曹夢姣， 劉 琳， 李慧艷， 黨 彤， 賈彥彬，3

包頭醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 1.內(nèi)蒙古消化病研究所； 2.病理科； 3.病原生物學(xué)教研室，包頭醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014030

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MIF基因多態(tài)性與幽門螺桿菌感染及非賁門胃癌關(guān)系的研究

曹夢姣1， 劉 琳1， 李慧艷2， 黨 彤1， 賈彥彬1，3

包頭醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 1.內(nèi)蒙古消化病研究所； 2.病理科； 3.病原生物學(xué)教研室，包頭醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014030

目的 在包頭地區(qū)漢族人群中，探討巨噬細(xì)胞移動抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)基因單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)rs755622與幽門螺桿菌(H.pylori)感染及非賁門胃癌發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系。方法 采用TaqMan方法在288例非賁門胃癌患者和281名正常對照中進(jìn)行基因分型，并用Logistic回歸分析MIF rs755622與非賁門胃癌發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系。在281名正常對照中，使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測H.pylori的感染情況，并用Logistic回歸分析MIF rs755622的等位基因、基因型與H.pylori感染的關(guān)系。結(jié)果 SNP rs755622與非賁門胃癌的發(fā)病風(fēng)險及H.pylori感染無相關(guān)性。結(jié)論 SNP rs755622可能在H.pylori感染及非賁門胃癌的發(fā)病中不起主要作用。

巨噬細(xì)胞移動抑制因子；單核苷酸多態(tài)性；非賁門胃癌；幽門螺桿菌；發(fā)病風(fēng)險

2015年世界衛(wèi)生組織指出：胃癌在全球由于腫瘤引起的死亡中排第3位[1]。2008年世界衛(wèi)生組織雖然報告稱全世界胃癌發(fā)病率在下降，但中國的胃癌發(fā)病率仍在上升。胃癌的發(fā)生是一個多因素、多步驟進(jìn)行性發(fā)展的過程，值得指出的是：環(huán)境因素、幽門螺桿菌(H.pylori)感染及遺傳因素在其中的作用不可忽視。尤其是H.pylori感染，與胃癌的關(guān)系不容小覷[2]。早期胃癌大多無明顯癥狀，或僅有一些非特異性消化道癥狀，住院的胃癌患者中，多數(shù)已經(jīng)進(jìn)展到中晚期，5年生存率不到20%。近年來，許多研究報道宿主的遺傳多態(tài)性與H.pylori感染及胃癌的發(fā)病風(fēng)險相關(guān)，然而，這些報道結(jié)果并不完全一致[3]。

巨噬細(xì)胞移動抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)是由活化T淋巴細(xì)胞分泌，并可抑制單核巨噬細(xì)胞移動的細(xì)胞因子，MIF能抑制巨噬細(xì)胞移動和促進(jìn)遲發(fā)型過敏反應(yīng)發(fā)生中巨噬細(xì)胞的聚集，在免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)中起重要作用[4]。而近年來研究表明MIF在多種腫瘤，如肺癌、乳腺癌、前列腺癌等高表達(dá)，促進(jìn)腫瘤生長和誘導(dǎo)腫瘤血管的形成，使腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移力增強，影響腫瘤分化程度及預(yù)后[5]。

