肖 峰，顏紅柱，鄒 玨，益莉娜，張金宇，薛晏旻，王秀玲，謝福森

子宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變和鱗狀細(xì)胞癌中CENP-F、Ki-67的表達(dá)及意義

肖 峰，顏紅柱，鄒 玨，益莉娜，張金宇，薛晏旻，王秀玲，謝福森

目的 觀察CENP-F、Ki-67蛋白在子宮頸鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell carcinoma, SCC)、鱗狀上皮內(nèi)病變(squamous intraepithelial lesions, SIL)中的表達(dá)規(guī)律，探討兩者表達(dá)的相關(guān)性及其意義。方法 收集7例正常子宮頸鱗狀上皮、15例良性反應(yīng)性增生鱗狀上皮、13例子宮頸低級(jí)別SIL、17例高級(jí)別SIL和5例子宮頸SCC，采用免疫組化EnVision法分別檢測(cè)CENP-F、Ki-67在不同組織中的表達(dá)。結(jié)果 不同級(jí)別的上皮內(nèi)病變與子宮頸SCC組織中CENP-F及Ki-67的表達(dá)與病變級(jí)別相關(guān)(P<0.001)；相關(guān)性分析結(jié)果顯示：子宮頸病變中CENP-F與Ki-67的表達(dá)呈線性正相關(guān)(r=0.816，P<0.001)。結(jié)論 CENP-F、Ki-67在預(yù)測(cè)子宮頸SIL的進(jìn)展及預(yù)后中有協(xié)同作用；CENP-F有望成為預(yù)測(cè)子宮頸SCC預(yù)后及靶向治療的分子標(biāo)志物。

子宮頸腫瘤；鱗狀細(xì)胞癌；鱗狀上皮內(nèi)病變；CENP-F；Ki-67；免疫組織化學(xué)

子宮頸癌是女性常見(jiàn)的惡性腫瘤，近年發(fā)病率有逐年升高和年輕化的趨勢(shì)。HPV持續(xù)感染是導(dǎo)致鱗狀上皮發(fā)生非程序性增生，最終進(jìn)展為子宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變(squamous intraepithelial lesions, SIL)及子宮頸鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell carcinoma, SCC)的主要原因。研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67是目前檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖活性的可靠指標(biāo)；CENP-F屬于細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白，在G2-M期表達(dá)增加，在分裂末期迅速水解。有文獻(xiàn)報(bào)道CENP-F可通過(guò)蛋白質(zhì)的相互作用在有絲分裂和惡性細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖中起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用，其在SIL及SCC中的作用有待于進(jìn)一步分析。本文通過(guò)觀察CENP-F及Ki-67在子宮頸SIL、SCC局部表達(dá)規(guī)律，探討兩者在SIL、SCC發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬第七人民醫(yī)院2015年婦產(chǎn)科門診子宮頸活檢及部分住院手術(shù)標(biāo)本，隨機(jī)選取來(lái)源子宮肌瘤手術(shù)正常子宮頸標(biāo)本7例，15例子宮頸良性反應(yīng)性病變標(biāo)本(包括不成熟鱗化、老年性萎縮及炎性增生)，13例低級(jí)別SIL，17例高級(jí)別SIL，5例SCC。

1.2 方法 CENP-F多克隆抗體購(gòu)自Abcam公司；Ki-67購(gòu)自杰浩生物公司；二抗購(gòu)自DAKO公司。免疫組化采用EnVision法染色，CENP-F及Ki-67蛋白稀釋度濃度分別為1 ∶700、1 ∶100；具體操作步驟按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。以PBS代替一抗作陰性對(duì)照，同時(shí)用已知陽(yáng)性標(biāo)本作陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 CENP-F及Ki-67表達(dá)均定位于細(xì)胞核，顯微鏡下計(jì)算鱗狀上皮全層中陽(yáng)性染色細(xì)胞數(shù)及陽(yáng)性細(xì)胞百分比，并記錄最大值。由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師采用雙盲法閱片，如結(jié)果出現(xiàn)差異由主任醫(yī)師評(píng)估并共同確診。

