王春勇+劉開潤+王翠蓮+張映芬+徐紅星+張四春+夏黎亮

摘要 采用靜態(tài)生物毒性試驗方法研究廢棄烤煙葉對鯽魚的急性毒性，為養(yǎng)殖戶提供一個參考的使用濃度。結果表明，水溫20 ℃時，采用浸泡法的烤煙葉對148 g鯽魚的96 h LC50為132.71 g/m3，安全濃度為13.3 g/m3；用掛袋法的烤煙葉對148 g鯽魚的96 h LC50為118.84 g/m3，安全濃度為11.9 g/m3，對25.3 g鯽魚的96 h LC50為104.23 g/m3，安全濃度為10.4 g/m3。

關鍵詞 鯽魚；烤煙葉；半數(shù)致死濃度；安全濃度；浸泡法；掛袋法

中圖分類號 S942 文獻標識碼 B 文章編號 1007-5739（2017）11-0222-02

Toxicity Study of Flue-cured Tobacco Leaves on Carassius auratus

WANG Chun-yong 1 LIU Kai-run 1 WANG Cui-lian 1 ZHANG Ying-fen 1 XU Hong-xing 2 ZHANG Si-chun 3 XIA Li-liang 4 *

（1 Tonghai County Aquatic Workstation in Yunnan Province，Tonghai Yunnan 652700； 2 Yuxi City Hongta District Reservoir Management Office； 3 Jiang chuan Fishery Technology Extension Station in Yuxi City； 4 Yuxi City Aquatic Workstation）

Abstract The static biotoxicity test method was applied to research acute toxicity to Carassius auratus of waste flue cured tobacco in order to provide a reference concentration for farmers.The results showed that when the water temperature was 20 ℃，the 96 h LC50 of flue cured tobacco by soaking method on 148 g Carassius auratus was 132.71 g/m3，the safe concentration was 13.3 g/m3.The 96 h LC50 of flue cured tobacco by hang bag method on 148 g Carassius auratus was 118.84 g/m3，safe concentration was 11.9 g/m3，the 96 h LC50 on 25.3 g Carassius auratus was 104.23 g/m3，and the safe concentration was 10.4 g/m3.

Key words Carassius auratus；flue cured tobacco；LC50；safe concentration；soaking method；hang bag method

等級外的廢棄烤煙葉能有效預防和治療魚類細菌性疾病[1]和殺滅魚體寄生蟲[2]，防治魚病方法簡便、成本低廉，在漁業(yè)生產(chǎn)上應用比較廣泛，使用劑量、方法盡管有許多參考，如潑灑（0.25 g/m3[1]）、掛袋（扎成小捆堆放在進水口處[3]），但養(yǎng)殖戶在實際應用中劑量使用隨意性較強，用量過大造成養(yǎng)殖魚類死亡的事件時有發(fā)生。為了給養(yǎng)殖戶提供一個極限的劑量參考值，減少養(yǎng)殖戶超劑量使用造成的損失，通海縣水產(chǎn)工作站選擇不同規(guī)格的鯽魚，采用浸泡和掛袋2種給藥方式，開展了等級外廢棄烤煙葉對鯽魚的毒性試驗研究。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗魚缸。試驗魚缸6個，規(guī)格：長×寬×高為1.2 m×0.6 m×0.7 m。

1.1.2 恒溫棒。柏卡樂牌自動恒溫棒，額定電壓220～240 V，額定頻率50～60 Hz，額定功率500 W，用于恒定試驗過程中試驗水體溫度，保證各試驗水體水溫一致。

1.1.3 增氧設備。松寶SB-988增氧泵，額定電壓220～240 V，額定頻率50～60 Hz，額定功率12 W，出氣量4×4 L/min。使用增氧泵是為了使試驗過程中試驗水體有充足的溶氧，保證試驗魚不受缺氧干擾意外死亡。

1.1.4 試驗水源。試驗水源采用飲用自來水。

1.1.5 供試魚類。品種為2齡鯽魚，平均尾重（148±5）g；1齡鯽魚魚苗，平均尾重（25.3±2.0）g。

1.1.6 供試烤煙葉。試驗用烤煙葉為去年收集的當年廢棄的等級外烤煙葉，收集后用塑料袋密封保存。

1.1.7 電子天平。稱量用電子天平為上海舜宇恒平科學儀器有限公司生產(chǎn)的FB224電子天平，技術參數(shù)為Max：220 g、e：1 mg、Min：0.01 g、d：0.1 mg；電源：DC 12 V 1 000 mA；功耗：12 VA。

