李昭君

【摘要】目的：了解冰片對于血腦屏障開放的意義[1]。方法：將40只小白鼠平均分成兩大組，生理組和病理組，然后將生理組又分為對照組和冰片組；藥理組分為模擬腦外傷組以及模擬腦外傷加冰片組，每組十只，雌雄摻半。然后開始實驗，將四組小白鼠按照實驗要求進行處理，切片取材，使用四百倍的顯微鏡對每一只小鼠隨機觀察10條微血管。結(jié)果：對照組腦微血管內(nèi)皮細胞大部分都呈現(xiàn)陰性；冰片組中的細胞陽性并沒有得到增強，也是大部分呈現(xiàn)陰性；模擬腦外傷組細胞陽性有了很清晰的提高，大部分呈現(xiàn)中度陽性，而腦傷+冰片組的細胞陽性又出現(xiàn)了清晰地衰減，大部分呈現(xiàn)了陰性。討論：冰片促進BBB開放和腦外傷造成的BBB病理性開放有顯著區(qū)別。

【關(guān)鍵詞】冰片；腦微血管內(nèi)皮細胞；血腦屏障

【中圖分類號】R285 【文獻標識碼】A 【文章編號】2095-6851（2017）06-0-01

引言：大腦是人體的重要器官，其損傷會帶來人體機能的相對退化。人體血腦屏障是對大腦的一種保護，但是保護大腦的同時，也隔絕了一部分藥物的進入，為醫(yī)學帶來了難題。冰片可以促進血腦屏障的開放[2]，有效促進醫(yī)學的進步。

1.資料與方法

1.1 一般資料

從醫(yī)藥大學實驗中心購買40只小白鼠，雌雄摻半，體重平均值為（251±19.8）克，平均分成兩組：生理組和病理組，其中生理組又分為對照組和冰片組；藥理組分為模擬腦外傷組和模擬腦外傷加冰片組（簡單記為腦傷+冰片組），每一組十只小白鼠，雌雄摻半。

1.2 藥物

從藥材公司購買合成冰片[3]，主要有94.6%的右旋龍腦，0.8%的龍腦香二醇酮，1.5%的龍腦香醇酮，以及1%的β-欖香烯，其中雜質(zhì)的含量不足0.5%。把他調(diào)配成百分之十的冰片石蠟油溶液。同時還需要購買iNOS多克隆抗體和DAB染色試劑盒以及多聚甲醛。

1.3 方法

對照組小白鼠先服用15ml/kg的石蠟油，然后40分鐘后用戊巴比妥鈉進行麻醉，將其固定為仰臥位，進行開胸手術(shù)將其心臟裸露在外，往左心室注入37℃的生理鹽水，隨后切開右心耳，將液體排出，等到開始流出澄清的液體的時候，使用大注射器及時的向左心室注射一百毫升濃度為百分之四的多聚甲醛，然后快速完成取腦，浸泡在多聚甲醛溶液里，浸泡一天之后進行石蠟包埋，切片作為備用。

冰片組小白鼠服用與對照組等量的百分之十的冰片石蠟油溶液，在40分鐘后采取和對照組相同的步驟完成取腦，再進行石蠟包埋后切片備用。

模擬腦傷組的小白鼠先進行麻醉，然后將其固定為俯臥位，在頭部中線偏左的位置做一個頭皮切口，使用牙科鉆在該位置鉆一個半徑為3毫米的骨窗，要注意保證腦硬膜的完整，使用落體致傷模具對小白鼠的腦硬膜進行猛烈撞擊，使其形成局部腦挫裂傷，六小時候之后采用對照組的方法進行材料選取。

腦傷+冰片組的小白鼠采用模擬腦傷組同樣的方法使其形成腦傷，形成傷口六小時之后采用冰片組的方法完成材料選取。

1.4 腦微血管誘導性NOS免疫組化染色

在同樣的環(huán)境里完成所有切片的免疫組化鏈菌素親生物素—過氧化酶連結(jié)法染色，DAB顯色，蘇木精復染，然后在六十攝氏度的環(huán)境里進行烘干，用中性樹膠進行密封固定，在400倍的顯微鏡下進行觀察。其中將已知陽性片作為陽性對照，使用PBS作為陰性對照。

2.結(jié)果

從每一個組的十只小白鼠中任選一片切片，在每張切片中任意選擇十條血管進行觀察。然后對血管內(nèi)皮細胞陽性率和染色體顏色進行記錄分析。注意：呈現(xiàn)棕黃色的染色體進行的是陽性反應(yīng)。下表中表1 為評分標準，表2是實驗結(jié)果。

從表2中可以看到：對照組腦微血管內(nèi)皮細胞大部分都呈現(xiàn)陰性；冰片組中的細胞陽性并沒有得到增強，同樣大部分呈現(xiàn)陰性；模擬腦外傷組細胞陽性有了很清晰的提高，大部分呈現(xiàn)中度陽性，而腦傷+冰片組的細胞陽性又出現(xiàn)了清晰地衰減，大部分呈現(xiàn)了陰性。

3.討論

對照組小白鼠大腦切片中的腦微血管內(nèi)皮細胞呈現(xiàn)陰性，說明正常的小白鼠腦微血管里不呈現(xiàn)iNOS；

冰片組的小白鼠使用了冰片以后，切片呈現(xiàn)的依舊是陰性，表示冰片不會使正常的小白鼠腦微血管中出現(xiàn)iNOS；

模擬腦外傷組的小白鼠腦微血管里出現(xiàn)了大量的iNOS，從iNOS中釋放的NO使BBB病理性開放；

模擬腦外傷加冰片組使腦部出現(xiàn)損傷的小白鼠腦微血管中的iNOS衰減，造成NO量的減少，NO的大量釋放是小白鼠大腦出現(xiàn)的病理性損傷減弱，很大程度上保護了腦組織。

實驗告訴我們：冰片促BBB開放和腦外傷造成的BBB病理性開放是不一樣的。

4.結(jié)束語

有學者研究聲明：NO會影響微血管的通透性，會對BBB通透性產(chǎn)生很大的影響。iNOS會造成遲發(fā)性神經(jīng)損傷，同時也會造成腦缺血和腦水腫。在正常生理狀態(tài)中，腦微血管不會表現(xiàn)出iNOS，同時冰片也不能使其產(chǎn)生iNOS，也就是說促BBB開放和iNOS是沒有關(guān)聯(lián)的。而外傷可以很大程度上促進iNOS的釋放，可以造成一連串的病理反應(yīng)，BBB病理性開放。從實驗中我們可以分析出來，冰片促BBB開放和病理性開放是有著很大區(qū)別的，冰片對大腦是有一定的保護價值的，它促血屏障開放不會給大腦帶來損傷[4]。

參考文獻

[1]張珉，張俊鈺，鐘武.血腦屏障開放方法研究進展[J].國際藥學研究雜志，2016，2（43）：126-133.

[2]奚卉.冰片促進血腦屏障開放機制的探討[J].安徽醫(yī)學，2013，30（6）：696-698.

[3]王剛，曾南，王建，等.合成冰片影響血腦屏障開放促槲皮素腦吸收的研究[J].中藥藥理與臨床，2013，28（1）：65-68.

[4]施文甫，羅安明.冰片在腦部疾病中的應(yīng)用[J].貴陽中醫(yī)學院學報，2013，32（1）：59-61.