牛曉藝翁昌龍封 林張榆敏鄭 歡羅紅秀

(1.重慶市綦江區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,重慶 401420; 2.重慶市綦江區(qū)畜牧水產(chǎn)站,重慶 401420)

羊布魯氏菌病4種血清學(xué)檢測(cè)方法的比較研究

牛曉藝1翁昌龍2封 林1張榆敏1鄭 歡1羅紅秀1

(1.重慶市綦江區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,重慶 401420; 2.重慶市綦江區(qū)畜牧水產(chǎn)站,重慶 401420)

[目的]為布魯氏菌病防控和凈化選擇可靠的血清學(xué)檢測(cè)方法提供參考。[方法]本研究通過(guò)采用RBT、SAT、ELISA和CFT等4種方法對(duì)采自綦江區(qū)的500份山羊血清進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算和比較4種不同方法的假陽(yáng)性率、假陰性率、敏感性、特異性和一致率。[結(jié)果]4種方法的一致率較好，均大于88.00%。以ELISA結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，RBT敏感性最高但特異性最低，CFT特異性最高，敏感性低于RBT但高于SAT；SAT的敏感性最低，特異性高于RBT但低于CFT。[結(jié)論]實(shí)際檢測(cè)中采用幾種方法配合的方式更加高效，可采取RBT進(jìn)行篩選試驗(yàn)，而ELISA或CFT作為確診的方法。

羊布魯氏菌病 ELISA SAT RBT CFT 血清學(xué)檢測(cè)

目前布病的檢測(cè)手段很多，常用的血清學(xué)檢測(cè)方法主要有虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）、試管凝集試驗(yàn)（SAT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）以及補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）等[6]。本試驗(yàn)將采用RBT、SAT、ELISA和CFT等4種方法對(duì)采自綦江區(qū)某3個(gè)山羊規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)戶的共計(jì)500份羊血清進(jìn)行布魯氏菌病的檢測(cè)，比對(duì)和評(píng)估不同檢測(cè)方法，為日后布病凈化過(guò)程中血清學(xué)檢測(cè)方法的選擇提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 血清樣品。羊血清樣品，采自綦江區(qū)有布病感染情況的某3個(gè)山羊規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)戶的共計(jì)500份羊血清，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 試劑。布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原（青島易邦生物工程有限公司，批號(hào)：20160604）；布氏桿菌虎紅平板凝集試驗(yàn)陽(yáng)性血清（青島易邦生物工程有限公司，批號(hào)：20160402）；羊布魯氏菌病ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（南京森貝伽生物科技有限公司，批號(hào)：201605）；布魯氏菌試管凝集抗原（中國(guó)獸藥監(jiān)察所，批號(hào)：201603）；布魯氏菌補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)抗原（美國(guó)IDEXX公司，批號(hào)：P00120）；標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清（美國(guó)IDEXX公司，批號(hào)：P00130）；標(biāo)準(zhǔn)陰性血清（美國(guó)IDEXX公司，批號(hào)：P00131）；補(bǔ)體（鄭州百基生物科技有限公司，批號(hào)：S0001）；溶血素（鄭州百基生物科技有限公司，批號(hào)：A0001）；綿羊紅細(xì)胞（鄭州百基生物科技有限公司，批號(hào)：C0001）。

1.1.3 儀器。生化培養(yǎng)箱（哈爾濱東聯(lián)電子，型號(hào)：HPS-250）；酶標(biāo)儀（北京普朗，型號(hào)：DNM-9602）；全自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)（北京普朗，型號(hào)：DNM-9620）；單、多道移液器（eppendorf）等。

1.2 試驗(yàn)方法

虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）和試管凝集試驗(yàn)（SAT）的檢測(cè)和判定按照《動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)》（GB/T 18646-2002）進(jìn)行；羊布魯氏菌病ELISA抗體檢測(cè)試驗(yàn)按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作和判定。

2 結(jié)果

根據(jù)《布氏桿菌病防治技術(shù)規(guī)范》的規(guī)定，RBT陽(yáng)性但SAT陰性的血清應(yīng)在30天之后再次采樣檢測(cè)，若再次采樣檢測(cè)RBT結(jié)果為陽(yáng)性的可判為陽(yáng)性，否則仍判為陰性。將500份待檢血清樣品進(jìn)行統(tǒng)一編號(hào)，采用RBT、SAT、CFT和ELISA 4種方法進(jìn)行檢測(cè)，陽(yáng)性數(shù)和陽(yáng)性率如表1。從表1可以看出，RBT檢出的陽(yáng)性樣品數(shù)量最多，陽(yáng)性率為39.00%；CFT次之，陽(yáng)性檢出率為32.40%；SAT的陽(yáng)性檢出率為32.00%；ELISA最少，陽(yáng)性檢出率為31.80%。

