畢 娜 詹立晶 楊思廣

（吉林市食品藥品檢驗所，吉林吉林132000）

正骨百健散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

畢 娜1詹立晶2楊思廣3

（吉林市食品藥品檢驗所，吉林吉林132000）

目的就正骨百健散的原材料檢驗方法及注意事項進行分析。方法通過顯微鑒別、薄層色譜分別對白芷、紅花、五加皮、山茱萸、牡蠣等中藥進行鑒別，鑒別的過程進行系統(tǒng)剖析，并對鑒別過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)和重點步驟做歸納和總結(jié)。結(jié)果收載紅花、龍血竭、牡蠣的顯微特征作為顯微鑒別項。白術(shù)、山茱萸薄層色譜陰性有干擾；薄層鑒別只收載了三七、龍血竭。結(jié)論該方法簡便易行，準(zhǔn)確可靠，可用于正骨百健散的質(zhì)量控制。

正骨百健散；顯微鑒別；薄層色譜；三七；龍血竭

正骨百健散由白芷、紅花、五加皮、山茱萸、牡蠣等組成。主藥五加皮、牡蠣，用于強筋壯骨；臣藥再輔以三七、龍血竭生血、養(yǎng)血，改善肢體血液循環(huán)；再輔以佐藥百合、白術(shù)用于安神益氣、健脾開胃，白芷溫散結(jié)氣，以山茱萸促骨痂生長，預(yù)防延遲愈合，此方多用于骨折中晚期，具有強筋壯骨之功效。為有效地控制其質(zhì)量，對其十味組分進行顯微、薄層色譜法定性鑒別，以確保其內(nèi)在質(zhì)量。

1 實驗材料

1.1 樣品正骨百健散批號為：20150721-1、20150721-2、20150721-3。

1.2 對照品白芷，批號：120945-201309；白術(shù)，批號：120925-201310；百合，批號：121100-200402；三七，批號：120941-201409；龍血竭，批號：121252-201303；三七皂苷R1，批號：0745-200109；人參皂苷Rb1，批號：110704-201424；人參皂苷Rg1，批號：110703-200726；熊果酸，批號：110742-200314；以上對照藥材和對照品均由中國食品藥品檢定研究院提供。

1.3 薄層板硅膠G預(yù)制板、硅膠GF254預(yù)制板由青島海洋化工廠分廠提供。薄層色譜所用試劑均為分析純。

1.4 原料的來源

1.4.1 白芷系為傘形科植物白芷或杭白芷的干燥根。夏、秋間葉黃時采挖，除去須根和泥沙，曬干或低溫干燥[1]105。

1.4.2 紅花系為菊科植物紅花Carthamus tinctorius L.的干燥花。夏季花由黃變紅時采摘，陰干或曬干[1]151。主產(chǎn)于河南、安徽、四川、江蘇和浙江等省。其他各地也多有產(chǎn)，新疆紅花產(chǎn)量較大，多向內(nèi)地推銷。紅花含紅花甙、新紅花甙和紅花醌甙、二十九烷、β-谷甾醇、棕櫚酸、肉豆蔻酸等成分[2]。

1.4.3 三七為五加科植物三七Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen的干燥根和根莖[1]11。

1.4.4 續(xù)斷系為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷Dipsacus asper Wall.exHenry的干燥根[1]329。

1.4.2 延胡索為罌粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥塊莖[1]139。含近20種生物堿：D-紫堇堿（即延胡索甲素）、DL-四氫巴馬亭（即延胡索乙素）、后鴉片堿（即延胡索丙素）、L-四氫黃連堿（即延胡索丁素）等[3]。

2 方法與結(jié)果

根據(jù)該品種的處方藥味及制法，中藥均以生藥原粉入藥。對處方中主藥，臣藥，佐藥擬依次進行顯微、薄層色譜法定性鑒別，列入【鑒別】（1）、（2）、（3），以確保該藥的內(nèi)在質(zhì)量。

