董愛蓮

牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院消化內(nèi)科

關(guān)于乙肝患者中鐵調(diào)素水平與鐵代謝指標(biāo)關(guān)系的研究

董愛蓮

牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院消化內(nèi)科

目的研究乙肝患者血清中鐵調(diào)素水平及其與臨床生化指標(biāo)和鐵代謝指標(biāo)的潛在關(guān)系。方法應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜法（MALDI-TOF-MS）方法測量46名乙肝患者和20名健康對照組的血清鐵調(diào)素水平。用關(guān)聯(lián)性分析方法分析鐵調(diào)素、鐵代謝指標(biāo)和臨床生化指標(biāo)的關(guān)系。結(jié)果健康對照組的鐵調(diào)素水平明顯低于乙型肝炎組。乙肝肝硬化組的鐵調(diào)素水平也明顯低于慢性乙型肝炎組和肝細(xì)胞癌組。在乙肝患者中鐵調(diào)素水平和鐵蛋白水平有明顯的關(guān)聯(lián)性；結(jié)論血清鐵調(diào)素在肝細(xì)胞癌患者中含量明顯增高；鐵調(diào)素可能抑制乙型肝炎病毒的復(fù)制。

乙肝患者；鐵調(diào)素；鐵代謝；乙型肝炎病毒載量

1 背景

據(jù)統(tǒng)計全球大概有450百萬乙肝病毒攜帶者，并以每年50百萬的速度增長。因此，乙肝是世界最常見疾病之一，給人類帶來具大的健康威脅。許多慢性乙型肝炎發(fā)展成肝硬化甚至發(fā)展成肝細(xì)胞，均是死亡率很高的疾病。機(jī)體鐵超載可以促進(jìn)慢性病毒性肝病發(fā)展[1]。研究表明血清鐵蛋白、血清鐵、轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度在慢性乙型肝炎患者中是明顯增高。鐵超載在肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，這可能與鐵在組織中發(fā)生催化反映生成氧化應(yīng)激產(chǎn)物（ROS）有關(guān)，其可以引起肝臟的慢性炎癥有關(guān)[2]。鐵調(diào)素是一種由肝細(xì)胞產(chǎn)生，含有25個氨基酸具有生物活性的的多態(tài)類物質(zhì)，它在細(xì)胞膜上與鐵輸出蛋白—鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相結(jié)合從而促進(jìn)鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的內(nèi)化和分泌，最終減少了鐵的流出，并導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鐵增加[3]。推測鐵調(diào)素是機(jī)體鐵代謝的調(diào)節(jié)因子之一。乙肝患者中增高的鐵量會加速患者發(fā)展成肝硬化或肝細(xì)胞癌。而鐵調(diào)素是由肝臟分泌的能夠調(diào)節(jié)鐵代謝的因子，所以在在慢性肝臟疾病體內(nèi)經(jīng)常會顯示不正常的鐵代謝水平。該實(shí)驗(yàn)對慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化、肝細(xì)胞癌患者體內(nèi)的鐵調(diào)素進(jìn)行檢測。我們發(fā)現(xiàn)乙肝肝硬化患者的鐵調(diào)素水平低于慢性乙型肝炎和肝細(xì)胞癌組。我們還發(fā)現(xiàn)血清鐵調(diào)素和乙肝患者鐵指標(biāo)之間存在潛在的關(guān)系。

2 材料和方法

2.1 患者

本研究共納入2015～2016年牡丹江紅旗醫(yī)院收治的46例乙肝患者。其中16例慢性乙型肝炎患者；14例乙肝肝硬化患者；16例肝細(xì)胞癌患者。通過檢測乙肝病毒表面抗原和乙肝DNA，明確慢性乙型肝炎的診斷，所有患者均為丙肝陰性。乙肝肝硬化和肝細(xì)胞癌是通過計算機(jī)斷層掃描或磁共振成像診斷的。此外，在乙肝肝硬化組中，根據(jù)Child-Pugh分級（5名Child-PughA、5名Child-PughB和4名Child-PughC）評估肝功能程度。對照組為20例健康志愿者，正常轉(zhuǎn)氨酶水平、鐵指標(biāo)、HBsAg陰性。

2.2 血清收集

血樣在夜間禁食后于晨起6點(diǎn)至7點(diǎn)30分之間采集。樣品以4000 rpm離心10min，上清液轉(zhuǎn)移到新管。然后分成兩等份（1ml每管），樣品存放在-80°C冰箱中。

