邸勝娟 羅世瓊 楊占南 鄭筑 胡娟 趙鋮
摘要:為探索影響黃花蒿酚類(lèi)組分累積的土壤因素,測(cè)定了黃花蒿東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素含量及土壤養(yǎng)分含量、酶活性、微生物標(biāo)記性磷脂脂肪酸(PLFAs)含量,并對(duì)其進(jìn)行相關(guān)性及因子分析。結(jié)果表明,不同樣地黃花蒿東莨菪內(nèi)酯含量、貓眼草酚含量、貓眼草黃素含量、根際土壤養(yǎng)分含量、酶活性及微生物PLFAs含量存在差異;土壤有效磷含量與東莨菪內(nèi)酯含量呈顯著正相關(guān)(P<0.05),與黃花蒿貓眼草酚、貓眼草黃素含量呈極顯著正相關(guān)(P<001);速效鉀含量與貓眼草黃素含量呈顯著正相關(guān)(P<0.05);有速效鉀、有效磷是影響黃花蒿東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素含量的主要因子。人工栽培黃花蒿可結(jié)合當(dāng)?shù)赝寥缹?shí)際狀況,適量增施磷肥與鉀肥,可促進(jìn)黃花蒿東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素含量的增加,這為人工栽培黃花蒿,提高黃花蒿的品質(zhì)提供了科學(xué)的理論依據(jù)。
關(guān)鍵詞:黃花蒿;酚類(lèi)物質(zhì);養(yǎng)分;酶活性;磷脂脂肪酸
中圖分類(lèi)號(hào): S567.21+9.06文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A
文章編號(hào):1002-1302(2017)11-0085-05[HS)][HT9.SS]
黃花蒿(Artemisia annua L.) 為菊科蒿屬一年生草本植物,具有重要的醫(yī)藥功能,作為中藥材已有上千年的歷史[1]。例如,從黃花蒿葉中分離提取的青蒿素被世界衛(wèi)生組織列為治療瘧疾的首選藥物[2]。受不同生長(zhǎng)環(huán)境如氣候、土壤等因素的影響,黃花蒿藥效組分含量差異明顯(青蒿含量 001%~1.50%,總多酚含量56~530 mg/g)[3]。目前,有關(guān)產(chǎn)地、生長(zhǎng)階段、施肥等因素對(duì)黃花蒿藥效組分的影響已有文獻(xiàn)報(bào)道[4],黃花蒿主要揮發(fā)性組分隨不同產(chǎn)地及種植環(huán)境不同而差異顯著[5];黃花蒿葉片中青蒿素含量在花蕾前期最高,隨著生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),其含量反而降低[6];施肥對(duì)黃花蒿抗瘧相關(guān)組分有一定的影響[7]。然而,關(guān)于土壤條件對(duì)黃花蒿酚類(lèi)物質(zhì)影響的報(bào)道較少。黃花蒿藥效組分含量總是受到生長(zhǎng)環(huán)境的影響[8],其土壤條件是一個(gè)重要的影響因素,因?yàn)橥寥琅c植物根系復(fù)雜的物理、化學(xué)及生物過(guò)程,必然影響?zhàn)B分、酶活性及微生物特征[9-13],從而影響黃花蒿根系對(duì)養(yǎng)分的吸收,進(jìn)而影響黃花蒿藥效組分的含量。因此,研究土壤環(huán)境因素對(duì)黃花蒿藥效組分的影響,對(duì)提高其藥效組分含量,實(shí)現(xiàn)提高其藥材品質(zhì)具有重要意義。
