敖梅紅，孫仙娥，于小紅，羅 美，程曉曉，熊 艷，李隆玉

子宮頸腺癌組織中Nup88蛋白的表達(dá)及其意義

敖梅紅1,2，孫仙娥2，于小紅3，羅 美1，程曉曉2，熊 艷2，李隆玉1,2

目的 探討核孔蛋白88(nucleoporin 88, Nup88)在子宮頸腺癌組織中的表達(dá)及其意義。方法 采用免疫組化SP法檢測20例正常子宮頸組織、20例子宮頸原位腺癌和60例子宮頸腺癌組織中Nup88蛋白表達(dá)；分析Nup88蛋白表達(dá)與子宮頸腺癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 Nup88蛋白在子宮頸腺癌組織、子宮頸原位腺癌組織、正常子宮頸組織中的陽性率分別為78.3%(47/60)、45.0%(9/20)、10.0%(2/20)，在子宮頸腺癌組織中的表達(dá)最高(P<0.05)；Nup88蛋白表達(dá)與患者年齡(≤50歲或>50歲)、組織病理類型、腫瘤大小等無關(guān)(P均>0.05)；與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。Nup88蛋白陽性的子宮頸腺癌患者預(yù)后差。結(jié)論 Nup88蛋白可能與子宮頸腺癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，有望成為評估子宮頸腺癌生物學(xué)行為的指標(biāo)之一。

子宮頸腫瘤；Nup88；預(yù)后；轉(zhuǎn)移

子宮頸腺癌在子宮頸癌中的比例高達(dá)10%～34%[1-2]，近年逐漸呈上升及年輕化趨勢[3]。子宮頸腺癌與子宮頸鱗狀細(xì)胞癌相比診斷較為困難，預(yù)后也比子宮頸鱗狀細(xì)胞癌差[4]。核孔蛋白(nucleoporins, Nups)是核孔復(fù)合物重要組成成分，除參與大分子的核質(zhì)轉(zhuǎn)運，其還在細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、凋亡等生命過程中發(fā)揮重要的生理功能；可能通過多種途徑增強(qiáng)腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移。目前，國內(nèi)外尚無Nup88蛋白在子宮頸腺癌中表達(dá)的報道。本文采用免疫組化SP法檢測Nup88蛋白表達(dá)，分析其與子宮頸腺癌臨床病理特征、生存的關(guān)系，為子宮頸腺癌的預(yù)后判斷及靶向治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 材料 選取江西省婦幼保健院2005年1月～2010年12月手術(shù)切除的子宮頸腺癌60例和原位腺癌20例，另收集同期正常子宮頸組織20例作為對照。60例子宮頸腺癌患者年齡26～60歲，中位年齡43歲，平均43.3歲。子宮頸腺癌及子宮頸原位腺癌入組標(biāo)準(zhǔn)：(1)無合并其他癌癥；(2)子宮頸腺癌患者系子宮頸腺癌IB期行子宮頸癌根治性手術(shù)，子宮頸原位腺癌行子宮頸錐切術(shù)。對照組以同期正常子宮頸組織20例，入組標(biāo)準(zhǔn)：(1)因子宮肌瘤行全子宮切除，經(jīng)病理學(xué)診斷證實無子宮頸癌及癌前期病變者；(2)無合并其他癌癥者；(3)既往無癌癥史。

按WHO(2014)子宮頸腫瘤分類本組子宮頸腺癌病理類型：子宮頸腺癌普通型15例、黏液腺癌17例、絨毛狀腺癌8例、內(nèi)膜樣癌9例、透明細(xì)胞癌8例、神經(jīng)內(nèi)分泌癌2例、中腎管癌1例；其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或脈管癌栓15例。