2.3 實(shí)驗(yàn)室檢測方法

血液生化指標(biāo)，包括凝血酶原時間、肝酶[丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）水平，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、]、血清總膽紅素（TBIL）、白蛋白和血紅蛋白（Hb）、C-反應(yīng)蛋白（CRP）、血清鐵蛋白和鐵的含量，和總鐵結(jié)合力（TIBC）由實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)測定，采用酶聯(lián)免疫分析法檢測乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）。用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測乙型病毒載量。上述臨床指標(biāo)均在牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院完成。

2.4 鐵調(diào)素檢測

首先采用優(yōu)化的納米多孔二氧化硅納米組織芯片選擇性地富集鐵調(diào)素，然后用基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜法（MAL?DI-TOF-MS）測定血清鐵調(diào)素水平。

2.5 統(tǒng)計學(xué)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS統(tǒng)計軟件包進(jìn)行分析。P值＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

在各組間鐵調(diào)素水平顯著不同。慢性乙型肝炎患者比對照組有較高的平均鐵調(diào)素水平（9.8±5ng/mL、4.8±2 ng/mL）。肝細(xì)胞癌患者中鐵調(diào)素也明顯升高（9.3±4.9 ng/mL），乙肝肝硬化患者的平均血清鐵調(diào)素水平（4.9±1.9 ng/mL）與對照組無顯著差異。其中各Child Pugh組患者間的鐵調(diào)素水平無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但Child-puh C類患者鐵調(diào)素稍低。將乙肝患者血清鐵調(diào)素水平與臨床指標(biāo)之間的相關(guān)性進(jìn)行了研究，血清鐵蛋白（r=0.41，P＜0.05）和白蛋白（r=0.32，P＜0.05）、乙型肝炎DNA載量水平（r= 0.601，P＜0.05）分別與乙肝患者血清鐵調(diào)素水平呈正相關(guān)。

4 討論

鐵調(diào)素是維持鐵代謝平衡的關(guān)鍵因素，有研究表明在慢性肝病中鐵調(diào)素的表達(dá)與血清鐵蛋白濃度或肝臟鐵負(fù)荷程度密切相關(guān)。研究表明鐵調(diào)素前體水平與慢性乙型肝炎患者血清鐵蛋白呈正相關(guān)。最近的一項(xiàng)研究提出，HCV誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激通過增加組蛋白去乙?；富钚砸种畦F調(diào)素表達(dá),故推測HCV可能對鐵調(diào)素的表達(dá)有一定影響。另一項(xiàng)研究提出鐵調(diào)素前體水平在丙肝肝硬化階段明顯低于乙肝肝硬化階段。先前的研究表明乙肝肝硬化患者鐵調(diào)素前體水平比慢性乙型肝炎患者和對照組均顯著降低[15]。我們的研究針對乙型肝炎病毒感染的不同階段患者的鐵調(diào)素進(jìn)行測量。研究結(jié)果表明，慢性乙型肝炎患者的鐵調(diào)素含量較乙肝肝硬化及對照組相比是增高的。鐵調(diào)素的生產(chǎn)一般是受炎癥刺激或鐵過載的影響[4]。乙型肝炎患者的白細(xì)胞介素-6（IL-6）水平顯著高于健康對照組[5]。因此我們推斷乙型肝炎患者鐵調(diào)素水平增高與炎癥因子刺激有關(guān)。另一方面，鐵含量增高也是導(dǎo)致鐵調(diào)素水平增加的另一個重要因素。鐵調(diào)素是一種鐵調(diào)節(jié)肽，能感受體內(nèi)的鐵水平從而調(diào)節(jié)其濃度。在我們的研究中，我們發(fā)現(xiàn)慢性乙型肝炎患者血清鐵水平高于對照組。一項(xiàng)研究表明，丙型肝炎病毒誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激產(chǎn)物（ROS）可能通過C/EBP-α途徑最終降低鐵調(diào)素生成。然而，我們不能確定乙型肝炎病毒對鐵調(diào)素表達(dá)是否存在促進(jìn)或是抑制作用，當(dāng)然這需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。我們的研究結(jié)果還表明，乙肝肝硬化患者水平比慢性乙型肝炎患者和肝細(xì)胞癌患者有較低的鐵調(diào)素水平。因?yàn)殍F調(diào)素是由肝臟合成的，所以肝細(xì)胞減少的乙肝肝硬化患者的肝臟合成能力降低。在我們的研究中，我們也發(fā)現(xiàn)肝硬化患者中提示肝臟合成功能的白蛋白水平明顯較低，這表明鐵調(diào)素與其有相同的變化趨勢。而且Child Pugh C的乙肝肝硬化患者鐵調(diào)素水平均低于患者Child PughB及Child PughA。這個結(jié)果強(qiáng)烈表明，鐵調(diào)素水平可反映肝功能損害程度。在我們的研究中還發(fā)現(xiàn)，鐵調(diào)素水平也影響白蛋白和乙型肝炎病毒載量。此外，由于鐵調(diào)素水平在乙肝肝細(xì)胞癌組顯著高于乙肝肝硬化組，該結(jié)果與以前研究不一致，先前的研究表明鐵調(diào)素mRNA水平在乙肝肝細(xì)胞癌組織中明顯降低。先前的研究表明鐵含量與肝臟的炎癥程度呈正相關(guān)，鐵元素對于腫瘤細(xì)胞的增殖是必需的。這也可以解釋為什么血清鐵水平在乙肝肝硬化患者比慢性乙型肝炎患者和肝細(xì)胞癌患者減少。而且腫瘤細(xì)胞本身可能表達(dá)鐵調(diào)素而增加體內(nèi)水平。在我們的研究中，我們觀察到血清鐵調(diào)素水平與所有乙肝患者的血清鐵蛋白水平呈正相關(guān)。另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)鐵調(diào)素前體水平與乙肝患者血清鐵蛋白水平呈負(fù)相關(guān)。在肝臟疾病中鐵調(diào)素水平可能受除鐵以外的其它參數(shù)影響。研究還表明經(jīng)鐵處理的HepG2細(xì)胞中乙型肝炎病毒復(fù)制增加，無鐵處理的細(xì)胞乙型肝炎病毒復(fù)制減少[6]。我們的研究發(fā)現(xiàn)鐵調(diào)素與病毒載量呈正相關(guān)（r=0.601，P＜0.05）。因此，我們推斷鐵調(diào)素可通過減少體內(nèi)鐵水平從而抑制HBV的復(fù)制。鐵元素是腫瘤細(xì)胞增殖和生長必不可少的微量元素。在慢性病毒性肝炎或肝硬化患者體內(nèi)鐵負(fù)荷增多。因此，鐵調(diào)節(jié)激素—鐵調(diào)素表達(dá)下降可能加速腫瘤的生長。故我們推測鐵調(diào)素可能在乙肝患者疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。以下是我們研究中存在的一些局限性。首先，本研究采用的是橫斷面設(shè)計，所以我們不能提供鐵調(diào)素與乙肝患者體內(nèi)鐵水平之間存在明確的關(guān)系。其次，我們的研究樣本量小，需要更大的樣本群體來驗(yàn)證這項(xiàng)研究的結(jié)果。

