李敏 尹浩 伊淑平 孫甜 張忠一 施文浩 王愛(ài)卿

超高效液相串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)蔬菜中涕滅威及其代謝物的方法研究與探討

李敏 尹浩 伊淑平 孫甜 張忠一 施文浩 王愛(ài)卿

涕滅威又名神農(nóng)丹，是一種氨基甲酸酯類殺蟲(chóng)劑、殺螨、殺線蟲(chóng)劑，屬于高毒農(nóng)藥，禁止蔬菜、果樹(shù)、茶葉、中草藥材上使用。涕滅威施用后能夠很快氧化成為仍具生物活性的涕滅威亞砜和涕滅威砜。

目前農(nóng)業(yè)檢測(cè)部門主要使用《NY/T761-2008蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》中液相色譜儀和柱后衍生設(shè)備檢測(cè)涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜，使用《GB/T20769-2008水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》可以檢測(cè)涕滅威砜。本試驗(yàn)研究了使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜實(shí)現(xiàn)快速簡(jiǎn)便檢測(cè)涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜，并以此為例探討農(nóng)殘多殘留檢測(cè)的注意事項(xiàng)。

一、材料與方法

1、儀器與試劑

儀器：Waters UPLC Xevo TQ超高效液相串聯(lián)質(zhì)譜儀、冷凍離心機(jī)、T18均質(zhì)機(jī)

試劑：乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）、甲酸（色譜純）、水（應(yīng)符合GB/T6682一級(jí)水指標(biāo)）、冰乙酸、氯化鈉、分散固相萃取凈化管（內(nèi)含25毫克PSA，7.5毫克GCB，150毫克MgSO4）。

標(biāo)準(zhǔn)品：涕滅威(農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量測(cè)試中心,1毫克/毫升)、涕滅威砜(農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量測(cè)試中心, 1毫克/毫升)、涕滅威亞砜(農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量測(cè)試中心,1毫克/毫升)

2、樣品處理

⑴提取

稱取已粉碎10.00克試樣至50毫升離心管中。加入15毫升酸化乙腈（即0.1%乙酸乙腈），10000rpm/分鐘勻漿1分鐘。加入3克NaCl后，劇烈振蕩1分鐘，讓塊狀試樣分散開(kāi)來(lái)，然后10000rpm離心5分鐘。

⑵凈化

取1毫升上清液轉(zhuǎn)移至2毫升分散固相萃取凈化管中，劇烈振蕩1分鐘，5000rpm離心5分鐘，取上清液300微升，加入超純水定容至1毫升，混勻，過(guò)0.22微米濾膜，上機(jī)。

3、儀器條件

液相部分設(shè)置：色譜柱：BEH C18（50毫米×內(nèi)徑2.1，粒徑1.7微米）；流動(dòng)相：A相0.1%甲酸甲醇；B相5mM乙酸銨0.1%甲酸水；流速0.3毫升/分鐘；進(jìn)樣量：5微升，柱溫30℃。液相梯度設(shè)置：見(jiàn)表1。

質(zhì)譜設(shè)置：電離模式：ESI+；掃描方式：MRM；離子源溫度150℃；脫溶劑溫度500℃；毛細(xì)管電壓3200V。

4、質(zhì)譜調(diào)諧參數(shù)設(shè)置

通過(guò)比較相應(yīng)強(qiáng)度，確定母離子后，進(jìn)行調(diào)諧，確定多反應(yīng)監(jiān)測(cè)參數(shù)，見(jiàn)表2。

5、計(jì)算公式

式中：W-蔬菜中農(nóng)藥殘留量（毫克/千克）

C-標(biāo)準(zhǔn)曲線查得樣品上機(jī)濃度（納克/毫升）

V1-最終定容體積（毫升）

V2-乙腈提取液體積（毫升）

m–稱樣質(zhì)量（克）

二、結(jié)果與討論

1、線性關(guān)系和定量限

配制2、5、10、20、50納克/毫升濃度基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，上機(jī)，標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1，涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜線性相關(guān)系數(shù)r分別為，0.9997、0.9992、0.9997；三種目標(biāo)物質(zhì)譜出峰時(shí)間為，5.42分鐘，2.04分鐘，1.71分鐘。根據(jù)三種目標(biāo)物2納克/毫升出峰情況和信噪比，定量限為0.01毫克/千克，出峰情況見(jiàn)圖2。

2、樣品分析及加標(biāo)回收率試驗(yàn)

按照前處理步驟和儀器設(shè)置條件進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)添加檢測(cè)，在10微克/千克加標(biāo)量下，從表3可以看出，試驗(yàn)重復(fù)性好，三種目標(biāo)物平均回收率為93.8%、91.8%、90.2%，4次檢測(cè)RSD分別為6.2%、1.9%、3.3%。

表1 液相梯度設(shè)置表

表2 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)參數(shù)設(shè)置表

表3 回收試驗(yàn)情況表

圖1 涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 2納克/毫升涕滅威砜、涕滅威、涕滅威亞砜選擇離子質(zhì)量色譜圖

三、結(jié)論

該方法使用的簡(jiǎn)便、快速，重復(fù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)穩(wěn)定，線性關(guān)系良好，涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜線性方程分別是Y=22.81x-2.56，Y=814.36x+ 8.72，Y=169.63X+8.32。在做蔬菜中農(nóng)藥多殘留檢測(cè)時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：一是選擇響應(yīng)高的離子對(duì)，例如涕滅威母離子可以選擇加NH4+峰分子量208，也可以選擇加Na+峰分子量213，通過(guò)實(shí)際調(diào)諧比較加Na+峰響應(yīng)高并且較穩(wěn)定。二是注意溶劑效應(yīng)，由于流動(dòng)相初始為10%甲醇水體系，上機(jī)樣品為30%乙腈水體系，本試驗(yàn)顯示如果目標(biāo)物出峰在1.5分鐘以內(nèi)，溶劑效應(yīng)較為明顯，所以需要合理調(diào)整流動(dòng)相梯度和進(jìn)樣量，抑制溶劑響應(yīng)。三是基質(zhì)效應(yīng)干擾，本試驗(yàn)采用基質(zhì)加標(biāo)作為定量依據(jù)，防止基質(zhì)效應(yīng)干擾。四是本試驗(yàn)液相梯度設(shè)置同樣適用于超高效液相質(zhì)譜測(cè)定蔬菜中農(nóng)藥多殘留檢測(cè)。

(作者單位：滄州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)中心)