表1 4種檢測(cè)方法檢測(cè)500份血清樣品的陽(yáng)性率

將RBT、SAT和CFT檢測(cè)結(jié)果分別與ELISA檢測(cè)結(jié)果相比較，分析假陽(yáng)性率、假陰性率、特異性、敏感性和一致率，結(jié)果如表2。以ELISA檢測(cè)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，RBT檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性率為14.08%，假陰性率為7.55%，敏感性為92.45%，特異性為85.92%；SAT檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性率為7.33%，假陰性率為15.09%，敏感性為84.91%，特異性為92.67%；CFT檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性率為5.87%，假陰性率為10.69%，敏感性為89.31%，特異性為94.13%。以ELISA檢測(cè)結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)，RBT的檢測(cè)結(jié)果一致率為88.00%，SAT檢測(cè)結(jié)果一致率為990.20%，CFT的檢測(cè)結(jié)果一致率為92.60%。RBT、SAT和CFT檢測(cè)結(jié)果與ELISA的一致性比較高，均高于88.00%。

表2 ELlSA與RBT、SAT和CFT檢測(cè)結(jié)果的對(duì)比

通過(guò)對(duì)4種檢測(cè)方法進(jìn)行比較，以ELISA檢測(cè)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，RBT、SAT和CFT檢測(cè)結(jié)果均有一定的假陽(yáng)性和假陰性。其中，RBT特異性最低，假陽(yáng)性率最高；CFT具有最高的特異性同時(shí)具有較好的敏感性，敏感性低于RBT但高于SAT；SAT的敏感性最低，特異性高于RBT但低于CFT。

3 討論

隨著我區(qū)山羊養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，布魯氏菌病的監(jiān)測(cè)、防控工作越來(lái)越重要，目前布病的血清學(xué)診斷方法種類較多，但沒(méi)有任何一種方法在操作簡(jiǎn)便性、敏感性、特異性和成本等各方面均能夠令人滿意。在實(shí)際操作過(guò)程中，ELISA在以上4種方法中被認(rèn)為具有較高的靈敏度，并且結(jié)果采用酶標(biāo)儀進(jìn)行讀取，避免了人為因素造成的誤差，結(jié)果更加準(zhǔn)確[7]，適合大批量樣品的檢測(cè)，但相比其他幾種方法檢測(cè)成本較高。RBT操作簡(jiǎn)便，反應(yīng)時(shí)間短，試驗(yàn)結(jié)果迅速表達(dá)，成本低廉，同時(shí)對(duì)于操作者要求低，易學(xué)易上手，適合在現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用，但由于是采取肉眼判斷結(jié)果以及環(huán)境、溫度的影響，結(jié)果誤差會(huì)比較大，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性的情況；SAT操作比較復(fù)雜，耗時(shí)較長(zhǎng)，不適合現(xiàn)場(chǎng)大批量檢測(cè)，主觀因素影響較大，單獨(dú)采用 SAT 假陰性率較高，易造成漏診，影響布病凈化的效果；CFT在本研究中有比較高的假陰性率，可能是由于該方法比較復(fù)雜，參與成分多等原因，但可以看出該方法具有特異性高，敏感性也高于SAT，假陽(yáng)性率較低的特點(diǎn)。

實(shí)際監(jiān)測(cè)篩查中，若出現(xiàn)漏檢情況，則為布魯氏菌的散布和布病的蔓延提供了可能性，若出現(xiàn)陰性畜的誤診和誤殺則會(huì)造成不必要的經(jīng)濟(jì)損失。因此，鑒于這4種方法各有不同的特點(diǎn)，采取兩種或者兩種以上的方法根據(jù)不同需要配合應(yīng)用會(huì)更加高效。在進(jìn)行大規(guī)模常規(guī)檢疫或現(xiàn)場(chǎng)篩查時(shí)，為提高工作效率、降低工作量同時(shí)提高檢測(cè)準(zhǔn)確性，可以先采取特異性稍差但成本更低廉、操作簡(jiǎn)便快捷、敏感性較好的方法進(jìn)行篩查，再采用特異性較好的方法進(jìn)行復(fù)核。

因此，建議在復(fù)核初篩過(guò)程中可以采取RBT作為家畜布病田間篩選試驗(yàn)方法，而在復(fù)核過(guò)程中采取CFT和ELISA相結(jié)合進(jìn)行診斷來(lái)降低誤診可能帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失。

[1] 周莉，候權(quán)書(shū)，黃誠(chéng)，等.布魯氏菌病的危害與個(gè)人防護(hù)[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2016，33（6）：52-54.

[2] 王傳清，李星.布魯氏菌病的流行和研究現(xiàn)狀及防控策略[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2009，26（6）：63-65.

[3] 田克恭，李明.動(dòng)物疫病診斷技術(shù)理論與應(yīng)用[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2014：209-218.

[4] 黃文利，吳成果，羅興建，等.重慶市首起羊種布魯氏菌病暴發(fā)疫情的調(diào)查[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2016，16（3）：380-382.

[5] 范偉興，狄棟棟，田莉莉.當(dāng)前家畜布魯氏菌病防控策略與措施的思考[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2013，30（3）：64-66.

[6] 劉佳，李巍，陳明非，等.布病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法的篩選與應(yīng)用[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2016，（8）：10-12.

[7] 齊景文，依穎新，周艷紅，等.牛羊布魯氏菌病四種血清學(xué)檢測(cè)方法對(duì)比分析[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2015，32（4）：57-59.