2 結(jié)果

2.1 CENP-F及Ki-67蛋白在不同子宮頸病變中陽(yáng)性細(xì)胞定位與分布 CENP-F及Ki-67蛋白在正常子宮頸鱗狀上皮中均表達(dá)于基底層；在反應(yīng)性增生鱗狀上皮主要表達(dá)于基底層和旁基底層；在SIL中兩者隨病變級(jí)別升高，表達(dá)逐漸蔓延至中表層；在SCC中兩者均全層表達(dá)(圖1～4)。

2.2 CENP-F及Ki-67蛋白在不同子宮頸病變中的表達(dá) CENP-F、Ki-67蛋白在良性反應(yīng)性增生鱗狀上皮組中比正常子宮頸鱗狀上皮組的陽(yáng)性率增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表1)；CENP-F、Ki-67蛋白在低級(jí)別、高級(jí)別SIL組及SCC組中的陽(yáng)性率逐漸增加；各組之間(低級(jí)別SIL組與正常組、低級(jí)別SIL組與反應(yīng)性增生組、高級(jí)別SIL組與低級(jí)別SIL組、SCC組與高級(jí)別SIL組)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3 CENP-F及Ki-67蛋白在不同子宮頸病變中表達(dá)的相關(guān)性 CENP-F及Ki-67蛋白在不同子宮頸病變中表達(dá)，均呈顯著正相關(guān)(r=0.816，P<0.01，圖5)。

3 討論

子宮頸SCC是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤，是繼乳腺癌之后的女性高發(fā)惡性腫瘤[1]。研究證實(shí)高危型HPV持續(xù)感染是子宮頸癌及癌前病變發(fā)生的重要原因[2]，其感染致病主要過(guò)程：HPV持續(xù)感染，HPV E6和E7原癌蛋白與宿主整合，通過(guò)控制G1/S期的限制位點(diǎn)R，使腫瘤抑制蛋白p53及成視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白(pRb)失活，鱗狀上皮發(fā)生非程序性增生，導(dǎo)致子宮頸SIL以及SCC的發(fā)生。

表1 不同子宮頸病變組織中CENP-F和Ki-67的陽(yáng)性率比較

正常組：正常子宮頸鱗狀上皮；反應(yīng)增生組：良性反應(yīng)性增生鱗狀上皮

圖1 A.SCC組中CENP-F染色全層表達(dá)，EnVision法；B.SCC組中Ki-67染色全層表達(dá)，EnVision法 圖2 A.高級(jí)別SIL組中CENP-F染色全層表達(dá)，EnVision法；B.高級(jí)別SIL組中 Ki-67染色全層表達(dá)，EnVision法 圖3 A.低級(jí)別SIL組中CENP-F染色主要分布于下1/2層，少量分布于表層，EnVision法；B.低級(jí)別SIL組中Ki-67染色主要分布于中底層，少量分布于表層，EnVision法 圖4 A.反應(yīng)性增生組中CENP-F染色主要分布于基底層及副基底層，EnVision法；B.Ki-67主要分布于基底層及副基底層，EnVision法

圖5 CENP-F及Ki-67蛋白表達(dá)的相關(guān)性r=0.816，P<0.01

Ki-67是一種單克隆抗體，與細(xì)胞增殖相關(guān)，在G1中期開(kāi)始表達(dá)，并存在于G1、S、G2及M期，其中在M期最高[3]；是目前檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖活性最可靠的指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Ki-67陽(yáng)性定位于細(xì)胞核，在正常和反應(yīng)性增生的子宮頸上皮陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%，主要分布在基底層和副基底層；隨子宮頸SIL級(jí)別升高，Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞的分布逐漸向中層和表層蔓延，且陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目逐漸增加，各組間(低級(jí)別SIL組與正常組、低級(jí)別SIL組與反應(yīng)性增生組、高級(jí)別SIL組與低級(jí)別SIL組、SCC組與高級(jí)別SIL組)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示Ki-67增殖指數(shù)對(duì)子宮頸鱗狀上皮反應(yīng)性增生、子宮頸SIL和SCC的鑒別與分類有重要意義，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[4]。