2.1 五加皮的鑒別實驗

2.1.1 顯微鑒別草酸鈣簇晶直徑為8～64 μm，有時候含晶細胞連接，簇晶排列成行。木栓細胞為長方形或多角形，細胞壁??；老根皮的木栓細胞有時候壁不均勻增厚，有數(shù)量不太多的紋孔。分泌道的碎片含有無色或淡黃色的分泌物。淀粉粒多，單粒形狀為多角形或類球形，直徑2～8 μm；復(fù)粒是由2分粒至數(shù)十分粒組成。其中“樹脂道碎片含黃色的分泌物，草酸鈣簇晶”，特征和三七一致，故在正文中沒有收載其顯微鑒別項。

2.2 牡蠣鑒別實驗

2.2.1 顯微鑒別本品為粉末灰白色。珍珠層呈不規(guī)則的碎塊，較大碎塊呈條狀或片狀，表面隱約可見細小條紋。棱柱層少見，斷面觀棱柱狀，斷端平截，長29～130 μm，寬10～36 μm，有的一端漸尖，亦可見數(shù)個并列成排；表面觀類多角形、方形或三角形。其中“不規(guī)則碎塊，表面隱約可見細小條紋，斷端平截”，特征明顯，且無干擾，故在正文中未收載其顯微鑒別項。

2.3 三七鑒別實驗2.3.1顯微鑒別淀粉粒較多，單粒圓形、半圓形或圓多角形，直徑4～30 μm；復(fù)粒由2～10余分粒組成。樹脂道碎片含有黃色分泌物。梯紋導(dǎo)管、網(wǎng)紋導(dǎo)管及螺紋導(dǎo)管直徑15～55 μm。草酸鈣簇晶不多見，直徑50～80 μm。其中“樹脂道碎片含有黃色分泌物，草酸鈣簇晶”，特征同五加皮，故在正文中未收載其顯微鑒別項。

2.3.2 薄層色譜供試品溶液的制備：取本品10 g，加甲醇50 ml，超聲處理1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30 ml使其溶解，用水飽和的正丁醇提取3次，每次20 ml，合并正丁醇液，用1%氫氧化鈉溶液洗滌2次，每次15 ml，棄去1%氫氧化鈉溶液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20 ml，棄去水洗液層，將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1 ml使其溶解，作為供試品溶液。

對照藥材溶液的制備：另取三七對照藥材0.3 g，加甲醇30 ml，同法制成對照藥材溶液。

對照品溶液的制備：再取人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1及三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每1 ml各含1 mg的混合溶液，作為對照品溶液。

陰性對照溶液的制備：取陰性對照（不含三七的樣品），照供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

點樣量：上述四種溶液各5 μl；薄層板：硅膠G板；展開劑：氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置的下層溶液；顯色：噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，分別置日光和紫外光燈（365 nm）下檢視。

供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點和熒光斑點。

三批樣品按上述方法檢測，結(jié)果重現(xiàn)性良好，如圖1。

圖1 三七薄層鑒別圖像

2.4 龍血竭鑒別實驗

2.4.1 顯微鑒別不規(guī)則塊片血紅色，周圍液體呈鮮黃色，漸變紅色。其中“不規(guī)則塊片血紅色，周圍液體呈鮮黃色，漸變紅色”，特征比較明顯，且無其它干擾，在正文中收載其顯微鑒別項。

2.4.2 薄層色譜供試品溶液的制備：本品5 g，加乙醚20 ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。

對照藥材溶液的制備：取龍血竭對照藥材0.3 g，同法制成對照藥材溶液。

陰性對照溶液的制備：取陰性對照（不含龍血竭的樣品），同供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

點樣量：上述三種溶液各10 μl；薄層板：硅膠G；展開劑：環(huán)己烷-乙酸乙酯（5∶1）；顯色：置紫外光燈（365 nm）下檢視。

供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點。

三批樣品按上述方法檢測，結(jié)果重現(xiàn)性良好，如圖2。

圖2 龍血竭薄層鑒別圖像

2.5 百合鑒別實驗

2.5.1 顯微鑒別淀粉粒單粒，類圓形，長圓形；表皮細胞垂周壁薄波狀彎曲；氣孔副衛(wèi)細胞為3～4個。百合經(jīng)過粉碎同其它藥粉混合后，其顯微特征被破壞，幾乎無法觀察，故在正文中未收載其顯微鑒別項。