基因多態(tài)性是指在基因組水平上由單個核苷酸的差異所引起的DNA序列的多樣性，是人類可遺傳的變異中最常見的一種。基因多態(tài)性在人類基因組中普遍存在，它是決定個體對疾病的易感性、疾病臨床表現(xiàn)、疾病分期的多樣性及不同個體對藥物反應(yīng)差異性的重要因素之一。MIF基因位于22q11.2，單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)rs755622位于5’非翻譯區(qū)(5’UTG)，是一潛在的功能位點。研究[6-7]顯示，rs755622可能與一些疾病，如前列腺癌、結(jié)腸癌、白血病等發(fā)病風(fēng)險有關(guān)。然而，關(guān)于這一多態(tài)位點與胃癌的關(guān)系目前還未見報道。所以，我們在包頭地區(qū)漢族人群檢測了MIF rs755622與非賁門胃癌及H.pylori感染的關(guān)系，為臨床及科研提供詳確、可靠的實驗數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2008年9月-2010年6月包頭市腫瘤醫(yī)院經(jīng)組織病理學(xué)診斷為非賁門胃癌的患者288例，男224例，女64例，年齡(59.48±11.23)歲(26～83歲)；正常對照來自包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院同期正常體檢者，均無癌癥病史和慢性胃病史，未接受過H.pylori根除治療，共281名，男220名，女61名，年齡(59.10±11.57)歲(26～85歲)。所有樣本均為漢族。病例和對照在性別和年齡分布方面比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1H.pylori感染檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測樣本血清抗H.pylori抗體(試劑盒購自芬蘭BIOHIT公司，批號：09HE1001)，血清抗H.pylori的抗體滴度≥30 EIU為陽性，表示有H.pylori感染。

1.2.2 基因分型：采用酚/氯仿抽提核酸的方法提取外周血白細(xì)胞中的DNA。用TaqMan法進(jìn)行基因分型，操作按照生產(chǎn)廠商的說明進(jìn)行(Applied Biosystems，F(xiàn)oster City，CA，USA)?；蚍中驮诒本┲Z賽基因組有限公司完成。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。用χ2檢驗檢測基因型分布在健康對照中是否符合Hardy-Weinberg平衡；并用χ2檢驗檢測rs755622的等位基因和基因型分布在病例組和對照組中的差異。在正常對照中，用χ2檢驗檢測rs755622的等位基因和基因型在H.pylori感染陽性與陰性人群中的分布差異。用非條件性Logistic回歸計算OR及95%CI評估等位基因、基因型與H.pylori感染、非賁門胃癌發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系，OR值調(diào)整了性別和年齡因素的影響。

2 結(jié)果

2.1 rs755622與H.pylori感染的關(guān)系 在正常對照中，H.pylori陽性組120名，陰性組153名，另外8名基因分型失敗未參與研究。MIF rs755622基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡。其等位基因和基因型分布頻率在H.pylori感染的陽性組和陰性組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，MIF rs755622與H.pylori感染風(fēng)險無相關(guān)性(P>0.05)(見表1)。

表1 rs755622與H.pylori感染的關(guān)系

Tab 1 Correlation of rs755622 withH.pyloriinfection

陽性組[n(%)]a陰性組[n(%)]aχ2值P值OR(95%CI)b基因型 CC82(68．33)90(58．82)4．74900．09311 CG28(23．33)54(35．29)0．57(0．33～0．99) GG10(8．33)9(5．88)1．22(0．47～3．15)等位基因 C192(80．00)234(76．47)0．97710．32291 G48(20．00)72(23．53)0．83(0．54～1．23)

注：a：正常對照中有8個樣本基因分型失敗；b：OR調(diào)整了年齡和性別因素。

2.2 MIF基因多態(tài)性rs755622與非賁門胃癌發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系 MIF rs755622等位基因和基因型分布在非賁門胃癌病例組和正常對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，MIF rs755622與非賁門胃癌的發(fā)病風(fēng)險無相關(guān)性(P>0.05)(見表2)。

