鄭丹，師靜，林占熺

（1.福建農林大學國家菌草工程技術研究中心，福州 350002; 2.福建農林大學菌草研究所，福州350002；3.寧夏出入境檢驗檢疫局綜合技術中心，銀川 750001）

鮮菌草與靈芝菌絲發(fā)酵菌質對奶牛免疫機能及抗氧化能力的影響

鄭丹1,2，師靜3，林占熺1,2

（1.福建農林大學國家菌草工程技術研究中心，福州 350002; 2.福建農林大學菌草研究所，福州350002；3.寧夏出入境檢驗檢疫局綜合技術中心，銀川 750001）

以鮮菌草與靈芝菌絲發(fā)酵菌質為試驗材料，選取產奶量相近、胎次1～2胎、泌乳中期、體重無顯著性差異、遺傳組成基本相似的荷斯坦牛10頭，按統(tǒng)計學原理，隨機分為試驗組和對照組，每組各5頭，通過在試驗組奶牛日糧中添加鮮菌草與靈芝菌絲發(fā)酵菌質替代等量青貯飼養(yǎng)37d，研究鮮菌草與靈芝菌絲發(fā)酵菌質對奶牛免疫機能及抗氧化能力的影響。結果表明，試驗后，試驗組奶牛血清中IgG、IgM、IgA含量比對照組分別高1.88g/L、0.05g/L、0.01g/L，但差異不顯著（P＞0.05）；試驗組奶牛血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性提高了4.23%，總抗氧化能力（T-AOC）提高了12.44%，丙二醛(MDA)含量比對照組下降了13.19%，但兩組間差異都不顯著（P＞0.05）；谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）的活性呈下降趨勢，差異不顯著（P＞0.05）。說明日糧中添加鮮菌草靈芝菌絲發(fā)酵菌質對提高奶牛血清IgG、IgM、IgA的含量有一定作用，同時對奶牛的抗氧化能力也有一定的增強效果。

菌草；靈芝菌絲；奶牛；免疫機能；抗氧化

為了解決菌業(yè)生產與林業(yè)生態(tài)平衡之間的“菌林矛盾”，福建農林大學林占熺研究員在1983年開始利用野草“以草代木”栽培食、藥用菌，1986年獲得成功，發(fā)明了菌草技術。目前菌草不僅用來栽培食、藥用菌，還拓展至菌物飼料、生物質能源以及生態(tài)治理等領域[1]。靈芝又稱靈芝草、仙草、神芝、瑞草、芝草，是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株。經過科研機構數(shù)十年的現(xiàn)代藥理學研究證實，靈芝富含靈芝多糖和三萜[2,3]，在增強人體免疫力、控制血壓、調節(jié)血糖、保肝護肝、輔助腫瘤放化療、促進睡眠等方面均具有顯著療效[4～8]。

目前，多種菌糟作為飼料或飼料添加劑在反芻動物和家禽上的使用已有較多報道。平菇菌糟替代苜蓿草粉能改善福建黃兔血清生化指標，提高福建黃兔的免疫功能和小腸消化酶活性，改善腸道組織結構，維持盲腸微生態(tài)平衡，提高養(yǎng)分表觀消化率，同時也提高兔肉品質[9]；菌草杏鮑菇菌糟可以減緩泌乳中期奶牛產奶量的下降趨勢，提高奶牛血清中IgM及牛乳中IgG的含量[10]；菌草靈芝菌糟可延緩泌乳中期奶牛產奶量降低的趨勢，并能提高牛奶血清中IgG的含量[11]；菌草靈芝菌糟的提取物通過增加小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，可提高血清中的SOD活性、CAT含量和T-AOC，促進環(huán)磷酰胺引起的小鼠免疫功能抑制的恢復[12]。目前，還未有以鮮菌草和靈芝菌絲發(fā)酵培養(yǎng)的菌質作為飼料或飼料添加劑的研究。因此，本試驗通過鮮菌草與靈芝菌絲發(fā)酵菌質替代等量青貯飼喂奶牛，研究其對奶牛免疫機能及抗氧化能力的影響，為綠色飼料資源的開發(fā)提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

鮮菌草與靈芝菌絲發(fā)酵菌質配方為：巨菌草60%，五節(jié)芒17%，麩皮20%，石膏3%。將鮮菌草采收、粉碎后，按照試驗配方拌料，然后用17mm×38mm的聚乙烯塑料袋盛裝，在121℃的條件下高壓滅菌6h，待冷卻后在超凈工作臺上接種靈芝菌絲（赤芝，菌號P008，由福建農林大學國家菌草工程技術研究中心保藏）。接種后在無菌培養(yǎng)室中培養(yǎng)60d左右，待菌絲長滿整個培養(yǎng)基即可作為供試材料。菌質的主要營養(yǎng)成分見表1。

