梅桂蘭

摘要：采用組織分離法，對阿克蘇地區(qū)周邊棗園具有典型棗（Ziziphus jujuba Mill.）黑斑病癥狀的病果進行病原鑒定，測定戊唑醇、吡唑醚菌酯、氟硅·嘧菌酯、苯醚甲環(huán)唑、多菌靈和多抗霉素對棗黑斑病的防治效果。結(jié)果表明，根據(jù)其形態(tài)特征鑒定其致病病原菌為細極鏈格孢菌（Alternaria tenuissima）。多抗霉素 1 500倍稀釋液對棗黑斑病發(fā)病率的防治效果最好，為91.2%；其次是43%戊唑醇5 000倍稀釋液，防治效果為89.5%；再者是25%苯醚甲環(huán)唑1 500倍稀釋液，防治效果為75.4%。

關(guān)鍵詞：棗（Ziziphus jujuba Mill.）；黑斑?。环乐涡Ч?；阿克蘇；細極鏈格孢菌（Alternaria tenuissima）

中圖分類號：S436.629 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2017）10-1863-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.10.016

Pathogen Analysis and Chemical Control Effects Research of Aksu Ziziphus jujuba Black Spot Disease

MEI Gui-lan

（Aksu Vocationl and Technical College， Aksu 843000，Xinjiang，China）

Abstract： The typical symptoms of the disease fruit black spot in Aksu areas jujube（Ziziphus jujuba Mill.） orchard were used to identify the pathogens by using tissue isolation method. And determined the control effect of tebuconazole， pyraclostrobin， fluorosilicone-azoxystrobin， difenoconazole， carbendazim and polyoxin for red jujube black spot disease. The results showed that the pathogen was identified as Alternaria tenuissima according to its morphological characteristics. The control effect of polyoxins 1 500 times diluent on the incidence of red jujube level was best， which was 91.2%； The second was 43% tebuconazole listed 5 000 times diluent， the control effect was 89.5%； Then there were 25% of difenoconazole 1 500 times diluent， which control effect was 75.4%.

Key words： jujube（Ziziphus jujuba Mill.）； black spot disease； control effect； Aksu； Alternaria tenuissima

阿克蘇位于塔克拉瑪干大沙漠北緣，天山山脈中段的南麓，年平均氣溫7.9～11.7 ℃，年降水量53.2～120.6 mm。阿克蘇境內(nèi)有1 293條冰川，總面積達4 098 km2，儲水量2 154億m3。阿克蘇所處的特殊地理位置，為發(fā)展特色農(nóng)業(yè)提供了優(yōu)越的自然條件。從市場價值、水土光熱環(huán)境和種植成本等綜合因素考慮，棗（Ziziphus jujuba Mill.）成為最適宜的優(yōu)勢樹種。2009年，阿克蘇地區(qū)的棗種植面積已有 8萬hm2，是新疆最大的紅棗生產(chǎn)基地。至2013年，阿克蘇地區(qū)棗種植面積達到13萬hm2。因為具有廣闊的市場發(fā)展前景、較好的經(jīng)濟效益、良好的生態(tài)效益和豐富的營養(yǎng)價值，棗已經(jīng)成為阿克蘇地區(qū)一項支柱性產(chǎn)業(yè)。隨著阿克蘇棗栽培面積與種植規(guī)模不斷擴大，以及大面積推廣矮化密植種植方式，使得棗黑斑病成為該地區(qū)棗樹的主要病害之一，致使棗產(chǎn)量損失率達20%～30%，發(fā)病嚴(yán)重時，其減產(chǎn)率更是高達50%～70%。

棗黑斑病主要為害棗葉、花和果實。發(fā)病早期，葉片出現(xiàn)褐色病斑，尖枯，退綠，后期葉圓呈現(xiàn)黑斑，并變黃卷曲，脫落。棗黑斑病對果實的危害初期，棗表面呈現(xiàn)出小黑點，并且隨著果實體積的長大，病斑也隨之?dāng)U大，導(dǎo)致腰部皺縮。病斑常發(fā)生在棗果臍部或頂部，一個棗果會帶一個或者多個病斑。后期病部皮下組織壞死變褐色病斑，呈半圓形軟木狀組織深入果肉，使得果肉味苦，并最終導(dǎo)致果實大量腐爛。棗黑斑病由真菌引起，病原菌以菌絲體與分生孢子潛伏在殘落的棗吊、棗頭和僵果里，并在來年棗樹萌芽至花期，分生孢子就會借助風(fēng)雨傳播侵染[1]。根據(jù)相關(guān)報道，從新疆的棗黑斑病果實里分離出24種病原菌，包括成團泛菌（Pantoea agglomerans）、梅奇酵母（Metschnikowia zizyphicola）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）[1-4]與一些放線菌[2]，這些病原菌受pH影響小，尤其在高濕環(huán)境下更加利于孢子、菌絲生長。適宜病原菌生長的溫度為15～35 ℃，只有在溫度達到40 ℃時病原菌才不會生長，而阿克蘇棗黑斑病發(fā)生的高峰期通常在7～8月。

