梁忠锃，張遠(yuǎn)起，黃勝超，李亞?wèn)|，李建文

(廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，廣東 湛江 524001)

乳腺癌位居女性惡性腫瘤首位，其中三陰性乳腺癌是一種特殊的乳腺癌亞型，約占全部乳腺癌的10%～20.8%[1-2]，三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancer，TN-BC)是指雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人表皮生長(zhǎng)因子受體2(Her-2)均為陰性的乳腺癌，常表現(xiàn)為分化程度低、組織學(xué)分級(jí)高，復(fù)發(fā)率高、總存活期短。它作為一類高危乳腺癌，總體預(yù)后差，易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，因缺乏常用分子靶點(diǎn)預(yù)后差于其他亞型[3]，是目前乳腺癌治療領(lǐng)域的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。TIP30作為新近發(fā)現(xiàn)的抑癌基因,目前國(guó)內(nèi)外對(duì)其與三陰性乳腺癌的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本文采用免疫組化SP法檢測(cè)三陰性乳腺癌、非三陰性乳腺癌及正常乳腺組織標(biāo)本中TIP30的表達(dá)，并探討TIP30在三陰性乳腺癌中的臨床病理學(xué)意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院2015—2016年病理資料完整的乳腺癌手術(shù)標(biāo)本93例，所有病例均經(jīng)HE切片復(fù)讀確認(rèn),術(shù)前均未行放、化療及其他特殊治療。其中三陰性乳腺癌40例，非三陰性乳腺癌53例。另收集乳腺良性病變旁正常乳腺組織28例。回顧分析TNBC臨床病理學(xué)指標(biāo),包括腫瘤大小、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等,根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)(AJCC),進(jìn)行臨床分期,患者年齡27～81歲,平均年齡47歲。

1.2 主要試劑

鼠抗人 TIP30 單克隆抗體購(gòu)自廣州吉賽生物科技有限公司。

1.3 免疫組化

標(biāo)本經(jīng)4%甲醛溶液固定>6 h，脫水、石蠟包埋，采用免疫組化二步法檢測(cè)各標(biāo)本中TIP30蛋白的表達(dá)。判斷標(biāo)準(zhǔn)：染色結(jié)果根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[4]制定，采用IP(Intensity+Percentages)評(píng)分:(1)染色強(qiáng)度。細(xì)胞無(wú)染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;(2)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。染色細(xì)胞數(shù)<10%為0分，染色細(xì)胞數(shù)10%～30%為1分，染色細(xì)胞數(shù)31%～60%為2分，染色細(xì)胞數(shù)>60%為3分。(1)、(2)兩項(xiàng)乘積，得分>2分為陽(yáng)性，≤2分為陰性。因此，TIP30蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)強(qiáng)弱以積分量化表示有:0分、1分、2分、3分、4分、6分、9分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料以例數(shù)百分比(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TIP30蛋白在乳腺組織中的表達(dá)情況

TIP30蛋白主要表達(dá)于胞膜與胞質(zhì)，在TNBC組及NTNBC組中TIP30蛋白染色陽(yáng)性率分別為32.5%、56.6%，而在正常乳腺組織中陽(yáng)性率為89.2%。TIP30蛋白在TNBC組中陽(yáng)性表達(dá)與在NTNBC組中陽(yáng)性表達(dá)比較差異有顯著性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；TIP30蛋白在TNBC組陽(yáng)性表達(dá)與在正常乳腺組織中陽(yáng)性表達(dá)比較差異有顯著性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；TIP30蛋白在正常乳腺組織陽(yáng)性表達(dá)與在NTNBC組中陽(yáng)性表達(dá)比較差異有顯著性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。表明TIP30蛋白在乳腺癌組織中低表達(dá)，而在TNBC組中尤為顯著。 見(jiàn)表1。

表1 TIP30蛋白在乳腺組織中的表達(dá)情況

2.2 TIP30表達(dá)與TNBC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

TIP30蛋白在TNBC中的陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤大小、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，腫瘤直徑大于2 cm較小于2 cm、腋窩淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移較無(wú)轉(zhuǎn)移TNBC組織中TIP30蛋白陽(yáng)性率低；TIP30蛋白表達(dá)與絕經(jīng)狀態(tài)、年齡、臨床分期無(wú)相關(guān)性，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 TIP30表達(dá)與TNBC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