2.6 白術(shù)鑒別實驗

2.6.1 顯微鑒別草酸鈣針晶細小，長10～32 μm，存在于薄壁細胞中，少數(shù)針晶直徑到4 μm。纖維黃色，大多成束，長梭形，直徑約到40 μm，壁甚厚，木化，孔溝明顯。石細胞為淡黃色，類圓形、多角形、長方形或少數(shù)紡錘形，直徑為37～64 μm。薄壁細胞含有菊糖，表面顯放射狀紋理。導(dǎo)管分子短小，為網(wǎng)紋導(dǎo)管及具緣紋孔導(dǎo)管，直徑到48 μm。白術(shù)經(jīng)粉碎同其它藥粉混合后，其顯微特征被破壞，幾乎無法觀察，故在正文中未收載其顯微鑒別項。

2.6.2 薄層色譜供試品溶液的制備：取本品10 g，加石油醚（30～60℃）20 ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷1 ml使溶解，作為供試品溶液。

對照藥材溶液的制備：另取白術(shù)對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。

陰性對照溶液的制備：取陰性對照（不含白術(shù)的樣品），同供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

點樣量：上述三種溶液各5 μl；薄層板：硅膠G；展開劑：石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（19∶1）；顯色：噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱直至斑點顯色清晰。

供試品色譜和陰性對照色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性有干擾。故在正文中未收載其薄層鑒別項。

三批樣品按上述方法檢測，結(jié)果重現(xiàn)性良好，如圖3。

圖3 白術(shù)薄層鑒別圖像

2.7 白芷鑒別實驗

2.7.1 顯微鑒別淀粉粒較多，單粒圓球形、多角形、橢圓形或盔帽形，直徑為3～25 μm，臍點點狀、裂縫狀、十字狀、三叉狀、星狀或人字狀；復(fù)粒大多由2～12分粒組成。網(wǎng)紋導(dǎo)管、螺紋導(dǎo)管直徑10～85 μm。木栓細胞形狀為多角形或類長方形，淡黃棕色。油管多已破碎，含淡黃棕色分泌物。白芷經(jīng)粉碎同其它藥粉混合后，其顯微特征被破壞，幾乎無法觀察，故在正文中未收載其顯微鑒別項。

2.8 山茱萸鑒別實驗

2.8.1 顯微鑒別果皮表皮細胞呈橙黃色，表面觀察為多角形或類長方形，直徑為16～30 μm，垂周壁連珠狀增厚，外平周壁顆粒狀角質(zhì)增厚，胞腔含淡橙黃色物。中果皮細胞橙棕色，多皺縮。草酸鈣簇晶數(shù)量少數(shù)，直徑12～32 μm。石細胞形狀為類方形、卵圓形或長方形，紋孔明顯，胞腔大。山茱萸經(jīng)粉碎同其它藥粉混合后，其顯微特征被破壞，幾乎無法觀察，故在正文中未收載其顯微鑒別項。

2.8.2 熊果酸供試品溶液的制備：取本品10 g，加乙酸乙酯20 ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。

對照品溶液的制備：另取熊果酸對照品，加無水乙醇制成每1 ml各含1 mg的溶液，作為對照品溶液。

陰性對照溶液的制備：取陰性對照（不含山茱萸的樣品），同供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

點樣量：上述三種溶液各5 μl；薄層板：硅膠G；展開劑：甲苯-甲酸-乙酸乙酯（20∶0.5∶4）；顯色：噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，分別置日光和紫外光燈（365 nm）下檢視。

供試品色譜和陰性對照色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點和熒光斑點。陰性有干擾。故在正文中未收載其薄層鑒別項。