國內(nèi)學(xué)術(shù)界對棗黑斑病的說法不一致，普遍認為是由鏈格孢屬（Alternaria）、莖點霉屬（Phoma）與毛盤孢屬（Colletortrichum）3屬真菌或者是由這3屬真菌混合侵染所導(dǎo)致[5，6]。本研究將分析阿克蘇棗黑斑病的致病病原菌，并對其防治策略進行研究。

1 材料與方法

1.1 材料

阿克蘇棗黑斑病的果實選取阿克蘇地區(qū)周邊棗園具有典型黑斑病癥狀的病果，培養(yǎng)基選擇NA培養(yǎng)基、NB培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基與細菌生理生化常用培養(yǎng)基。NA與LB培養(yǎng)基用于細菌分離培養(yǎng)[3]，擴增，PDA培養(yǎng)基主要用于真菌培養(yǎng)，NB培養(yǎng)基主要用于培養(yǎng)性狀觀察。

1.2 方法

1.2.1 病原菌分離 采集具有典型黑斑病癥狀的病果，清水擦洗3遍，無菌水擦洗3遍，乙醇擦洗3～5遍，用無菌打孔器從棗果病斑處取少量菌體，放在PDA平板里的中間位置，置于25～30 ℃培養(yǎng)7～14 d，觀察菌落變化特征。然后采用組織分離法對病菌進行分離，直到形成單一菌落。

1.2.2 病原菌鑒定 將分離到的單一菌株接種到查氏培養(yǎng)基，在25 ℃室溫環(huán)境下培養(yǎng)7～14 d，觀察菌落特征，用顯微鏡觀察菌絲體與分生孢子的形態(tài)與著生方式，以確定病菌類型。也可以把已純化的病原菌接種于PDA培養(yǎng)基，在28 ℃恒溫環(huán)境下培養(yǎng)3～5 d，用接種環(huán)在平板上刮取適量孢子，放入盛有100 mL的含0.05% Tween-80去離子水中，通過六層無菌紗布過濾多次，濾掉菌絲體，利用血球計數(shù)板在顯微鏡里直接計數(shù)，把孢子的數(shù)量調(diào)整到105個/mL。在鑒定病原菌時，用玻片培養(yǎng)法把病原菌培養(yǎng)7 d，借助真菌形態(tài)學(xué)，依據(jù)菌落形態(tài)和顯微形態(tài)，鑒定病原菌種類[4]。

1.2.3 殺菌劑防治效果測定 以戊唑醇、吡唑醚菌酯、氟硅·嘧菌酯、苯醚甲環(huán)唑、多菌靈和多抗霉素為殺菌劑，以極細鏈格孢菌作為靶標(biāo)菌，在離體環(huán)境下，檢測化學(xué)殺菌藥劑對該菌產(chǎn)生的抑菌效力，以此篩選抑菌效果好的化學(xué)藥劑濃度。

取80 μL孢子懸浮液，與相同量的藥液混合，對照組中把孢子和相同量無菌水混合；將混合的藥液和對照組的混合液依次滴入凹形載玻片，置于保濕培養(yǎng)皿上；將保濕培養(yǎng)皿置于27 ℃恒溫培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)，12 h后統(tǒng)計孢子萌發(fā)率（對照組有大于80%的孢子萌發(fā)時進行統(tǒng)計）。每種殺菌劑用3種濃度進行，3次重復(fù)。統(tǒng)計的數(shù)據(jù)是3次重復(fù)的平均值，校正死亡率=1-校正萌發(fā)率，校正萌發(fā)率=（處理組的萌發(fā)率/對照組的萌發(fā)率）×100%。

將室內(nèi)篩選出來的藥劑進行田間藥效試驗，共設(shè)置7個處理。處理1，43%戊唑醇5 000倍稀釋液；處理2，25%苯醚甲環(huán)唑1 500倍稀釋液；處理3， 25%吡唑醚菌酯1 000倍稀釋液；處理4，80%多菌靈1 000倍稀釋液；處理5，50%氟硅·嘧菌酯1 500倍稀釋液；處理6，多抗霉素1 500倍稀釋液；處理7，對照（CK），不噴藥。各處理完全按照隨機區(qū)組排列，采用背負式手動噴霧器均勻噴藥，每個處理0.67 hm2，分別于8月27日、9月16日、10月7日對全株噴施，共噴施3次，每個處理噴灑藥液100 L，直到葉面滴水為止。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌鑒定

病原菌培養(yǎng)7 d后直徑達到6 cm，其菌落生長速度非?？欤≡浔砻婧诤稚?，質(zhì)地棉絮狀，無滲出液，菌落背面黑色，經(jīng)分離得到2種病原菌，一種病原菌X的菌落表面傾向于淡黃色，見圖1、圖2，另一種病原菌W的菌落表面傾向于白色，見圖3、圖4。