1.2 試驗方法

相同水源水質(zhì)、相同水溫條件下，利用同一品種不同規(guī)格、同一規(guī)格不同給藥方法，在不同濃度梯度下進行試驗。

1.2.1 試驗水質(zhì)處理。試驗的前1 d把自來水分別注入試驗的6個魚缸，放入恒溫棒，把溫度調(diào)節(jié)到22 ℃，同時向每個試驗魚缸中放入2個增氧泵氣石，并打開增氧泵，進行曝氣，消除自來水中殘留的有效氯，每次試驗前統(tǒng)一曝氣12 h。

1.2.2 烤煙葉給藥方法。①浸泡法：在試驗前把烤煙葉浸泡在水中一段時間后，過濾除去烤煙葉，用水溶液對148 g 2齡鯽魚進行毒性試驗。浸泡方法是按1∶10的比例浸泡，把500 g烤煙葉放入5 000 g的水中浸泡24 h，過濾后及時使用。試驗設計濃度為120、126、131、136、141、146 g/m3。②掛袋法：把烤煙葉裝入袋子中，直接放入試驗魚缸，對148 g 2齡鯽魚和25.3 g 1齡鯽魚進行毒性試驗，此種方法簡單方便，在生產(chǎn)實踐中應用廣泛。方法為用40目篩網(wǎng)制作成15 cm×20 cm的袋子，根據(jù)梯度濃度計算烤煙葉用量，稱量后放入袋子直接放入魚缸。為保證藥袋及時沉入水中，在藥袋中放入一小石塊。試驗設計濃度分別為106、111、116、121、126、131 g/m3和91、96、101、106、111、116 g/m3。

1.2.3 烤煙葉加工。因為每次試驗，每一個試驗魚缸使用的烤煙葉數(shù)量較小，為了減少烤煙葉質(zhì)量差異對試驗結果的影響，在試驗之前把烤煙葉人工切割加工成2 cm×2 cm的烤煙葉碎塊，再把加工好的烤煙葉碎塊混合攪拌均勻，然后裝入大塑料袋密封待用。

1.2.4 增氧。使用雷磁JPB-607A型溶解氧測定儀，定期測定試驗水體含氧量并及時增氧，使溶解氧保持在5～6 mg/L之間。

1.2.5 試驗實施。①預備試驗：從7.5 g/m3開始通過14個梯度找出了鯽魚出現(xiàn)死亡及全部死亡的濃度范圍。②正式試驗：根據(jù)預備試驗結果按相等間距梯度開展烤煙葉對鯽魚的毒性試驗，每個魚缸水量0.4 m3、魚數(shù)10尾，水溫22 ℃，試驗觀察時間96 h，統(tǒng)計死亡數(shù)量，用Bliss法計算LC50值。試驗中定期監(jiān)測水溫和溶解氧，使水溫保持22 ℃，溶解氧保持在5～6 mg/L之間。

1.3 評價計算方法

1.3.1 半數(shù)致死量計算（Bliss法）。試驗中半致死量的計算是采用半致死量（LC50）Bliss法的評價與計算[4]，通過Bliss法分別計算出烤煙葉對鯽魚的96 h LC5、96 h LC50、96 h LC95值。

1.3.2 安全濃度計算。安全濃度計算是根據(jù)Bliss法得出的烤煙葉對鯽魚的96 h LC50（半致死濃度），按照安全濃度（satfety concentration，SC）經(jīng)驗公式，即安全濃度（SC）=96 h LC50×0.1，計算出試驗烤煙葉對鯽魚的安全濃度。

2 結果與分析

2.1 規(guī)格為148 g 2齡鯽魚浸泡法試驗

采用浸泡法，對平均尾重為148 g的2齡鯽魚開展烤煙葉浸泡溶液毒性試驗，結果見表1。根據(jù)浸泡法不同濃度對平均尾重為148 g的2齡鯽魚進行攻毒試驗后得出的死亡情況，按照Bliss法計算96 h LC5、96 h LC50、96 h LC95值，并根據(jù)安全濃度經(jīng)驗公式計算安全濃度。

回歸方程y（Probit）=-80.025+40.051 log（D）。半數(shù)致死量LC50=132.71 g/m3，LC50（Feiller校正）95%的可信限為129.36～136.94 g/m3，LC5=120.74 g/m3，LC95=145.87 g/m3，安全濃度SC=13.3 g/m3。