乳腺癌屬于高度異質(zhì)性腫瘤,無(wú)論在分子生物學(xué)、組織形態(tài)、免疫表型，還是對(duì)治療的反應(yīng)上均存在極大的個(gè)體差異，TNBC且好發(fā)于40歲以下女性，具有特殊的生物學(xué)行為和臨床病理特征,臨床表現(xiàn)為侵襲性病程,易發(fā)生局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，惡性度高預(yù)后較其他類型的乳腺癌差，生存率低。 目前TNBC術(shù)后主要依靠化療，內(nèi)分泌治療和抗HER-2靶向治療均無(wú)效,因此，尋找新的治療靶點(diǎn)，對(duì)TNBC的治療起到非常積極的作用。

TIP30最早是1997年Shtivelman在用RNA差異顯示技術(shù)比較高轉(zhuǎn)移性小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株及低轉(zhuǎn)移性小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株時(shí)發(fā)現(xiàn)的一種新的抑癌基因，一開(kāi)始命名為CC3。研究結(jié)果顯示，TIP30在人體的各種正常組織中如心、肝、腎、肺、腦，肌肉、骨骼等廣泛表達(dá)[5]。然而在腫瘤組織中，其存在表達(dá)降低或缺失的情況，說(shuō)明TIP30低表達(dá)在這些腫瘤的發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮作用。Ito等的研究結(jié)果顯示，TIP30蛋白的表達(dá)降低或缺失與大腸癌的發(fā)生有關(guān)，張霞等[6]的研究證明在TIP30在肝癌組織中也呈低表達(dá)狀態(tài)。

本研究運(yùn)用免疫組織化學(xué)的方法，對(duì)40例三陰性乳腺癌及53例非三陰性乳腺癌組織的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與正常乳腺組織比較，TIP30在乳腺癌組織中的表達(dá)均較正常組織降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而TIP30在三陰性乳腺癌組織中的表達(dá)則較非三陰性乳腺癌降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這也與TIP30在其他癌組織中的表達(dá)情況相符。從而提示TIP30作為一種抑癌基因，其表達(dá)降低參與了乳腺癌的發(fā)生過(guò)程，增強(qiáng)其表達(dá)可以起到遏制腫瘤的作用。另外，三陰性乳腺癌易發(fā)生復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，惡性度高預(yù)后較其他類型的乳腺癌差，這其中一方面原因可能與TIP30在三陰性乳腺癌組織中的低表達(dá)有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，TIP30的表達(dá)與乳腺癌年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、TNM分期無(wú)相關(guān)性，而與腫瘤大小及腋窩有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。說(shuō)明在腫物較大或者有腋窩淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移的三陰乳腺癌中，TIP30的表達(dá)更低，甚至是缺失的，這提示TIP30的低表達(dá)有利于乳腺癌的生長(zhǎng)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

然而，TIP30的低表達(dá)通過(guò)何種途徑影響乳腺癌的發(fā)生發(fā)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，先前的研究結(jié)果顯示，TIP30基因是一個(gè)有潛在抗血管形成的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，而新血管生成對(duì)于腫瘤生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系已被肯定[7]，這提示TIP30能夠抑制腫瘤血管生成。TIP30在三陰性乳腺癌中的低表達(dá)甚至缺失，有可能促進(jìn)了腫瘤的血管生成，進(jìn)而導(dǎo)致其惡性程度高及易侵襲性，提示TIP30有可能成為TNBC靶向治療的新靶點(diǎn)，但對(duì)其發(fā)揮作用的具體分子通路及表達(dá)調(diào)控點(diǎn)的有待進(jìn)一步研究。

[1] CLEATOR S,HELLER W,COOMBES R C.Triple-negative breast cancer:therapeutic options[J].Lancet Oncol,2007,8(3):235-244.

[2] RAKHA E A,EL-SAYED M E,GREEN A R,etal.Prognostic markers in triple-negative breast cancer[J].Cancer,2007,109(1):25-32.

[3] HUDIS C A,GINANNI L.Triple-negative breast cancer:anunmet medical need[J].Oncologist,2011,1:1 -11.

[4] XIAO H,TAO Y,GREENBLATT J,etal.A cofactor,TIP30,specifically enhances HIV-1 Tat2 activated transcription[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,1998,95(5):2146-2151.

[5] LTO M,JIANG C，KRUMM K，etal．TIP30 deficiency increases susceptibilityto tumorigenesis[J].Cancer Research,2003,63(24):8763-8767．

[6] 張霞,趙健,王皓,等．TIP30基因在肝癌組織中的表達(dá)及意義[J].中華肝膽外雜志,2004,10(10):678-714．

[7] 郁寶銘.胃腸道腫瘤分子生物學(xué)研究的發(fā)展方向[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2005,22(10):1162-1163．