我國(guó)野生黃花蒿資源豐富,尤以西南地區(qū)品種最多,分布面積較大。有報(bào)道指出,位于亞熱帶季風(fēng)氣候區(qū)的貴州、廣西、重慶和湖南等地適宜野生黃花蒿的人工種植[14]。研究證實(shí)黃花蒿酚類(lèi)物質(zhì)包括東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素,該類(lèi)物質(zhì)具有協(xié)同青蒿素提高其抗瘧和抗癌作用,并具有較高的抗氧化活性[15]。黃花蒿酚類(lèi)組分含量的變化引起了人們的廣泛關(guān)注。本試驗(yàn)采樣地點(diǎn)選擇氣候條件基本一致的貴州省黎平縣、劍河縣以及榕江縣等6個(gè)采樣點(diǎn),通過(guò)采集在相似氣候條件下不同土壤中生長(zhǎng)的黃花蒿植株及根際土壤,對(duì)野生黃花蒿葉片酚類(lèi)物質(zhì)(東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素)含量與土壤養(yǎng)分、酶活性以及微生物磷脂脂肪酸(PLFAs)含量進(jìn)行測(cè)定,并對(duì)其進(jìn)行相關(guān)性分析及因子分析,探索黃花蒿土壤特征對(duì)黃花蒿酚類(lèi)物質(zhì)累積的影響因素,為提高人工栽培黃花蒿的品質(zhì)提供科學(xué)的理論依據(jù)。
1材料與方法
1.1試驗(yàn)區(qū)域選擇
采樣地點(diǎn)位于貴州省黔東南苗族侗族自治州劍河縣、榕江縣、黎平縣,均屬亞熱帶濕潤(rùn)季風(fēng)氣候,年平均氣溫15.6~18.1 ℃,無(wú)霜期310~326 d,降水量1 093.2~1 226.5 mm,采樣地點(diǎn)氣候條件基本一致。樣地均為典型的丘陵山區(qū)地形地貌,黃花蒿自然生長(zhǎng)均在3年以上,形成了優(yōu)勢(shì)植物,群落內(nèi)以及周?chē)须s草,沒(méi)有木本植物。
1.2樣品采集
采樣時(shí)間為2015年8月,在花蕾期采集黃花蒿植株及根際土壤。每個(gè)樣地隨機(jī)采集長(zhǎng)勢(shì)基本一致的黃花蒿植株以及根際土壤,采集生長(zhǎng)土壤時(shí),挖取黃花蒿植株,抖掉易脫落的土壤,收集黏附于根系表面的土壤(每株約20 g)。取樣后,將土樣平均分成2份,裝入無(wú)菌塑料樣品袋,迅速運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室,剔除石塊、植物殘根等雜質(zhì),一份自然風(fēng)干,檢測(cè)土壤理化性質(zhì)及酶活性,另一份于-4 ℃冰箱中保存,用于測(cè)定土壤微生物標(biāo)記性的磷脂脂肪酸含量;收集新鮮黃花蒿葉片,測(cè)定東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素的含量,取少量葉片于60 ℃烘干測(cè)定水分系數(shù)。采集黃花蒿樣點(diǎn)的地理信息及土壤類(lèi)型如表1所示。
1.3測(cè)定項(xiàng)目與方法
采用常規(guī)方法檢測(cè)土壤基本理化性質(zhì)[16],土壤pH值采用玻璃電極法(25 mL水、5 g土) 測(cè)定;有機(jī)質(zhì)含量采用重鉻酸[CM(25]鉀氧化-外加熱法測(cè)定;土壤全氮、全磷、全鉀含量的測(cè)定[CM)][FL)]
色法、1 mol/L乙酸銨浸提-火焰光度法。土壤脲酶活性測(cè)定采用苯酚-次氯酸鈉比色法[17];蔗糖酶活性測(cè)定采用3,5-二硝基水楊酸比色法[18];磷酸酶活性測(cè)定采用磷酸苯二鈉比色法[19]。
黃花蒿葉片東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素含量采用高效液相色譜儀(HPLC-20AT)分析[20],將黃花蒿新鮮葉片用研缽磨碎,精確稱(chēng)取0.500 0 g,加入20 mL無(wú)水乙醇,靜置過(guò)夜,超聲處理30 min,過(guò)濾,采用色譜柱Waters PAH C18 (250 mm × 4.6 mm × 5 μm)、二極管陣列檢測(cè)器及Lc-solusion 2.5色譜工作站,流動(dòng)相A相乙腈、甲醇體積比為 11 ∶[KG-*3]5,B相水、甲酸體積比為0.1 ∶[KG-*3]100,檢測(cè)波長(zhǎng)為345 nm,梯度洗脫,通過(guò)外標(biāo)法計(jì)算其含量。