3 討論

人類MIF基因定位于染色體22ql1.2。研究[8]表明，MIF在多種癌癥包括食管癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌等組織中高度表達(dá)，與腫瘤生成、治療效果及預(yù)后高度相關(guān)。研究顯示：通過免疫組化方法檢測食管鱗狀細(xì)胞癌中MIF表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)MIF在食管鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)顯著增加，并與腫瘤的臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度密切相關(guān)。還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)MIF在大腸癌及胰腺癌中均高度表達(dá)[9-10]。有學(xué)者通過免疫組化的方法檢測MIF在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)情況，并對胃癌的發(fā)展、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及預(yù)后等關(guān)系做了分析，發(fā)現(xiàn)MIF在胃癌組織中陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織的陽性表達(dá)率，侵及漿膜及漿膜外的表達(dá)高于侵及黏膜層及肌層的表達(dá)，低分化癌病例的表達(dá)高于中高分化型，淋巴轉(zhuǎn)移陽性的病例高于淋巴轉(zhuǎn)移陰性的病例[11]。還有學(xué)者對H.pylori陽性萎縮性胃炎組織及胃癌組織中MIF的表達(dá)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)MIF在以上兩種組織中均高度表達(dá)[12]。提示MIF是研究個體對胃癌易感性的重要候選基因之一。然而，到目前為止，還未見有關(guān)MIF基因多態(tài)性與胃癌關(guān)系的研究報道。

表2 rs755622與非賁門胃癌發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系

Tab 2 Correlation of rs755622 with risk of cardia gastric cancer

病例組[n(%)]a對照組[n(%)]bχ2值P值OR(95%CI)c基因型 CC163(56．99)172(63．00)4．51620．10451 CG109(38．11)82(30．04)1．41(0．98～2．01) GG14(4．90)19(6．96)0．78(0．38～1．61)等位基因 C435(76．05)426(78．02)0．61430．43321 G137(23．95)120(21．98)1．12(0．85～1．48)

注：a：病例組中有2個樣本基因分型失??；b：對照組中有8個樣本基因分型失?。籧：OR調(diào)整了性別和年齡因素。

由于賁門癌從病理特征、遺傳易感性及病因方面都與食管癌相近，與非賁門胃癌在遺傳易感性上有很大差別。因此，在本研究中，為了保證病例樣本的均質(zhì)性，避免出現(xiàn)結(jié)果偏倚，我們將所有病例限定在非賁門胃癌患者。我們的研究結(jié)果顯示：在包頭地區(qū)漢族人群中，SNP rs755622與H.pylori感染、非賁門胃癌發(fā)病風(fēng)險無關(guān)。

人類MIF基因定位于染色體22ql1.2。MIF rs755622單核苷酸位點位于啟動子區(qū)的5′非翻譯區(qū)(5′UTG)，是MIF基因主要的功能性多態(tài)位點。有學(xué)者對MIF整個5′側(cè)翼區(qū)的基因進(jìn)行探究，發(fā)現(xiàn)MIF基因rs755622位點位于啟動子區(qū)，其單核苷酸多態(tài)性與MIF啟動子功能相關(guān)。MIF rs755622基因多態(tài)性以一種細(xì)胞類型依賴的方式影響啟動子活性[13]。并且，已有研究報道了此基因位點多態(tài)性與不同類型腫瘤、疾病的關(guān)系，有學(xué)者對我國臺灣地區(qū)結(jié)腸癌與MIF基因多態(tài)性進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)rs755622基因多態(tài)性在病例組和對照組之間的頻率分布有顯著差異，與結(jié)腸癌的分期、分化也顯著相關(guān)[6]。還有學(xué)者對MIF基因多態(tài)性rs755622與急性髓性白血病(AML)之間的關(guān)系進(jìn)行研究，結(jié)果提示：AML患者GC基因型明顯高于健康對照人群，GC和CC基因型可能是AML的誘發(fā)因素[7]。然而我們的研究顯示MIF rs755622基因多態(tài)性與非賁門胃癌的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)。關(guān)于他們之間的確切關(guān)系還需進(jìn)一步研究確定。

