唐利飛 劉敏杰

瘦素及瘦素受體與子宮內(nèi)膜異位癥關(guān)系研究

唐利飛 劉敏杰

目的探討瘦素與瘦素受體在子宮內(nèi)膜異位組織中的表達(dá)。方法選取32例子宮內(nèi)膜異位癥患者作為內(nèi)異組，并選取同期行輸卵管結(jié)扎術(shù)的32例婦女作為對(duì)照組，分別采取兩組患者的血清、腹腔液（PF）和腹膜組織（PI）。內(nèi)異組患者切除子宮內(nèi)膜異位囊腫，切取囊腫組織（OE），并吸取囊腫液（EF）。采用Western blot法測(cè)定PI和OE瘦素及瘦素受體表達(dá)水平。采用ELISA法測(cè)定血清、PF及EF中的瘦素水平。結(jié)果兩組PI中瘦素和瘦素受體表達(dá)水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），而內(nèi)異組OE中瘦素和瘦素受體表達(dá)水平均較PI中瘦素及瘦素受體表達(dá)水平明顯增高（均P＜0.05）。兩組血清及PF中瘦素水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。但內(nèi)異組EF中瘦素水平明顯高于血清及PF中瘦素水平，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。內(nèi)異組患者OE與EF、PI與PF、OE與PF的瘦素表達(dá)水平均呈正相關(guān)（均P＜0.05）。OE中瘦素與瘦素受體、EF瘦素與OE瘦素受體、PI中瘦素與瘦素受體、PF瘦素與PI瘦素受體均呈正相關(guān)（均P＜0.05），而PF瘦素與OE瘦素受體表達(dá)水平無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。結(jié)論瘦素通過(guò)與瘦素受體之間的相互調(diào)節(jié)作用在子宮內(nèi)膜異位囊腫的發(fā)病過(guò)程中扮演了非常重要的角色。

子宮內(nèi)膜異位癥瘦素瘦素受體

瘦素是一種脂肪細(xì)胞衍生蛋白，其主要生理功能是調(diào)節(jié)機(jī)體對(duì)食物的攝取和能量的消耗[1]。有研究表明瘦素在炎癥、血管再生以及生殖功能等生理進(jìn)程中起到了重要的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)作用[2]。瘦素受體引導(dǎo)瘦素通過(guò)JAK2/STAT3和ERK信號(hào)通路刺激子宮內(nèi)膜異位上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，從而誘發(fā)子宮內(nèi)膜異位癥[3]。瘦素與炎癥、血管再生之間的關(guān)系，加上它有可能在中樞和性腺水平上影響生殖功能，因此它與子宮內(nèi)膜異位癥之間的關(guān)系得到了廣泛的研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象選取2013年7月至2015年3月在本院診治的32例子宮內(nèi)膜異位癥患者作為內(nèi)異組，并選取同期在本院行輸卵管結(jié)扎術(shù)的婦女32例作為對(duì)照組。內(nèi)異組年齡23～51（30.6±1.5）歲，BMI 20～30（21.6± 1.5）kg/m2；對(duì)照組年齡21～49（30.2±1.8）歲，BMI 20～30（20.9±1.3）kg/m2。兩組患者年齡、BMI等一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。內(nèi)異組行腹腔鏡手術(shù)者30例，另2例患者由于盆腔粘連嚴(yán)重，出血多轉(zhuǎn)行開(kāi)腹手術(shù)；對(duì)照組均行腹腔鏡手術(shù)。內(nèi)異組納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）卵巢單側(cè)或者雙側(cè)子宮內(nèi)膜異位囊腫，（2）正在準(zhǔn)備開(kāi)腹或腹腔鏡腹腔深部子宮內(nèi)膜異位手術(shù)患者；對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）正在準(zhǔn)備開(kāi)腹或腹腔鏡結(jié)扎手術(shù)患者，（2）無(wú)任何子宮內(nèi)膜異位癥并且無(wú)卵巢病變。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)和患者知情同意。

