[J]. 中藥藥理與臨床， 2009（2）：128-131.

[8]王茵， 樓正清， 來偉旗，等. SD大鼠血液生化指標(biāo)正常參考值范圍的探討[J]. 毒理學(xué)雜志， 2000， 14（2）：112-113.

[9]陳科. 探討實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自發(fā)性病變與藥物毒性病變的區(qū)別及意義[J]. 醫(yī)藥， 2015（11）：1-2.

[10]王三瓊， 陳薩， 覃芝，等. 80只空白對(duì)照組SD大鼠自發(fā)性病變病理分析[C]// 中國西部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)術(shù)年會(huì). 2009.

（收稿日期：2017-3-10 編輯：梁志慶）