夏彥飛，李志坤，周家菊，劉沛，苑曼琳

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4種殺線蟲劑對(duì)爪哇根結(jié)線蟲2齡幼蟲及卵塊孵化的影響

夏彥飛*，李志坤，周家菊，劉沛，苑曼琳

(河南科技大學(xué) 林學(xué)院，河南 洛陽 471023)

為了篩選出對(duì)爪哇根結(jié)線蟲防效高的藥劑，采用浸漬法測(cè)試阿維?蘇云菌、克百威?敵、阿維納米?線蟲丹、丁硫?毒死蜱對(duì)爪哇根結(jié)線蟲2齡幼蟲和卵塊的影響。結(jié)果表明，阿維?蘇云菌對(duì)爪哇根結(jié)線蟲2齡幼蟲有較強(qiáng)的致死作用，50 g/L質(zhì)量濃度處理48 h后，線蟲的死亡率為100%，其LC50為9.33 g/L；克百威?敵和阿維納米?線蟲丹活性較差；丁硫?毒死蜱沒有作用。在同等條件下，阿維?蘇云菌對(duì)卵塊孵化抑制率最高，達(dá)99.88%，其次依次為丁硫?毒死蜱為95.63%，阿維納米?線蟲丹為86.22%，克百威?敵為6.06%。

殺線蟲劑；爪哇根結(jié)線蟲；死亡率；抑制率

根結(jié)線蟲是植物病原線蟲之一，其種類繁多，能在農(nóng)作物、林木、花卉、蔬菜、中草藥、雜草等多種植物上寄生。隨著農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整和蔬菜種植面積的大幅擴(kuò)大，根結(jié)線蟲每年造成的損失超過400美元[1]。目前，對(duì)根結(jié)線蟲的防治主要依靠化學(xué)藥劑，但是藥劑品種較少，作用方式單一，線蟲易產(chǎn)生抗藥性，故危害逐年加劇。因此，本研究測(cè)定了目前洛陽市場(chǎng)上銷售的4種殺線蟲復(fù)配劑在室內(nèi)離體條件下，浸漬法處理對(duì)爪哇根結(jié)線蟲2齡幼蟲及卵囊孵化的毒力，皆在篩選出防治爪哇根結(jié)線蟲高效、低毒的藥劑，為爪哇根結(jié)線蟲病害的田間防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

阿維·蘇云菌WP(·abamectin；阿維菌素含量：0.1%；蘇云金桿菌含量：100億活芽孢/g，威海韓孚生化藥業(yè)有限公司生產(chǎn))、5%丁硫·毒死蜱GR (carbosulfan·chlorpyrifos；丁硫克百威含量：1%；毒死蜱含量：4%；紹興天諾農(nóng)化有限公司生產(chǎn))。3%克百威·敵GR(carbofuran·trichlorfon；克百威含量：1.5%；敵百蟲含量1.5%；汝州市試劑廠生產(chǎn))、阿維納米·線蟲丹GR(malathion·abamectin；馬拉硫磷含量：3%；阿維菌素含量：2%；山東百士威農(nóng)藥有限公司生產(chǎn))，藥劑均購于洛陽市關(guān)林農(nóng)藥化工市場(chǎng)。本研究中所用藥劑的質(zhì)量濃度如下：阿維·蘇云菌為10、12.50、16.67、25.00、50 g/L；其余3種藥劑都是：12.50、16.67、25.00、50、100 g/L。處理爪哇根結(jié)線蟲卵塊所用藥劑的質(zhì)量濃度都為100 g/L。

1.2 線蟲和卵塊的收集

本研究中所用蟲源為爪哇根結(jié)線蟲() 2齡幼蟲(J2)。將爪哇根結(jié)線蟲卵塊接種于感病番茄的植物上，25 ℃溫室中培養(yǎng)45 d，然后在體視顯微鏡下收集根結(jié)線蟲的卵塊。大小發(fā)育一致的卵塊用于抑制率試驗(yàn)，其余的卵塊孵化飼養(yǎng)為J2進(jìn)行毒力測(cè)定。所有的卵塊都需要用3% H2O2進(jìn)行表面消毒8 min，再用ddH2O清洗3次后才能使用。采用漏斗分離法收集爪哇根結(jié)線蟲J2，然后用3% H2O2進(jìn)行表面消毒5 min后，ddH2O至少清洗3次，此時(shí)線蟲為試驗(yàn)所用線蟲。