三批樣品按上述方法檢測，結(jié)果重現(xiàn)性良好，如圖4。

圖4 熊果酸薄層鑒別圖像

2.9 紅花鑒別實驗

2.9.1 顯微鑒別花冠、花絲、柱頭碎片較多見，有長管狀分泌細胞經(jīng)常位于導(dǎo)管旁，直徑約至66 μm，含黃棕色至紅棕色分泌物?；ü诹哑敹吮砥ぜ毎獗谕黄鸪尸F(xiàn)短絨毛狀。柱頭和花柱上的部表皮細胞分化成圓錐形單細胞毛，先端尖或稍鈍?；ǚ哿ｎ悎A形、橢圓形或橄欖形，直徑約至60 μm，具有3個萌發(fā)孔，外壁有齒狀突起。草酸鈣方晶存在于薄壁細胞中，直徑為2～6 μm。其中“分泌細胞直徑約至66 μm，含黃棕色至紅棕色分泌物?；ǚ哿ｎ悎A形、橢圓形或橄欖形，直徑約至60 μm，具有3個萌發(fā)孔，外壁有齒狀突起”特征較為明顯，且無其它干擾，在正文中收載其顯微鑒別項。

2.10 續(xù)斷鑒別實驗

2.1 0.1顯微鑒別草酸鈣簇晶甚多，直徑15～50 μm，散在或存在于皺縮的薄壁細胞中，有時數(shù)個排列成緊密的條狀。紡錘形薄壁細胞壁稍厚，有斜向交錯的細紋理。具緣紋孔導(dǎo)管和網(wǎng)紋導(dǎo)管直徑約至72(90)μm。木栓細胞淡棕色，表面觀類長方形、類方形、多角形或長多角形，壁薄。其顯微特征“草酸鈣簇晶”同三七和五加皮；“紡錘形薄壁細胞壁稍厚，有斜向交錯的細紋理”經(jīng)粉碎同其它藥粉混合后，其顯微特征被破壞，幾乎無法觀察，故在正文中未收載其顯微鑒別項。

3 討論

3.1 顯微鑒別收載紅花、龍血竭、牡蠣的顯微特征作為顯微鑒別項，見圖5。

圖5 紅花、龍血竭、牡蠣（日光）牡蠣（偏光）顯微鑒別圖像

分泌細胞直徑約至66 μm，含黃棕色至紅棕色分泌物?；ǚ哿ｎ悎A形、橢圓形或橄欖形，直徑約至60 μm，具3個萌發(fā)孔，外壁有齒狀突起（紅花）。不規(guī)則塊片血紅色，周圍液體顯鮮黃色，漸變紅色（龍血竭）。不規(guī)則碎塊，表面隱約可見細小條紋，斷端平截（牡蠣）。

3.2 薄層色譜五加皮、百合、白術(shù)、等陰性有干擾；白芷、紅花樣品中無斑點；牡蠣因無對照藥材，未做薄層鑒別。薄層鑒別只收載了三七、龍血竭。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2015:105.

[2]中國科學(xué)醫(yī)學(xué)院藥物研究所.中藥志（第五冊）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：20.

[3]張貴君.常用中藥鑒定大全[M].哈爾濱：黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社，1993：351.

Study on Quality Criteria of Zhenggu Baijian Powder

BI Na,ZHAN Lijing,YANG Siguang
(Jilin City Institute of Food and Drug Administration,Jilin Province,Jilin 132000,China)

Objective Toanalyze the raw materials testing methods and precautions of Zhenggu Baijian powder.Methods TLD method was established for the identifications of Angelica,Safflower,Wu Chia Pee,Dogwood,Oyster,Atractylodes,Lily,Pseudo-Ginseng, Sanguis Draconis and Himalayan Teasel Root though microscopic identification.The paper made systematic analysis of the identification process and summarized the key links and key steps in the identification process.Results The microscopic features of Safflower, Sanguis Draconis and Oyster were taken as the microscopic identifications.The TLC results of Atractylodes and Dogwood are negative with interference.Therefore,the TLC results only include Pseudo-Ginseng and Sanguis Draconis.Conclusion The method proposed in this paper is simple,accurate and reliable that makes it perfect for the quality control of Zhenggu Baijian powder.

Zhenggu Baijian powder;microscopic identification;TLC;Pseudo-Ginseng;Sanguis Draconis

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.14.063

1672-2779（2017）-14-0142-04

：楊杰本文校對：李玉冬

2017-04-27）