CENP-F是相對(duì)分子質(zhì)量約3.5×104的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白，主要分布在細(xì)胞著絲粒區(qū)，參與細(xì)胞著絲粒構(gòu)成，在G2-M期表達(dá)增加，在分裂末期迅速水解。CENP-F在細(xì)胞有絲分裂活動(dòng)中扮演重要角色[5-6]，其于許多核基質(zhì)蛋白一樣和Rb結(jié)合，通過(guò)與Rb聯(lián)系和磷酸化調(diào)節(jié)[7]影響細(xì)胞增殖特性。研究發(fā)現(xiàn)，患者血清中自身抗體的檢測(cè)或臨床組織樣本中CENP-F表達(dá)量的檢測(cè)均可作為標(biāo)志物[8]。本實(shí)驗(yàn)采用與Ki-67增殖相關(guān)核蛋白(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù))相同的判定方法檢測(cè)CENP-F的表達(dá)，結(jié)果顯示：CENP-F蛋白陽(yáng)性也定位于細(xì)胞核，在正常和反應(yīng)性增生的子宮頸上皮陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) <10%，主要分布在基底層和副基底層；隨著子宮頸SIL級(jí)別的升高，CENP-F陽(yáng)性細(xì)胞的分布逐漸向中層和表層蔓延，并且陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目逐漸增加，各組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CENP-F蛋白的檢測(cè)可以對(duì)子宮頸鱗狀上皮反應(yīng)性增生、子宮頸SIL和SCC進(jìn)行鑒別。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示CENP-F、Ki-67蛋白在不同子宮頸病變中表達(dá)呈較高的一致性，兩者表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.816，P<0.01)。CENP-F、Ki-67蛋白在預(yù)測(cè)子宮頸SIL的進(jìn)展及預(yù)后中有協(xié)同作用，但在各組內(nèi)特別是子宮頸SIL組與SCC組中，Ki-67蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均明顯高于CENP-F的表達(dá)，提示Ki-67蛋白的敏感性可能高于CENP-F。可能是Ki-67蛋白能反應(yīng)G0期以外各增殖周期的增生情況，而CENP-F蛋白反應(yīng)的只是增殖周期后期G2-M期的增殖情況。

研究發(fā)現(xiàn)，CENP-F參與調(diào)節(jié)許多腫瘤的進(jìn)展。Cao等[9]在鼻咽癌的研究中發(fā)現(xiàn)，CENP-F 過(guò)度表達(dá)的鼻咽癌腫瘤惡性程度增高，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移發(fā)生早，預(yù)后差，并與患者的無(wú)瘤生存和總生存期有關(guān)。de la Guardia等[10]對(duì)72例頭頸部SCC患者進(jìn)行腫瘤組織與正常黏膜組織CENP-F mRNA表達(dá)水平比較，發(fā)現(xiàn)CENP-F過(guò)表達(dá)與腫瘤細(xì)胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。Nishikawa 等[11]還發(fā)現(xiàn)在前列腺癌中，微小RNA205通過(guò)CENP-F調(diào)節(jié)通路抑制癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及侵犯。同時(shí)，Schfer-Hales等[12]應(yīng)用法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑阻止CENP-F的法尼基化，干擾染色體的正常分離，能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，并證實(shí)其具有廣譜的抗腫瘤效應(yīng)。2011年Brown等[13]在乳腺癌細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)CENP-F的著絲粒蛋白是唑來(lái)磷酸治療乳腺癌細(xì)胞中潛在異常靶點(diǎn)。2013年，Mi等[14]也發(fā)現(xiàn)唑來(lái)膦酸的治療能顯著改善CENP-F高表達(dá)的食管SCC患者預(yù)后，提示其可作為預(yù)測(cè)食管SCC患者預(yù)后的分子標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：CENP-F蛋白在子宮頸高級(jí)別SIL及SCC中表達(dá)顯著增強(qiáng)，有望成為預(yù)測(cè)子宮頸高級(jí)別SIL及SCC患者預(yù)后的有效分子標(biāo)志物。CENP-F蛋白在靶向治療上比Ki-67更具特異性，這還有待于積累更多病例進(jìn)行深入分析。