有學(xué)者對頸動脈內(nèi)-中膜厚度(IMT)彩超的患者進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)IMT增厚患者中H.pylori感染與血清MIF水平呈正相關(guān)。他們認(rèn)為MIF是來源于各種炎癥反應(yīng)后，同時也可以誘導(dǎo)多種炎癥因子的產(chǎn)生，而H.pylori感染是一種炎性感染，刺激機體不斷生成各種炎癥因子，他們之間相互作用并惡性循環(huán)下去[14]。還有對感染H.pylori-L型患者胃黏膜細(xì)胞進(jìn)行研究，由于H.pylori-L型菌壁蛋白CagA的刺激，MIF的分泌增加。H.pylori感染陽性患者M(jìn)IF在巨噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞和T細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于H.pylori感染陰性患者，提示H.pylori感染可能與MIF共同促進(jìn)了胃癌的發(fā)生、發(fā)展，其機制可能為胃癌組織被H.pylori入侵后，大批單核巨噬細(xì)胞集結(jié)釋放MIF，同一時間H.pylori入侵可直接激發(fā)胃上皮腫瘤細(xì)胞分泌MIF，而MIF的釋放引起炎癥反應(yīng)激活T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞又釋放大量的MIF，如此循環(huán)則導(dǎo)致腫瘤進(jìn)一步惡化[15]。關(guān)于MIF基因多態(tài)性(rs755622)與H.pylori感染的關(guān)系目前未見報道，因此我們的研究結(jié)果還需進(jìn)一步研究證實。

我們的研究有一些不足之處，首先：對照組來自醫(yī)院的體檢人群，這有可能導(dǎo)致樣本的選擇偏倚。其次：研究樣本量偏小，不足以檢測到rs755622在H.pylori感染、非賁門胃癌發(fā)病風(fēng)險中的微小效應(yīng)。

總之，我們的結(jié)果表明MIF rs755622與非賁門胃癌的發(fā)病風(fēng)險及H.pylori感染風(fēng)險無關(guān)，但仍需加大樣本量，選擇不同地區(qū)和人群進(jìn)行深入研究，以此闡述MIF rs755622與非賁門胃癌及H.pylori感染的確切關(guān)系。

[1]石漢平, 李蘇宜, 王昆華, 等. 胃癌患者營養(yǎng)治療指南[J]. 腫瘤代謝與營養(yǎng)電子雜志, 2015, 2(2): 37-40.

[2]Asaka M. Helicobacter pylori infection and gastric cancer [J]. Intern Med, 2002, 41(1): 1-6.

[3]Francisco G, Menezes PR, Eluf-Neto J, et al. Arg72Pro TP53 polymorphism and cancer susceptibility: a comprehensive meta-analysis of 302 case-control studies [J]. Int J Cancer, 2011, 129(4): 920-930.

[4]Nishihira J. Maerophage migration inhibitory factor (MIF): its essential role in the immune system and cell growth [J]. J Interferon Cytokine Res, 2000, 20(9): 751-762.

[5]Rendon BE, Roger T, Teneng I, et al. Regulation of human lung adenoearcinoma cell migration and invasion by macrophage migration inhibitory factor [J]. J Biol Chem, 2007, 282(41): 29910-29918.

[6]Ramireddy L, Chen WT, Peng CT, et al. Association between genetic polymorphism of the MIF gene and colorectal cancer in Taiwan [J]. J Clin Lab Anal, 2015, 29(4): 268-274.

[7]Ramireddy L, Lin CY, Liu SC, et al. Association study between macrophage migration inhibitory factor-173 polymorphism and acute myeloid leukemia in Taiwan [J]. Cell Biochem Biophys, 2014, 70(2): 1159-1165.

[8]Sato A, Uinukool TS, Kuroda N, et al. Macrophage migration inhibitory factor (MIF) of and jawless fishes: implications for its evolutionary origin [J]. Dev Comp Immunol, 2003, 27(5): 401-412.

[9]寧國龍, 李德群. MIF與惡性腫瘤相關(guān)研究進(jìn)展[J]. 浙江臨床醫(yī)學(xué), 2010, 12(1): 89-91.

[10]Calanadra T, Roger T. Macrophage migration inhibitory factor: a regulator of innate immunity [J]. Nat Rev Immunol, 2003, 13(10): 791-800.