新鮮土壤微生物PLFAs含量采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GCMS-QP2010)分析。參照Bligh等的方法[21]對(duì)土壤微生物的PLFAs進(jìn)行提取;色譜柱為HP-5MS(30 m×0.25 mm×0. 25 μm)石英毛細(xì)管色譜柱;升溫程序?yàn)?0 ℃(5 min),以20 ℃/min升至190 ℃(1 min),以5 ℃/min升至200 ℃(2 min),再以10 ℃/min 升至280 ℃(8 min);進(jìn)樣口溫度為250 ℃;離子源溫度為230 ℃;載氣為He(0.9 mL/min);分流比為10 ∶[KG-*3]1,質(zhì)量掃描范圍30~500 m/z。內(nèi)標(biāo)為十九烷酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品,土壤微生物脂肪酸甲酯混和標(biāo)樣為細(xì)菌酸甲酯混合物(bacterial acid methyl esters mix,47080-U,Sigma-Aldrich)。
按照Frostegard等的方法[22]對(duì)PLFAs進(jìn)行命名。細(xì)菌類(lèi)群的PLFAs為2-OH 10:0、11:0、12:0、2-OH 12:0、3-OH 12:0、13:0、14:0、2-OH 14:0、15:0、i15:0、α15:0、16:0、2-OH 16:0、i16:0、i17:0、ω7c16:1、cy17:0、17:0、cy17:0。其中格蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌(G+)為i15:0、α15:0、i16:0、i17:0;格蘭氏陰性細(xì)菌(G-)為2-OH 10:0、2-OH 12:0、3-OH 12:0、2-OH 14:0、2-OH 16:0、16:1ω7c、cy17:0、cy19:0[21-22]。真菌類(lèi)群為18:2ω6,9、18:1ω9c,18:1ω9t。放線菌類(lèi)群為10Me18:0。線蟲(chóng)為20:0[23]。
1.4統(tǒng)計(jì)分析
每組試驗(yàn)均作空白處理和3組平行試驗(yàn)。數(shù)據(jù)通過(guò) Excel 進(jìn)行整理和繪圖,采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析、單因素方差分析檢驗(yàn)樣地間酚類(lèi)物質(zhì)、土壤特征是否存在顯著性差異;多重比較采用LSD法;土壤特征與黃花蒿酚類(lèi)組分之間的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析;黃花蒿酚類(lèi)組分的土壤影響因素采用因子分析。
2結(jié)果與分析
[HTK]2.1黃花蒿酚類(lèi)物質(zhì)含量分析[HT]
由圖1可知,東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚和貓眼草黃素含量分別為490.6~1 283.6、82.1~348.3、232.5~587.6 mg/kg,并且其含量表現(xiàn)為東莨菪內(nèi)酯>貓眼草黃素>貓眼草酚;東莨菪內(nèi)酯含量較高的樣地為QH-T1、QH-T2、QH-T3,貓眼草酚含量較高的樣地為QH-T1、QH-T3,貓眼草黃素含量較高的樣地為QH-T1;QH-T3、QH-T4樣地樣品的東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素含量均差異顯著;東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素含量最高分別是最低的2.61、4.24、2.53倍。說(shuō)明黃花蒿東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素含量受氣候條件及土壤環(huán)境等多因素的綜合影響。