5 結(jié)論

乙肝肝硬化患者鐵調(diào)素水平顯著低于肝癌患者。此外，血清鐵調(diào)素水平與血清鐵蛋白水平與患者乙型肝炎DNA載量之間均存在負(fù)相關(guān)關(guān)系。這表明在乙肝患者中鐵調(diào)素能夠調(diào)節(jié)鐵代謝，并且鐵調(diào)素對乙肝病毒的復(fù)制有一定的抑制作用。

[1]Di Bisceglie A,Axiotis C,Hoofnagle J,et al.Measurements of iron status in patients with chronic hepatitis.Gastroenterology,1992, 102(6)：2108-2113.

[2]Hentze MW,Muckenthaler MU,Andrews NC.Balancing Acts：Molecular Control of Mammalian Iron Metabolism[J].Cell,2004,117(3)：285-297.

[3]Ganz T.Hepcidin,a key regulator of iron metabolism and medi?ator of anemia of inflammation[J].Blood,2003,102(3)：783.

[4]Ganz T,Nemeth E.Iron imports.IV.Hepcidin and regulation of body iron metabolism[J].American Journal of Physiology-Gastrointesti?nal and Liver Physiology.2006,290(2)：G199-G203.

[5]Wang J,Wang X,Liu P.Detection of serum TNF-alpha,IFN-beta,IL-6 and IL-8 in patients with hepatitis B[J].World journal of gastroenterology：WJG,1999,5(1)：38-40.

[6]Chouteau P,Le Seyec J,Saulier-Le Drean B,et al.Inhibition of hepatitis B virus production associated with high levels of intracellular viral DNA intermediates in iron-depleted HepG2.2.15 cells[J].Journal of hepatology,2001,34(1)：108-113.

董愛蓮（1986-），女，碩士，醫(yī)師，從事臨床消化系統(tǒng)疾病方面的研究。