2.2 規(guī)格為148 g 2齡鯽魚掛袋法試驗

采用掛袋法，對平均尾重為148 g的二齡鯽魚開展烤煙葉浸泡溶液毒性試驗，試驗結果見表2。根據(jù)掛袋法不同濃度對平均尾重為148 g的2齡鯽魚進行攻毒試驗后得出的死亡情況，按照Bliss 法計算96 h LC5、96 h LC50、96 h LC95 值，并根據(jù)安全濃度經(jīng)驗公式計算安全濃度。

回歸方程y（Probit）=-70.14+36.213 log（D）。半數(shù)致死量LC50=118.84 g/m3，LC50（Feiller校正）95%的可信限為115.64～122.11 g/m3，LC5=107.03 g/m3，LC95=131.94 g/m3，安全濃度SC=11.9 g/m3。

2.3 規(guī)格為25.3 g 1齡鯽魚掛袋法試驗

采用掛袋法，對平均尾重為25.3g的1齡鯽魚開展烤煙葉浸泡溶液毒性試驗，結果見表3。

回歸方程y（Probit）=-64.753+34.566 log（D）。半數(shù)致死量LC50=104.23 g/m3，LC50（Feiller校正）95%的可信限為101.21～107.34 g/m3，LC5=93.409 g/m3，LC95=116.3 g/m3，安全濃度SC=10.4 g/m3。

2.4 不同給藥方式、不同規(guī)格鯽魚的LC5、LC50、LC95及安全濃度值對比

不同給藥方式、不同規(guī)格鯽魚的LC5、LC50、LC95及安全濃度值對比見圖1。不同給藥方式、不同規(guī)格的鯽魚，其LC5、LC50、LC95各不相同。同一給藥方式（掛袋法），魚體規(guī)格越小其耐藥性越低，即隨著魚體規(guī)格的變小，烤煙葉對鯽魚的毒性96 h內(nèi)致死濃度、半致死濃度、全部死亡濃度及安全使用濃度逐步降低；相同魚體規(guī)格浸泡法烤煙葉對鯽魚的96 h內(nèi)致死濃度、半致死濃度、全部死亡濃度及烤煙葉安全使用濃度大于掛袋法。

3 結論與討論

3.1 在穩(wěn)定的試驗環(huán)境下，不同規(guī)格鯽魚、不同給藥方式的96 h LC50值各不相同

當水溫維持在（22.0±0.2）℃，溶解氧為5～6 mg/L時，浸泡法148 g 2齡鯽魚的96 h LC50為132.71 g/m3，96 h LC5為（下轉第226頁）

（上接第223頁）

120.74 g/m3，96 h LC95為145.87 g/m3；掛袋法148 g 2齡鯽魚的96 h LC50為118.84 g/m3，96 h LC5為107.03 g/m3，96 h LC95為131.94 g/m3；25.3 g 1齡鯽魚的96 h LC50為104.23 g/m3， 96 h LC5為93.41 g/m3，96 h LC95為116.3 g/m3。

3.2 小規(guī)格魚體的耐藥性低于大規(guī)格魚體

采用相同的給藥方法（掛袋法），發(fā)現(xiàn)148 g 2齡鯽魚的96 h LC50值（118.84 g/m3）大于1齡鯽魚的96 h LC50值（104.23 g/m3），說明小規(guī)格鯽魚對烤煙葉的耐藥性低于大規(guī)格鯽魚[5-6]。

3.3 浸泡法96 h LC50值大于掛袋法

相同規(guī)格的鯽魚（148 g 2齡鯽魚），采用浸泡法其96 h LC50為132.71 g/m3；采用掛袋法，其96 h LC50為118.84 g/m3，浸泡法96 h LC50值大于掛袋法的96 h LC50值。因為浸泡時烤煙葉與水的比例為1∶10，藥物有效成分不能全部釋放在水中，還有部分殘留在烤煙葉中，導致不同給藥方式的96 h LC50值不一致。

3.4 不同給藥方式、不同規(guī)格鯽魚的安全濃度

水溫在（22.0±0.2）℃、溶解氧在5～6 mg/L之間時，浸泡法148 g 2齡鯽魚的安全濃度為13.3 g/m3；采用掛袋法的148 g 2齡鯽魚安全濃度為11.9 g/m3，25.3 g 1齡鯽魚的安全濃度為10.4 g/m3。

4 參考文獻

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[2] 陳修春.煙葉防治魚病技術[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，1995（10）：22.

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[6] 褚新梅.煙葉在魚病防治中的應用[J].河北漁業(yè)，2006（7）：56.