病原菌X的分生孢子?；疑綑旌稚?，單生，細長，直或略彎，分隔，偶分枝，基部略膨大，大小為（90.0～180.0） μm×（7.5～12.0） μm。分生孢子倒棒形、卵形或橢圓形，成熟孢子有縱橫隔膜，橫隔膜或者半橫隔膜有7～10 個，縱隔膜和斜隔膜有1～6個，分隔處稍隘縮，還有1～4個主橫隔膜，形狀較粗而色彩深，具柱狀喙和假喙，淺褐色。病原菌W的形狀和病原菌X類似，最大不同的就是成熟孢子橫隔膜比較短，而且數(shù)量只有1～7個。結(jié)合真菌鑒定記載[7]，初步判斷病原菌屬于鏈格孢屬（Alternaria）。經(jīng)同源性分析，病原菌X和Alternaria tenuissima（細極鏈格孢菌）的同源性接近99.6%，形態(tài)特征很相似；病原菌W和Alternaria tenuissima（細極鏈格孢菌）的同源性是100%，形態(tài)特征完全相同。

2.2 殺菌劑的防治效果

田間藥效試驗結(jié)果見表1。由表1可知，7個處理的棗黑斑病病果率分別是6%、14%、22%、27%、31%、5%、57%。戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯、多菌靈、氟硅·嘧菌酯和多抗霉素的防治效果分別為89.5%、75.4%、61.4%、52.6%、45.6%、91.2%。其中，多抗霉素1 500倍稀釋液對棗黑斑病發(fā)病率的防治效果最好，為91.2%；其次是43%戊唑醇5 000倍稀釋液，防治效果為89.5%；再者是25%苯醚甲環(huán)唑1 500倍稀釋液，防治效果為75.4%。

3 小結(jié)與討論

林忠敏等[4]對山西太原、交城等市縣棗果上發(fā)生的棗黑斑病進行研究，鑒定其病原為交鏈孢屬的Alternaria tenuis與莖點屬的Phoma sp.。王軍等[5]對山東省沾化縣與河口區(qū)發(fā)生的棗黑斑病進行研究，鑒定病原菌是細鏈格孢菌[A. alternata（Fr.） Keissler]。宗淑萍等[6]對黃驊市冬棗黑點病研究，發(fā)現(xiàn)病原菌是仁果莖點霉（Phoma pomirum Thüm）、桑殼小圓孢菌（Coniothyrium fucsidulum Sacc）和細鏈格孢菌。趙文華等[8]對云南省紅河州棗黑斑病研究，確定其病原菌是由交鏈孢屬（Alternaria sp.）、莖點霉屬（Phoma sp.）、毛盤孢屬（Colletortrichum sp.）等多種類型的真菌混合浸染引起的病癥。本試驗對新疆阿克蘇地區(qū)的棗黑斑病的研究發(fā)現(xiàn)，其病原菌是細極鏈格孢菌（Alternaria tenuissima），這與孫文學(xué)[9]的研究結(jié)果一致。極細鏈格孢菌是一類非常多見的植物病原真菌，能在惡劣環(huán)境中生存，其寄主種類較多[10]，包括染柚、臍橙、檸檬、花生、向日葵、柑橘、棉花、杏、辣椒、葡萄、草莓等植物，而不同植物病害，具體的防治方法也不同。

針對棗果中的極細鏈格孢菌，可以采取生物防治和化學(xué)藥劑防治。生物防治主要是利用枯草芽孢桿菌對極細鏈格孢菌的抑制作用。通過對峙培養(yǎng)和發(fā)酵液的抑菌試驗，發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌具有十分明顯的抗菌活性與非常強的抗逆能力，芽孢還能制成可濕性粉劑等不同劑型，且不失活，是一種很好的生防微生物[11]?？莶菅挎邨U菌在NA培養(yǎng)基上單菌落近似圓形，呈乳白色，形狀非透明狀、中間有隆起的皺褶、邊緣整齊、沒有乳化現(xiàn)象。菌體是短桿狀，革蘭氏染色為陽性，鞭毛沒有明顯特征?？莶菅挎邨U菌受溫度和pH的影響，在pH 7、35 ℃環(huán)境下生長良好，但在強酸與強堿的環(huán)境生長會受到抑制。因此，在不能滿足溫度28～35 ℃、pH 7條件的環(huán)境下[12]，還需要采取化學(xué)藥劑防治。

綜上所述，對于阿克蘇棗園黑斑病的防治，在溫度28～35 ℃和pH 7條件下盡量采取生物防治。如果在生物防治不能滿足的條件下，可以采取化學(xué)藥劑防治，即在盡量保護棗果不被污染條件下，提高棗的高質(zhì)、高產(chǎn)。建議對阿克蘇棗園黑斑病進行防治，首選多抗霉素，其次是戊唑醇，再次是苯醚甲環(huán)唑。為延緩冬棗黑斑病抗藥性的產(chǎn)生，可將上述藥劑輪換使用。

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