1.3 對(duì)幼蟲的毒力測(cè)定

對(duì)Giannakou等人的浸漬法[2]略加改進(jìn)，用于測(cè)定藥劑對(duì)J2的影響。具體為：吸取2 mL待測(cè)藥液于直徑6 cm表面皿中，然后每皿中放入50頭表面消毒的爪哇根結(jié)線蟲J2，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中分別處理12、24、36、48 h后，于解剖鏡下利用針刺觸碰法判斷線蟲的死活情況，計(jì)算死亡率。每一質(zhì)量濃度的藥劑處理重復(fù)3次，ddH2O處理為對(duì)照。獨(dú)立試驗(yàn)重復(fù)3次。

死亡率=死亡線蟲數(shù)/處理線蟲數(shù)×100%

1.4 爪哇根結(jié)線蟲卵塊抑制率測(cè)定

測(cè)定藥劑對(duì)卵塊抑制率的方法同1.3的步驟，只是處理對(duì)象為5個(gè)大小、發(fā)育一致的爪哇根結(jié)線蟲的卵塊。卵塊在藥劑中浸泡7 d后，收集孵化的線蟲，顯微鏡下計(jì)數(shù)，然后用ddH2O清洗沒有孵化的卵塊至少3次，放入對(duì)應(yīng)編號(hào)的含有2 mL ddH2O的表面皿中繼續(xù)孵化J2，7 d后再次收集線蟲、計(jì)數(shù)。2次孵化線蟲數(shù)加和即為藥劑處理孵化線蟲數(shù)。每一質(zhì)量濃度的藥劑處理重復(fù)3次，清水處理為對(duì)照。獨(dú)立試驗(yàn)重復(fù)3次。

孵化抑制率=(對(duì)照孵化線蟲數(shù)-處理孵化線蟲數(shù))/對(duì)照孵化線蟲數(shù)×100%。

1.5 數(shù)據(jù)處理

用SPSS(SPSS inc., Illinois，USA)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)算藥劑的毒力回歸方程=a+b(代表線蟲的死亡率，代表藥劑質(zhì)量濃度的常用對(duì)數(shù))、半致死質(zhì)量濃度LC50及相關(guān)系數(shù)R。

2 結(jié)果與分析

2.1 4種藥劑對(duì)爪哇根結(jié)線蟲2齡幼蟲的影響

如表1所示，4種藥劑處理爪哇根結(jié)線蟲J2后，不同的藥劑呈現(xiàn)出不同的防效，線蟲的死亡率隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)和藥劑質(zhì)量濃度的增加而增加。阿維·蘇云菌防效最好，其質(zhì)量濃度為10.00、12.50、16.67、25.00、50.00g/L處理48 h后，線蟲的死亡率分別為43.33%、64.33%、72.67%、91.33%、100%；克百威·敵和阿維納米·線蟲丹對(duì)J2呈現(xiàn)出一定毒性，但效果較差，質(zhì)量濃度為100.00 g/L處理48h后，J2的死亡率分別為24.33%、12.00%；丁硫·毒死蜱對(duì)爪哇根結(jié)線蟲沒有作用。由表2可見，阿維·蘇云菌對(duì)爪哇根結(jié)線蟲J2的LC50隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，越來越小，在處理12、24、36、48 h后，對(duì)應(yīng)的LC50依次為13.18、10.96、9.89、9.33 g/L。

2.2 4種藥劑對(duì)爪哇根結(jié)線蟲卵塊孵化率的影響

4種供試藥劑均對(duì)爪哇根結(jié)線蟲的卵塊孵化有抑制作用，如表3所示，抑制率最高的藥劑是阿維·蘇云菌(99.88%)；其次是丁硫·毒死蜱(95.63%)和阿維納米·線蟲丹(86.22%)；最差的是克百威·敵，其抑制率僅僅為6.06%。