1.2 免疫組化 Nup88兔抗人多克隆抗體購自艾博抗(上海)公司。免疫組化染色采用SP法，石蠟連續(xù)4 μm厚切片，常規(guī)脫蠟及水化，檸檬酸鹽緩沖液高溫修復(fù)抗原，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，滴加50 μL的Nup88兔抗人多克隆抗體(1 ∶50)，孵育，50 μL酶標(biāo)抗小鼠/兔IgG聚合物，孵育30 min，PBS沖洗，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封固。免疫組化結(jié)果由兩名高年資病理醫(yī)師采用雙盲法閱片。

1.3 結(jié)果判定 Nup88以胞質(zhì)呈棕黃色染色為陽性，按陽性細(xì)胞百分比標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞率<5%為(-),5%～25%為(+)，26%～50%為()，>50%為()；其中(-)為陰性，(+～)為陽性。每張切片觀察5個高倍視野記錄Nup88蛋白的表達(dá)。

1.4 隨訪 子宮頸腺癌和子宮頸原位腺癌患者于術(shù)后2年內(nèi)每3～4個月復(fù)查1次，術(shù)后2～5年內(nèi)每半年復(fù)查1次，術(shù)后5年后每年復(fù)查1次。隨訪以電話向患者及家屬詢問為主，另專門派一名醫(yī)務(wù)人員在患者至門診復(fù)查時進(jìn)行詢問登記。生存期自至死亡日期計算，隨訪時間以手術(shù)日期始，患者死亡或術(shù)后5年隨訪截止。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗或四格表Fisher確切概率法檢驗(樣本量n<40或者理論頻數(shù)T<1)；等級資料比較采用Mann-WhitneyU檢驗；生存分析用Kaplan-Meier法、繪制生存曲線圖。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Nup88蛋白的表達(dá) 子宮頸腺癌組織、子宮頸原位腺癌組織、正常子宮頸組織中Nup88蛋白陽性率分別為78.3%(47/60)、45.0%(9/20)、10.0%(2/20)，子宮頸腺癌組織和子宮頸原位腺癌組織均高于正常子宮頸組織，子宮頸腺癌組織中的表達(dá)高于子宮頸原位腺癌組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000，表1，圖1)。

表1 Nup88蛋白表達(dá)在不同子宮頸組織中的比較

2.2 Nup88蛋白表達(dá)與子宮頸腺癌臨床病理特征的關(guān)系 Nup88蛋白表達(dá)與子宮頸腺癌患者年齡(≤50歲或>50歲)、組織病理類型、腫瘤大小等無關(guān)(P均>0.05)，與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或脈管癌栓有關(guān)(P均<0.05，表2)。

2.3 Nup88蛋白表達(dá)與子宮頸腺癌預(yù)后的關(guān)系 60例子宮頸腺癌患者，隨訪60個月，9例失訪，隨訪率為85%，13例患者死亡。分析發(fā)現(xiàn)Nup88蛋白陽性者預(yù)后比陰性者差；經(jīng)Kaplan-Meier法統(tǒng)計，Nup88蛋白陽性者中位生存時間(49.33±2.65)個月，陰性者中位生存時間(56.00±3.83月)，兩者相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.241，圖2)。

表2 Nup88蛋白表達(dá)與子宮頸腺癌臨床病理特征的關(guān)系

*其他類型包括宮內(nèi)膜樣腺癌9例、絨毛狀腺癌8例、透明細(xì)胞癌8例、神經(jīng)內(nèi)分泌癌2例、中腎管癌1例

ABC圖1 Nup88的表達(dá)，SP法：A．在正常子宮頸組織中呈陰性；B．在子宮頸原位腺癌組織中呈陽性；C．在子宮頸腺癌組織中呈陽性

3 討論

目前由于子宮頸細(xì)胞學(xué)篩查的廣泛開展，子宮頸浸潤性鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病率明顯下降[5]；但子宮頸腺癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢，尤其是年輕子宮頸癌患者[6]。子宮頸腺癌與子宮頸鱗狀細(xì)胞癌相比診斷較為困難，預(yù)后也比子宮頸鱗狀細(xì)胞癌差[4]。探討子宮頸腺癌組織中的某些腫瘤標(biāo)志物表達(dá)，或許可能為子宮頸腺癌的預(yù)后判斷及靶向治療提供新思路。