[11]包泱. MIF和MMP-9在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義的研究[D]. 安徽醫(yī)科大學(xué), 2014.

[12]于曉輝, 張雙霞, 戴飛. 幽門螺旋桿菌感染的萎縮性胃炎和胃癌組織中MIF的表達(dá)[J]. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志, 2010, 19(9): 838-841. Yu XH, Zhang SX, Dai F. Expression of MIF in atrophic gastritis and gastric carcinoma withH.pylori[J]. Chin J Gastroenterol Hepatol, 2010, 19(9): 838-841.

[13]Nishihira J, Kuriyama T, Nishino H, et al. Purification and characterization of human macrophage migration inhibitory factor: evidence for specific binding to glutathione and formation of subunit structure [J]. Biochem Mol Biol Int, 1993, 31(5): 841-850.

[14]趙月虎, 吳丹, 蔣偉. 超聲診斷頸動脈內(nèi)—中膜增厚者幽門桿菌感染對血清巨噬細(xì)胞移動抑制因子的影響[J]. 中國臨床藥理學(xué)雜志, 2015, 31(12): 1188-1190. Zhao YH, Wu D, Jiang W, et al. Effect of ultrasound diagnosis of carotid-intimae thickening through ultrasound diagnosis on serum migration inhibitory factor Helicobacter pylori infection [J]. Chin J Clin Pharmacol, 2015, 31(12): 1188-1190.

[15]歐玉榮, 康敏, 周蕾. 胃癌中幽門螺桿菌L型感染與MIF、MMP9、VEGF表達(dá)的關(guān)系[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2014, 34(2): 180-187. Ou YR, Kang M, Zhou L. Infection with L-form of Helicobacter pylori and expressions of MIF, MMP9 and VEGF in gastric carcinoma [J]. J South Med Univ, 2014, 34(2): 180-187.

(責(zé)任編輯：李 健)

《胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志》編輯部成員

段芳齡 李建生 王全楚 馬 軍 陳香宇
李 健 王豪勛 張艷麗 范凱麗 楊 林
冉孟娟

The relationship of single nucleotide polymorphism in MIF gene with non-cardia gastric cancer and Helicobacter pylori infection

CAO Mengjiao1, LIU Lin1, LI Huiyan2, DANG Tong1, JIA Yanbin1,3

1.Inner Mongolia Institute of Digestive Diseases; 2.Department of Pathology, the Second Affiliated Hospital of Baotou Medical College; 3.Department of Pathogenic Biology, School of Basic Medicine and Forensic Medicine, Baotou Medical College, Baotou 014030, China

Objective To investigate the roles of single nucleotide polymorphism (SNP) rs755622 in the macrophage migration inhibitory factor (MIF) gene in Helicobacter pylori (H.pylori) infection and non-cardia gastric cancer in Baotou Han population. Methods MIF rs755622 was genotyped by TaqMan method among 288 patients with non-cardia gastric cancer and 281 normal controls. The relationship between rs755622 and the risk of non-cardia gastric cancer was analyzed by Logistic regression. Among 281 normal controls,H.pyloriinfection was detected by ELISA method, and Logistic regression was used to estimate the associations ofH.pyloriinfection with rs755622 alleles or genotypes. Results SNP rs755622 was not associated with the risk of non-cardia gastric cancer andH.pyloriinfection. Conclusion SNP rs755622 may not play an important role in the risk of non-cardia gastric cancer andH.pyloriinfection.

Macrophage migration inhibitory factor; Single nucleotide polymorphism; Non-cardia gastric cancer; Helicobacter pylori; Risk

10.3969/j.issn.1006-5709.2017.06.018

黨彤，E-mail：dtong999@sina.com；賈彥彬，E-mail：jyb690318@hotmail.com

R735.2

A

1006-5709(2017)06-0693-04

2017-02-11