3 小結(jié)與討論

綜合以上研究結(jié)果可以得出，阿維·蘇云菌對(duì)爪哇根結(jié)線蟲卵塊和J2都顯示了較強(qiáng)的活性，對(duì)卵塊孵化的抑制率為99.88%，處理線蟲48 h后，J2的死亡率達(dá)到100%，其LC50為9.33g/L；阿維納米·線蟲丹對(duì)J2的活性一般(高濃度處理線蟲48 h，死亡率僅為12%)，但對(duì)卵塊的孵化有較好的活性，其抑制率為86.22%。丁硫·毒死蜱雖然對(duì)爪哇根結(jié)線蟲J2無作用，但對(duì)卵塊的孵化表現(xiàn)了較高的活性，抑制率高達(dá)95.63%。4種供試藥劑中活性最低的是克百威·敵。

表1 4種藥劑對(duì)爪哇根結(jié)線蟲2齡幼蟲的致死率

注：*數(shù)值為3次獨(dú)立試驗(yàn)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤。

表2 阿維·蘇云菌處理不同時(shí)間后對(duì)爪哇根結(jié)線蟲2齡幼蟲的毒力

表3 4種藥劑處理對(duì)爪哇根結(jié)線蟲卵塊孵化的抑制活性

注：*數(shù)值為3次獨(dú)立試驗(yàn)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤。

本研究中所用的藥劑質(zhì)量濃度比其他作者的報(bào)道偏高，推測(cè)可能的原因有3種[3]。一是不同廠家生產(chǎn)的藥劑有效成分含量不一樣；二是線蟲毒性測(cè)定所采用的藥劑大都是原藥，沒有其他填料的影響，而本試驗(yàn)所用的藥劑都是商品化的藥劑；三是由于長(zhǎng)時(shí)間單一用藥，線蟲產(chǎn)生了抗藥性。通過室內(nèi)毒力測(cè)定，本研究篩選出防治爪哇根結(jié)線蟲的首選藥劑是阿維·蘇云菌，其對(duì)卵塊和J2都呈現(xiàn)了較強(qiáng)的毒性，其次是丁硫·毒死蜱和阿維納米·線蟲丹，兩者對(duì)卵塊的孵化也有明顯的抑制作用。為了避免單一用藥造成線蟲的抗藥性，建議3種藥劑交替使用。本研究結(jié)果為根結(jié)線蟲病害的治理提供參考，對(duì)于藥劑的田間防效和使用方法有待于進(jìn)一步研究。

[1] HUANG W K , SUN J H, CUI J K,. Efficacy evaluation of fungusand nematicide avermectin against the root-knot nematodeon cucumber[J]. PLoS One, 2014. 9(2): e89717.

[2] GIANNAKOU I O, KARPOUZAS D G, ANASTASIADES I,. Factors affecting the efficacy of non- fumigant nematicides for controlling root-knot nematodes[J]. Pest Manag Sci, 2005, 61(10): 961-972.

[3] 筱禾編譯. 新穎殺線蟲劑MCW-2對(duì)爪哇根結(jié)線蟲()的防治活性[J]. 世界農(nóng)藥, 2012, 34(2): 25-31.

Effect of Four Nematicides against Egg-hatching and Second-Stage Juveniles of

XIA Yanfei*, LI Zhikun, ZHOU Jiaju, LIU Pei, YUAN Manlin

(Forestry College, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, Henan, China)

In order to select effective nematicides to control, the toxic effect of·abamectin, carbofuran·trichlorfon, malathion·abamectin and carbosulfan·chlorpyrifos on egg masses and second-stage juveniles (J2) were tested in the laboratory by dipping method. The results demonstrated that·abamectin showed a strong toxicity to J2with 100% mortality of 50 g/L treatment 48 h after treatment, and its LC50being9.33 g/L.Carbofuran·trichlorfon and malathion·abamectin had poor activity. Carbosulfan·chlorpyrifos had no effect.·abamectin also had a highest inhibition effect on egg hatching under the same condition. The inhibition ratio of·abamectin, carbosulfan·chlorpyrifos, malathion·abamectin and carbofuran·trichlorfon were 99.88%, 95.63%, 86.22%, 6.06%, respectively.

nematicides;; mortality; inhibition ratio

10.16201/j.cnki.cn31-1827/tq.2017.03.11

{S482.2+93}

A

1009-6485(2017)03-0060-03

國家自然科學(xué)基金(項(xiàng)目編號(hào)：31201558)；河南科技大學(xué)博士啟動(dòng)基金(項(xiàng)目編號(hào)：09001590)

夏彥飛(1980—)，通信作者，男，安徽人，博士，主要從事植物線蟲病害防治工作。E-mail:xyfwcc@163.com。

2017-04-28。