2.2黃花蒿土壤養(yǎng)分特征
由表2可知,不同黃花蒿樣地土壤pH值存在差異,pH值在6.13~7.65之間。棕壤和黃棕壤的pH值高于黃壤。土壤全量養(yǎng)分是衡量土壤肥力的重要指標(biāo)之一,且不同土壤類(lèi)型的土壤全量養(yǎng)分不同。測(cè)定樣品土壤中全氮含量最高的是最低的2.38倍,土壤全磷含量最高的是最低的6.19倍,而全鉀含量最高的是最低的2.04倍。黃花蒿土壤全氮、全磷含量與東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素含量變化沒(méi)有明顯的規(guī)律性關(guān)系,說(shuō)明土壤全氮、全磷對(duì)黃花蒿東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素含量的變化沒(méi)有直接影響。不同樣地樣品的黃花蒿土壤堿解氮、有效磷、速效鉀含量分別在16.95~75.61、5.54~47.59、42.04~613.78 mg/kg之間。圖1顯示QH-T4樣品的黃花蒿東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素含量均較低,其土壤堿解氮、有效磷、速效鉀含量也較低,說(shuō)明黃花蒿土壤有效養(yǎng)分有助于植物根系吸收養(yǎng)分,提高植物內(nèi)部營(yíng)養(yǎng)元素的形成,這與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果[14]基本一致。不同樣地黃花蒿土壤有機(jī)質(zhì)含量在7.00~ 29.70 g/kg之間,有機(jī)質(zhì)含量較高的QH-T5、QH-T6樣品,其堿解氮和有效磷含量也較高,而有機(jī)質(zhì)含量最低的QH-T4樣品,其堿解氮和有效磷含量也較低,說(shuō)明土壤有機(jī)質(zhì)不但是土壤肥力的重要指標(biāo),也是土壤中氮和磷的重要來(lái)源。
2.3黃花蒿土壤酶活性特征
土壤酶作為土壤生態(tài)系統(tǒng)最為活躍的生物活性物質(zhì),能夠促進(jìn)物質(zhì)循環(huán)與能量流動(dòng),某種程度上反映了土壤養(yǎng)分的動(dòng)態(tài)轉(zhuǎn)化[24]。脲酶能催化尿素水解,土壤氮素狀況及理化性狀與其活性變化有關(guān)。由圖2可知,不同樣地土壤脲酶活性在11.94~27.25 mg/g之間(圖2-A),有些樣地間脲酶活性差異顯著,QH-T5樣品脲酶活性為27.25 mg/g,是QH-T4樣品脲酶活性(11.94 mg/g)的2.28倍;脲酶活性與堿解氮含量變化類(lèi)似,QH-T5的堿解氮含量與脲酶活性均較高,說(shuō)明脲酶能夠促進(jìn)氮含量轉(zhuǎn)換和利用。蔗糖酶反映了土壤生物活性強(qiáng)弱與物質(zhì)轉(zhuǎn)化的速度,由圖2-B可知,不同樣地黃花蒿土壤蔗糖酶活性存在差異,在136.50~831.65 mg/g之間,有些樣地間蔗糖酶活性差異顯著,QH-T6樣品蔗糖酶活性為831.65 mg/g,是QH-T4樣品蔗糖酶活性(136.50 mg/g)的6.09倍,說(shuō)明土壤生物活性強(qiáng)度與物質(zhì)轉(zhuǎn)化的速度存在差異。磷酸酶能夠促進(jìn)有機(jī)磷化合物分解,其活性直接影響土壤中磷的有效性,由圖2-C可知,不同樣地間黃花蒿土壤磷酸酶活性存在差異,在6.18~43.15 mg/g之間,有些樣地間磷酸酶活性差異顯著,QH-T6樣品的磷酸酶活性(43.15 mg/g)是QH-T4樣品磷酸酶活性(6.18 mg/g)的 6.98 倍,說(shuō)明不同樣地間黃花蒿土壤中分解磷酸酶的能力存在差異。不同樣地樣品黃花蒿土壤脲酶、蔗糖酶以及磷酸酶活性的差異表明土壤類(lèi)型影響土壤酶活性,從而影響其酚類(lèi)物質(zhì)的積累,主要體現(xiàn)在黃花蒿酚類(lèi)物質(zhì)含量的差異上。[FL)]