[1] 郭宇雯，吳正升，張和平，陶欣榮. 子宮頸上皮內(nèi)瘤變及子宮頸癌組織中p16和TLR3的表達(dá)及意義[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2015,31(5):502-505.

[2] Yang H J. Aberrant DNA methylation in cervical carcinogenesis[J]. Chin J Cancer, 2013,32(1):42-48.

[3] Carreras R, Alameda F, Mancebo G,etal. A study of Ki-67 CerbB-2 and Cyclin D1 expression in CINI, CINIII and squamous cell carcinoma of the cervix[J]. Histol Histopathol, 2007,22(60):587-592.

[4] 沈丹華. 子宮頸癌前期病變命名變化以及對(duì)于病理診斷與臨床處理的影響[J]. 中華婦產(chǎn)科臨床雜志, 2015,16(1):83-84.

[5] Varis A, Salmela A L, Kallio M J. CENP-F (mitosin) is more than a mitotic marker[J]. Chromosoma, 2006,115(4):288-295.

[6] Yang Z Y, Guo J, Li N,etal. Mitosin/CENP-F is a conserved kinetochore protein subjected to cytoplasmic dynein—mediated poleward transport[J]. Cell Res, 2003,13(4):275-283.

[7] He D, Zeng C, Brinkley B R. Nuclear matrix proteins as structural and functional components of the mitotic apparatus[J]. Int Rev Cytol, 1996,162:1-74.

[8] Zhuo Y J, Xi M, Wan Y P,etal. Enhanced expression of centromere protein F predicts clinical progression and prognosis in patients with prostate cancer[J]. Int J Mol Med, 2015,35(4):966-972.

[9] Cao J Y, Liu L, Chen S P,etal. Prognostic significance and therapeutic implications of centromere protein F expression in human nasopharyngeal carcinoma[J]. Mol Cancer, 2010,9:237.

[10] de la Guardia C, Casiano C A, Trinidad-Pinedo J,etal. CENP-F genne amplification and overexpression in head and neck squamous cell carcinomas[J]. Head Neck, 200l,23(2):104-112.

[11] Nishikawa R, Goto Y, Kurozumi A,etal. MicroRNA-205 inhibits cancer cell migration and invasion via modulation of centromere protein F regulating pathways in prostate cancer[J]. Int J Urol, 2015,22(9):867-877.

[12] Schafer-Hales K, Iaconelli J, Snyder J P,etal. Farnesyl transferase inhibitors impair chromosomal maintenance in cell lines and human tumors by compromising CENP-E and CENP-F function[J]. Mol Cancer Ther, 2007,6(4):1317-1328.

[13] Brown H K, Ottewell P D, Coleman R E,etal. The kinetochore protein CENP-F is a potential novel target for zoledronic acid in breast cancer cells[J]. J Cell Mol Med, 2011,15(3):501-513.

[14] Mi Y J, Gao J, Xie J D,etal. Prognostic relevance and therapeutic implications of centromere protein F expression in patients with esophageal squamous cell carcinoma[J]. Dis Esophagus, 2013,26(6):636-643.

上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬第七人民醫(yī)院病理科，上海 200137

肖 峰，男，主治醫(yī)師。E-mail： q68223575@163.com

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1001-7399(2017)05-0562-03

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.05.022

接受日期：2017-02-20