表1 菌質營養(yǎng)成分 單位：%

1.2 試驗設計

選擇10頭胎次為1～2胎、泌乳中期、產奶量相近、體重無顯著性差異、遺傳組成基本相似的荷斯坦牛（表2），按統(tǒng)計學原理，隨機分為試驗組和對照組，每組各5頭。試驗組每天每頭添加3.0kg的鮮菌草靈芝發(fā)酵菌質替代等量青貯，對照組飼喂基礎日糧。試驗組除飼喂日糧不同外，其余條件都與對照組保持一致。

表2 試驗奶?；厩闆r表

1.3 試驗日糧及飼養(yǎng)管理

1.3.1 試驗日糧

試驗奶牛日糧組成見表3。

1.3.2 飼養(yǎng)管理

先對試驗組奶牛進行7d的預試驗，預試期內逐漸改變日糧結構，在第7天達到試驗要求配方的日糧，給奶牛瘤胃微生物一個適應期。試驗期內牛舍定期進行消毒，保持干燥和清潔衛(wèi)生。獸醫(yī)每日對試驗奶牛進行觀察，發(fā)現(xiàn)異常，及時處理，以保證試驗結果的科學性。

表3 試驗奶牛日糧組成

1.4 測定指標與方法

分別在正飼期開始0d、30d時，對所有試驗奶牛在晨飼1h后，尾部靜脈采血10mL，分裝于2支試管中，每支試管各5mL。血樣采集完畢后，迅速將其放置在高速離心機內4 000r/min離心15min，然后用移液槍將分離的血清轉移到子彈頭離心管中，冷凍保存于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.4.1 血清中免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白A（IgA）含量的測定

將制備好的血清，采用酶聯(lián)免疫法測定，試劑盒由北京華英生物研究所提供，具體操作過程依照試劑盒的說明書進行。

1.4.2 血清中抗氧化能力指標的測定

采用國產721型可見分光光度計和相應試劑盒（由南京建成生物工程研究所提供）測定血清中丙二醛（MDA）的含量、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性、總抗氧化能力（T-AOC）及超氧化物歧化酶（T-SOD）活性，具體操作過程依照試劑盒的說明書進行。

1.5 數(shù)據分析

試驗數(shù)據采用Microsoft Excel 2010處理后，用DPS 7.05軟件進行顯著性分析，試驗數(shù)據用均值±標準差表示。

2 結果與分析

從表4可以看出，在試驗30d時，試驗組奶牛血清中IgG、IgM和IgA的含量比對照組分別高了1.88g/L、0.05g/L和0.01g/L，GSH-Px、T-AOC和T-SOD的含量比對照組分別高了31.09U/mL、0.98U/mL和4.69U/mL，MDA的含量比對照組低了0.69nmol/mL，但差異都不顯著。結果表明，使用菌草靈芝發(fā)酵菌質對提高免疫力有一定的作用，同時也增強了機體的抗氧化能力。

表4 菌質對奶牛血清中免疫球蛋白和抗氧化能力指標的影響

3 討論

IgG、IgM、IgA是血清中重要的免疫球蛋白，其中以 IgG的含量最多，也是血清學診斷的主要抗體，其含量的多少直接反映了動物機體免疫水平。IgG具有抗細菌、病毒、外毒素等多種活性作用，在體液免疫中最為重要。在抗腫瘤免疫中，IgG可以與巨噬細胞和淋巴細胞結合，達到殺傷腫瘤細胞的目的。靈芝多糖有廣泛的藥理活性，能提高機體免疫力。試驗結果表明，試驗30d后，試驗組中IgG、IgM、IgA含量比對照組分別高1.88g/L、0.05g/L、0.01g/L（P＞0.05），說明使用菌草靈芝發(fā)酵菌質對提高奶牛IgG、IgM、IgA有一定作用，其原因可能是菌草靈芝發(fā)酵菌質中有大量菌絲體，而菌絲體中存在靈芝多糖等活性物質，藥理試驗已證明靈芝多糖具有提高機體免疫功能的作用，奶牛通過采食菌草靈芝發(fā)酵菌質，提高了自身免疫力。

