朱芹華

加標(biāo)回收率的簡(jiǎn)介：加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)是化學(xué)分析中常用的實(shí)驗(yàn)方法，回收率是判定分析結(jié)果準(zhǔn)確度的量化指標(biāo)。本公式只針對(duì)本實(shí)驗(yàn)的回收率計(jì)算：R=（加標(biāo)試樣測(cè)定值-試樣測(cè)定值）/加標(biāo)量×100%。

ARA和DHA的檢測(cè)現(xiàn)狀：對(duì)高級(jí)不飽和脂肪酸分析檢測(cè)的文獻(xiàn)報(bào)道較多，其中氣相色譜法應(yīng)用較為普及，樣品的處理過(guò)程也較為簡(jiǎn)單。

實(shí)驗(yàn)

試劑和材料。

（1）乙酰氯甲醇溶液（體積分?jǐn)?shù)為10 %）：量取80 mL 甲醇于100 mL 干燥的燒杯中，吸取10.0mL乙酰氯逐滴加入，不斷攪拌，冷卻后轉(zhuǎn)移并定容至100 mL 干燥的容量瓶中。臨用前配制。

（2）碳酸鈉溶液：稱(chēng)取60.0 g 無(wú)水碳酸鈉于1000 mL 燒杯中，加水溶解，轉(zhuǎn)移并用水定容至1000 mL 容量瓶中。

分析步驟。

（1）樣品預(yù)處理：稱(chēng)取奶粉試樣0.5 g于12 mL 干燥螺口玻璃管中，加入5.0 mL 甲苯，在試樣中加入10 %乙酰氯甲醇溶液6.0 mL，旋緊螺旋蓋，振蕩混合后于80 ℃ ±1 ℃水浴中放置2 h，期間每隔20 min取出振搖一次，水浴后取出冷卻至室溫。將反應(yīng)后的樣液轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中，用3.0 mL碳酸鈉溶液清洗玻璃管三次，合并碳酸鈉溶液于50 mL離心管中，混勻，8000 轉(zhuǎn)/分鐘離心5 min。取上清液過(guò)0.22um過(guò)濾膜，濾液作為試液，氣相色譜儀測(cè)定。

（2）加標(biāo)樣品的預(yù)處理：稱(chēng)取奶粉試樣0.5g于12 mL 干燥螺口玻璃管中，往玻璃管中加入不同量的標(biāo)準(zhǔn)溶液后加入5mL甲苯，進(jìn)行處理。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備。將10mg/mL的ARA和DHA標(biāo)準(zhǔn)品用甲苯稀釋到0.01，0.02，0.05，0.10，0.20mg/mL的濃度，進(jìn)行進(jìn)樣，進(jìn)樣量為1uL 。

樣品溶液的測(cè)定。

（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的測(cè)定：分別吸取1.0 μL ARA和DHA標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液注入色譜儀，以色譜峰響應(yīng)值定量。標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖：

圖1中可見(jiàn)，ARA在在上述條件下進(jìn)行色譜分析，以分面積定量，對(duì)濃度為0.01、0.02、0.05、0.10、0.20mg/mL的ARA標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行進(jìn)行并線性回歸。結(jié)果表明，ARA在0.01～0.20濃度范圍內(nèi)線性良好，線性回歸方程式為：Y=34055243.15X+29938.88；r2=0.999774

圖2中可見(jiàn)，DHA在在上述條件下進(jìn)行色譜分析，以分面積定量，對(duì)濃度為0.01、0.02、0.05、0.10、0.20mg/mL的ARA標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行進(jìn)行并線性回歸。結(jié)果表明，ARA在0.01～0.20濃度范圍內(nèi)線性良好，線性回歸方程式為：Y=34703183.04X+30065.29；r2=0.999470

（2）樣品溶液的測(cè)定：吸取1.0uL的樣品測(cè)定液注入色譜儀，以色譜峰響應(yīng)值根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。結(jié)果如下表：

ARA加標(biāo)樣品：當(dāng)添加量是樣品含量的0.5倍時(shí)，平均回收率在108.5%；當(dāng)添加量是樣品含量的1.0倍時(shí)，平均回收率在98.4%；當(dāng)添加量是樣品含量的2.0倍時(shí)，平均回收率在100.7%；當(dāng)添加量是樣品含量的4.0倍時(shí)，平均回收率在80.2%。

DHA加標(biāo)樣品：當(dāng)添加量是樣品含量的0.5倍時(shí)，平均回收率在101.5%；當(dāng)添加量是樣品含量的1.0倍時(shí)，平均回收率在101.1%；當(dāng)添加量是樣品含量的2.0倍時(shí)，平均回收率在107.8%；當(dāng)添加量是樣品含量的4.0倍時(shí)，平均回收率在89.6%；

結(jié)果與討論

從圖3中可以看出，檢測(cè)ARA時(shí)，當(dāng)加標(biāo)量在樣品含量的1.0-2.0倍時(shí)，回收率效果最好，回收率在97.6%-103.5%，RSD值在0.48-2.36；

從圖4中可以看出，檢測(cè)DHA時(shí)，當(dāng)加標(biāo)量在樣品含量的0.5-1.0倍時(shí)，回收率效果最好，回收率在101.1%-101.5%，RSD值在0.22-0.71；

結(jié)論

（1）檢測(cè)ARA時(shí)，當(dāng)加標(biāo)量在樣品含量的1.0-2.0倍時(shí)，回收率效果最好。

（2）檢測(cè)DHA時(shí)，當(dāng)加標(biāo)量在樣品含量的0.5-1.0倍時(shí)，回收率效果最好。

（3）從圖3和圖4中可以明顯看出，不同的加標(biāo)量對(duì)回收率有著明顯的影響和差異，當(dāng)檢測(cè)結(jié)果需要體現(xiàn)回收率時(shí)，適當(dāng)?shù)募訕?biāo)量可以獲得較好的回收率。較好的回收率對(duì)于嬰幼兒奶粉中DHA和ARA等物質(zhì)的檢測(cè)，提供更可靠的數(shù)據(jù)。