2.4黃花蒿土壤微生物特征
類(lèi)群不同的土壤微生物,其活細(xì)胞的PLFAs組成成分具有相對(duì)的穩(wěn)定性,通過(guò)其豐度及組成可對(duì)土壤微生物群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)[25]。本試驗(yàn)不同樣地黃花蒿土壤中共檢出19種PLFAs,包括細(xì)菌14種、真菌(C18:2ω6,9、18:1ω9c,18:1ω9t)、放線菌(10Me18:0)、線蟲(chóng)(20:0);不同樣地黃花蒿土壤微生物包括G+、G-、細(xì)菌、真菌、放線菌、線蟲(chóng)。由表3可知,土壤微生物的PLFAs含量存在差異,G+、G-、細(xì)菌、真菌、放線菌、線蟲(chóng)以及總微生物PLFAs的含量范圍分別為1.38~4.10、3.54~10.68、43.71~135.05、2.83~1080、477~787、0.48~0.84、54.87~147.62 mg/kg,有些樣地間PLFAs含量差異顯著,最高含量分別是最低含量的 2.97、301、309、3.81、1.65、1.75、2.69倍;黃花蒿土壤微生物的PLFAs含量均表現(xiàn)為細(xì)菌最高、線蟲(chóng)最低,并且細(xì)菌的PLFAs含量占總微生物PLFAs的77.30%~ 91.48%,表明細(xì)菌在活化黃花蒿土壤養(yǎng)分方面起主要作用。變異系數(shù)反映了采樣點(diǎn)之間的平均變異程度,不同樣地黃花蒿土壤各種微生物PLFAs含量的變異系數(shù)均大于10%,為中等變異強(qiáng)度,表明不同樣地黃花蒿土壤微生物群落結(jié)構(gòu)、豐度和組成成分存在差異。
2.5土壤特征與黃花蒿酚類(lèi)組分含量的相關(guān)性分析
不同土壤類(lèi)型,其理化性質(zhì)也不同,黃花蒿酚類(lèi)組分存在差異。由表4可知,東莨菪內(nèi)酯含量與貓眼草酚、貓眼草黃素含量呈顯著正相關(guān)(P<0.05),表明黃花蒿東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素的累積是相互促進(jìn)的。有機(jī)質(zhì)具有改善土壤理化性質(zhì)的重要作用,黃花蒿土壤有機(jī)質(zhì)含量與酚類(lèi)物質(zhì)含量均未呈顯著相關(guān),說(shuō)明有機(jī)質(zhì)并不直接影響黃花蒿酚類(lèi)物質(zhì)的累積,有機(jī)質(zhì)含量與有效磷含量、堿解氮含量、全氮含量、全磷含量、磷酸酶活性、脲酶活性、蔗糖酶活性呈顯著或極顯著正相關(guān)(P<0.05或P<001),表明有機(jī)質(zhì)可能是土壤氮和磷的來(lái)源。土壤pH值與微生物總PLFAs含量呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05),與磷酸酶活性、蔗糖酶活性呈極顯著負(fù)相關(guān)(P<0.01),表明pH值的升高不利于微生物生長(zhǎng),同時(shí)減小酶的活性。土壤酶是土壤中具有生物活性的蛋白質(zhì),可與微生物共同推動(dòng)土壤生物化學(xué)過(guò)程。磷酸酶可催化磷酸脂類(lèi)或磷酸酐的水解,其活性直接影響土壤中磷的生物有效性,磷酸酶[CM(25]活性與土壤有效磷含量呈極顯著正相關(guān)(P<0.01),磷酸酶能將土壤中有機(jī)磷或無(wú)機(jī)磷轉(zhuǎn)化為植物可吸收利用的形態(tài)。