總抗氧化能力（T-AOC）是反映體內抗氧化力的一個重要指標，代表體內酶性和非酶性抗氧化物的總體水平，因此，總抗氧化能力的測定極其重要。GSHPX活性、T-SOD活性均與機體的抗氧化功能有關，一般活性愈高，抗氧化功能愈高；MDA的含量與抗氧化功能也有一定關系，一般含量越低，抗氧化功能越強。本試驗表明，在試驗30d時，試驗組奶牛血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性提高了4.23%，總抗氧化能力（T-AOC）提高了12.44%，丙二醛(MDA)含量比對照組下降了13.19%（P＞0.05）；谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）的活性也呈下降趨勢（P＞0.05）。說明日糧中添加菌草靈芝發(fā)酵菌質對奶牛的抗氧化能力有一定增強效果，其原因可能是奶牛攝入的菌草靈芝發(fā)酵菌質，里面含有靈芝多糖，具有抗氧化效果，進而提高了奶牛的抗氧化能力。不過還有待進一步研究驗證。

本試驗結果與劉艷玲等[11]、陳曉斌等[12]的研究等結果有一致性，說明使用菌草靈芝發(fā)酵菌質對提高奶牛免疫力有一定的作用，同時也增強了奶牛的抗氧化能力。試驗結果都不顯著的可能原因如下：一是因為菌質飼喂奶牛的時間太短，應該將試驗時間延長到60d或者更長的時間；二是奶牛是大型動物，采食量比較大，本試驗的菌質添加量可能不合適，應該多設置幾個添加量進一步研究。

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[3] Tang YJ, Zhang W, Liu RS, et al. Scale-up study on the fed-batch fermentation of Ganoderma lucidum for the hyperproduction of ganoderic acid and Ganoderma polysaccharides[J]. Process Biochemistry, 2011, 46:404-408.

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[11] 劉艷玲,李衛(wèi)東,林冬梅,等. 菌草靈芝菌糟提取物對免疫力低下小鼠抗氧化能力的影響[J]. 資源與環(huán)境,2015,03:303-307.

[12] 陳曉斌,張雙雙,林春梅,等. 菌草菌糟作為飼料在奶牛飼養(yǎng)中的應用效果[J]. 動物科學,2013,02:179-183.

Effect of the Fermentation Products by Fresh JUNCAO and Ganoderma Lucidum on Immune Function and Antioxidant Capacity of Dairy Cows

ZHENG Dan1,2, SHI Jing3, LIN Zhan-xi1,2
(1.National Engineering Research Center of JUNCAO Technology, Fujian Agriculture and Forestry University,Fuzhou 350002; 2.JUNCAO Research Institute, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002; 3.Ningxia Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau General Technology Center,Yinchuan 750001)

Totally 10 Holstein cows with similar milk yield and parity (1～2),midlactation, no signifcant difference inbody weight, similar genetic composition were randomly divided into experimental group and control group,each group with 5 cows.To study the effect of the fermentation products by fresh JUNCAO and Ganodermalucidum on immune function and antioxidant capacity,the experimental group were fed with fermentation products instead of silage for 37d. The results showed that, after the test, the serum IgG, IgM and IgA in experimental group were 1.88g/L,0.05g/L and 0.01g/L higher than that in the control group, but the difference was not signifcant(P＞0.05);superoxide dismutase(SOD) activity in serum increased by 4.23% in experimental group, total antioxidant capacity (T-AOC) increased by 12.44%, MDA (MDA) content was 13.19% lower than the control group, but the difference between the two groups was not signifcant(P＞0.05);glutathione peroxidase(GSH-PX) activity decreased,the difference was not significant(P＞0.05). It suggests adding fermentation products by fresh JUNCAO and Ganodermalucidum to the diet of dairy cows, has a certain effect on improving the content of serum IgG, IgM, IgA,and it could also enhance the antioxidant capacity of cows.

JUNCAO; Ganoderma lucidum mycelium; Dairy cows; Immune function; Antioxidation

S858.23

A

1004-4264（2017）07-0046-04

10.19305/j.cnki.11-3009/s.2017.07.012

2017-02-16

海南省應用技術研發(fā)與示范推廣專項“林下菌草栽培靈芝關鍵技術的研究與示范”（ZDXM2015132）。

鄭丹（1986-），男，碩士，助理實驗師，現(xiàn)主要從事菌草技術研究、應用與推廣的輔助教學和科研工作。

林占熺（1943-），男，研究員，博士生導師，現(xiàn)主要從事菌草技術研究與應用、菌草產業(yè)發(fā)展的教學與科研工作。