圖2 Nup88蛋白表達(dá)與子宮頸腺癌的生存關(guān)系

核孔復(fù)合物是貫穿核膜、物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞核的主要通道，介導(dǎo)大分子物質(zhì)在細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核之間的穿梭運動。Nups是核孔復(fù)合物的重要組成成分，除參與大分子的核質(zhì)轉(zhuǎn)運，其還在細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、凋亡等生命過程中發(fā)揮重要的生理功能；其極有可能是通過多種途徑增強(qiáng)腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移。Nup88屬于Nups，其高表達(dá)與腫瘤的關(guān)系最為密切。王浩等[7]通過對有關(guān)Nup88與惡性腫瘤相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行綜述，認(rèn)為多數(shù)惡性腫瘤中Nup88過表達(dá)，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)測預(yù)后中具有重要的臨床價值。Nup88在人類多種實體惡性腫瘤，如胃癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌呈特異性高表達(dá)，提示Nup88可能是惡性腫瘤的特異性標(biāo)志物[8-9]。

本組實驗顯示Nup88在子宮頸正常組織、子宮頸原位腺癌、子宮頸腺癌組織中表達(dá)不同，隨著病變的進(jìn)展陽性率增加。李玉強(qiáng)等[10]分析Nup88在乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和MDA-MB-435S中的表達(dá)，亦發(fā)現(xiàn)Nup88蛋白及mRNA的表達(dá)與乳腺癌細(xì)胞株的侵襲性有關(guān)。王園園等[11]發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌組織和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中Nup88蛋白陽性率均高于癌旁無瘤黏膜組織。Nup88在子宮頸腺癌發(fā)生、發(fā)展中可能起一定作用。

李芳等[12]對乳腺癌中Nup88和PINCH mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中Nup88、PINCH mRNA與HER-2表達(dá)均呈正相關(guān)，提示Nup88、PINCH mRNA與HER-2可能在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮一定的協(xié)同作用。李玉強(qiáng)等[13]通過Nup88重組慢病毒，采用RNAi成功抑制MCF-7中Nup88基因的表達(dá)，并能顯著抑制其增殖及遠(yuǎn)處的侵襲能力。提示Nup88在某些惡性腫瘤的侵襲能力起一定的作用，本組實驗發(fā)現(xiàn)Nup88蛋白表達(dá)與患者年齡(≤50歲或>50歲)、組織學(xué)類型、腫瘤大小等無關(guān)(P均>0.05)；與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或脈管癌栓有關(guān)(P均<0.05)。推測Nup88蛋白與子宮頸腺癌的發(fā)展可能有關(guān)。有文獻(xiàn)報道[14]Nup88蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移程度、病死率密切相關(guān)，可作為評估預(yù)后的指標(biāo)。本組中子宮頸腺癌組織中Nup88蛋白陽性者的中位生存時間比陰性者的中位生存時間低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。可能由于本組樣本量較少，有待于收集大樣本量進(jìn)一步分析。

綜上所述，Nup88蛋白與子宮頸腺癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，有望成為評估子宮頸腺癌生物學(xué)行為的指標(biāo)之一；后續(xù)實驗將加大樣本數(shù)進(jìn)一步分析。

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江西省科技計劃自然科學(xué)基金(20144BAB2050017)

1南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院，南昌 3300062江西省婦幼保健院腫瘤科、3病理科，南昌 330006

敖梅紅，博士研究生，副主任醫(yī)師。E-mail：amh806@126.com 李隆玉，女，主任醫(yī)師，通訊作者。E-mail：lilongyu1103@sina.corn

時間：2017-5-17 23:53 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170517.2352.021.html

R 737.33

B

1001-7399(2017)05-0559-03

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.05.021

接受日期：2017-02-07