黃花蒿土壤有效磷含量與東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素含量呈顯著或極顯著正相關(guān)(P<0.05或 P<0.01),說(shuō)明土壤有效磷能夠促進(jìn)黃花蒿葉片東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素含量的增加,主要源于磷酸酶的活化;土壤速效鉀含量與貓眼草黃素含量呈顯著正相關(guān)(P<0.05),全鉀含量與貓眼草酚、貓眼草黃素含量分別呈顯著正相關(guān)(P<0.05)、極顯著正相關(guān)(P<001),表明速效鉀可以促進(jìn)貓眼草黃素含量的增加;土壤微生物總PLFAs含量與全鉀含量呈顯著正相關(guān)(P<005),說(shuō)明黃花蒿土壤微生物可以活化土壤中的鉀,使得土壤中有效磷和速效鉀的含量得到提高,有利于黃花蒿對(duì)有效磷和速效鉀的吸收利用,從而促進(jìn)黃花蒿植株的生長(zhǎng)以及葉片中東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素的累積。
2.6土壤養(yǎng)分及微生物與黃花蒿酚類(lèi)物質(zhì)含量因子分析
對(duì)黃花蒿土壤有機(jī)質(zhì)含量、全氮含量、全磷含量、全鉀含量、堿解氮含量、有效磷含量、速效鉀含量、脲酶活性、磷酸酶活性、蔗糖酶活性、微生物總PLFAs含量以及pH值影響黃花蒿東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素含量的12項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行因子分析,通過(guò)KMO(Kaiser-Meyer-Olkin)、Bartlett檢驗(yàn),結(jié)果得到KMO值為0573,P值為0.000,小于顯著水平005,表示適合做因子分析。由表5可知,前3個(gè)公共因子的特征值均大于1,累積方差貢獻(xiàn)率達(dá)到88.221%,表明前3個(gè)公共因子基本可以反映影響整個(gè)黃花蒿東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素含量因子的信息。
由于各因子負(fù)載值趨于兩極分化,對(duì)前3個(gè)公共因子采用方差極大正交旋轉(zhuǎn)后的因子載荷矩陣具有一定的生物學(xué)意義?;诟饕蜃釉谀骋怀煞值妮d荷大小確定其所起作用,由表6可知,速效鉀、有效磷含量和pH值3項(xiàng)指標(biāo)對(duì)第1個(gè)公共因子起主要作用,方差貢獻(xiàn)率為54.293%。有機(jī)質(zhì)含量、堿解氮含量、全氮含量、脲酶活性、磷酸酶活性、蔗糖酶活性、微生物總PLFAs含量等7個(gè)指標(biāo)對(duì)第2個(gè)公共因子起主要作用,其方差貢獻(xiàn)率為 19.452%,全鉀、全磷含量這2項(xiàng)指標(biāo)對(duì)第3個(gè)公共因子起主要作用,其方差貢獻(xiàn)率為14.068%。結(jié)果表明,影響黃花蒿東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素含量的主要因子有速效鉀、有效磷含量,其次為有機(jī)質(zhì)含量、堿解氮含量、全氮含量、磷酸酶活性、脲酶活性、蔗糖酶活性、微生物總PLFAs含量,這和分析土壤特征與黃花蒿酚類(lèi)組分相關(guān)性的結(jié)果基本一致。
3結(jié)論
通過(guò)不同樣地土壤特征與黃花蒿酚類(lèi)物質(zhì)含量的相關(guān)分析及因子分析,初步明確土壤有效磷含量能夠促進(jìn)黃花蒿葉片東莨菪內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素含量的增加,速效鉀含量能夠促進(jìn)貓眼草黃素含量的增加;人工栽培黃花蒿可結(jié)合當(dāng)?shù)赝寥缹?shí)際狀況,適量增施磷肥與鉀肥,可促進(jìn)黃花蒿東莨菪[CM(25]內(nèi)酯、貓眼草酚、貓眼草黃素的累積。這為人工栽培
蒿,提高黃花蒿的品質(zhì)提供了科學(xué)的理論依據(jù)。
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