1.2 樣本的準(zhǔn)備及手術(shù)方法兩組受檢者在麻醉前經(jīng)靜脈抽取5ml血液于抗凝管中，靜置30min后，3 000r/min離心10min，取上清液，-70℃保存。兩組行腹腔鏡手術(shù)者采用氣管插管靜脈復(fù)合麻醉，頭低腳高15°～20°，膀胱截石位，安放舉宮器，臍部10mm Trocar穿刺，置入鏡頭，常規(guī)取2、3、4穿刺孔[4]，首先吸取盆腔子宮直腸陷凹處的腹腔液（PF）（均-70℃保存）備用；留取側(cè)盆壁、無(wú)粘連、肉眼觀察無(wú)病變的腹膜組織（PI），用10%中性甲醛溶液固定。內(nèi)異組患者在腹腔鏡下剝除異位囊腫，分離周圍粘連，卵巢表面電凝或直接剪開(kāi)卵巢接近囊腫壁，分離卵巢與囊腫，提取囊腫組織（OE），必要時(shí)可穿刺提取囊腫液（EF）（-70℃保存）。行開(kāi)腹手術(shù)患者選用腰硬聯(lián)合麻醉，直視盆腔，提取相應(yīng)組織及組織液。

1.3 Western blot法測(cè)定組織瘦素及瘦素受體表達(dá)水平將大約400mg PI樣本或OE樣本加入到400μl 1% NP-40裂解液中（上海江萊生物科技有限公司）混勻，加入一定量的蛋白酶抑制劑后于4℃，10 000r/min下離心5min，測(cè)定上清液中的蛋白濃度。量取含蛋白20μg的上清液，加入到8%SDS聚丙烯酰胺凝膠中進(jìn)行垂直電泳測(cè)定，然后轉(zhuǎn)移至硝化纖維素膜上進(jìn)行轉(zhuǎn)印。硝化纖維素膜分別與一抗為鼠抗人瘦素多克隆抗體（BS-0109R）和兔抗人Ob-R單克隆抗體（BS-0108M）（武漢博奧森公司）于4℃下過(guò)夜孵育(1∶200)。蛋白表達(dá)采用β-actin作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，所有條帶經(jīng)化學(xué)發(fā)光分析儀可視化后記錄。

1.4 血清等瘦素水平的測(cè)定提前20min從冰箱中取出血清、PF及EF標(biāo)本，平衡至室溫，采用ELISA法（試劑盒為武漢伊萊瑞特生物科技有限公司生產(chǎn)）測(cè)定血清、PF及EF中的瘦素水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)；兩變量間相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者PI和內(nèi)異組OE瘦素與瘦素受體表達(dá)水平的比較Western blot法檢測(cè)所得蛋白表達(dá)水平電泳圖見(jiàn)圖1。將蛋白表達(dá)轉(zhuǎn)換成相對(duì)灰度值進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，兩組患者PI中瘦素和瘦素受體表達(dá)水平的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見(jiàn)表1。而內(nèi)異組OE中瘦素和瘦素受體表達(dá)水平分別為（30.23±2.28）和（12.88± 2.63）ng/ml，均較PI中瘦素及瘦素受體表達(dá)水平明顯增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

圖1 兩組患者PI瘦素與瘦素受體蛋白表達(dá)電泳圖

表1 兩組患者PI中瘦素與瘦素受體表達(dá)水平的比較（ng/ml）

2.2 兩組患者血清與PF中瘦素水平的比較兩組患者血清及PF中瘦素水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見(jiàn)表2。內(nèi)異組EF中瘦素水平為（75.19± 0.33）ng/ml，明顯高于血清和PF中瘦素水平，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。

表2 兩組患者血清與PF中瘦素水平的比較（ng/ml）

2.3 內(nèi)異組患者組織間瘦素與瘦素及瘦素與瘦素受體水平的相關(guān)性分析內(nèi)異組患者OE與EF、PI與PF、OE與PF的瘦素表達(dá)水平均呈正相關(guān)（均P＜0.05）。OE中瘦素與瘦素受體、EF瘦素與OE瘦素受體、PI中瘦素與瘦素受體、PF瘦素與PI瘦素受體均呈正相關(guān)（均P＜0.05），而PF瘦素與OE瘦素受體表達(dá)水平無(wú)相關(guān)性（P＞0.05），見(jiàn)表3。

表3 內(nèi)異組患者組織間瘦素與瘦素及瘦素與瘦素受體的相關(guān)性分析

3 討論

瘦素是由肥胖基因表達(dá)的主要存在于脂肪組織中的一種激素，因其在基礎(chǔ)代謝、食物攝入及生殖功能等方面的作用而被認(rèn)識(shí)并研究，隨后研究發(fā)現(xiàn)其具有血管再生、促進(jìn)炎癥以及免疫調(diào)節(jié)的作用[3-5]。近年來(lái)研究者發(fā)現(xiàn)其與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病存在著一定的聯(lián)系。

近期有研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥患者子宮內(nèi)膜中瘦素與瘦素受體的表達(dá)水平要明顯高于正常的子宮內(nèi)膜，同時(shí)這項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)用瘦素來(lái)治療子宮內(nèi)膜異位癥時(shí)，能夠促進(jìn)瘦素受體轉(zhuǎn)錄RNA的表達(dá)，表明在子宮內(nèi)膜異位癥患者瘦素系統(tǒng)中涉及到自分泌和旁分泌兩種模式[6]。這也就意味著子宮內(nèi)膜異位癥所屬組織可能既是瘦素的來(lái)源，又是瘦素潛在的靶點(diǎn)。

大量研究報(bào)道了子宮內(nèi)膜異位癥患者血清與PF中的瘦素水平，但是結(jié)果卻存在著一定的矛盾性，有些研究認(rèn)為與健康人員相比，子宮內(nèi)膜異位癥患者血清與PF中的瘦素水平并無(wú)什么變化[7-8]，但有些研究卻認(rèn)為子宮內(nèi)膜異位癥患者的瘦素水平比健康人員要高[9-10]。此外，關(guān)于PF瘦素水平與子宮內(nèi)膜異位癥嚴(yán)重程度之間關(guān)聯(lián)性也存有爭(zhēng)議，一些研究結(jié)果呈正相關(guān)[11]，但另一些研究結(jié)果卻呈負(fù)相關(guān)[12]。本研究中，ELISA法測(cè)定結(jié)果顯示兩組受檢者血清以及PF中的瘦素水平無(wú)明顯差異，但EF中的瘦素水平明顯高于血清以及PF中的水平，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究結(jié)果表明子宮內(nèi)膜異位癥患者嚴(yán)重程度是有關(guān)聯(lián)的，可能與瘦素水平呈正相關(guān)。

內(nèi)異組患者OE與EF、PI與PF、OE與PF的瘦素表達(dá)水平呈正相關(guān)。OE中瘦素與瘦素受體、EF瘦素與OE瘦素受體、PI中瘦素與瘦素受體、PF瘦素與PI瘦素受體均呈正相關(guān)，這些相關(guān)性結(jié)果表明瘦素受體在OE或PI中的表達(dá)可能是EF和PF中瘦素水平所引導(dǎo)的。綜上所述，瘦素通過(guò)與瘦素受體之間的相互調(diào)節(jié)作用在子宮內(nèi)膜異位囊腫的發(fā)病過(guò)程中扮演了重要的角色。

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Expression of leptin and leptin receptor in endometriosis

TANG Lifei,LIU Minjie.Department of Gynaecology and Obstetrics, Ningbo Yinzhou People's Hospital,Ningbo 315040,China

ObjectiveTo investigate the expression of leptin and leptin receptor in endometriosis.MethodsThirty-two patients with endometriosis(EM group)and 32 women undergoing tubal ligation(control group)were enrolled in the study.The serum,peritoneal fluid(PF),peritoneal biopsy(PI)samples were collected in both groups,the endometriosis cyst(OE)and aspiration of endometriosis cysts(EF)taken duting endometriosis resection were collected in EM group.The expression levels of leptin and leptin receptor in PI and OE were measured by Western blot,the levels of leptin in serum,PF and EF were measured by human leptin ELISA kit.ResultsThe levels of leptin and leptin receptor in PI were not statistically significant between two groups(all P＞0.05).In EM group the expression of leptin and leptin receptor in OE were significantly higher than that in PI(all P＜0.05).There were no significant difference in serum and PF leptin levels between the two groups(all P＞0.05).But in EM group the levels of leptin in EF were significantly higher than those in serum and PF(all P＜0.01).In EM group there were positive correlations in expression levles of leptin and leptin receptor between OE and EF,PI and PF,OE and PF(all P＜0.05),there were positive correlations between leptin and leptin receptor in OE,between leptin in EF and leptin receptor in OE,between leptin and leptin receptor in PI,between leptin in PF and leptin receptor in PI(all P＜0.05),while there was no correlation between leptin in PF and leptin receptor in OE(P＞0.05).ConclusionThe interaction of leptin and leptin receptor may play an important role in the pathogenesis of endometriosis.

EndometriosisLeptinLeptin receptor

2016-01-06）

（本文編輯：陳麗）

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.13.2016-31

315040寧波市鄞州人民醫(yī)院婦產(chǎn)科

唐利飛，E-mail：15084994@qq.com