張 軍，蘇本正，石典花，孫立立（山東省中醫(yī)藥研究院，濟南 250014）

·實驗研究·

4種不同藥材來源郁金飲片醋炙前后的HPLC特征圖譜分析及水煎出物含量比較Δ

張 軍＊，蘇本正，石典花#，孫立立（山東省中醫(yī)藥研究院，濟南 250014）

目的：研究4種不同藥材來源郁金生品及醋炙品水煎液的共有特征成分峰，并比較其水煎出物含量，為解析臨床用郁金飲片的多來源性及補充和完善郁金的質量標準提供參考。方法：采用高效液相色譜法測定不同藥材來源郁金（溫郁金、桂郁金、黃絲郁金和綠絲郁金）生品和醋炙品的特征圖譜，通過指紋圖譜軟件和鏡像對比進行成分分析，并比較其醋炙前后水煎出物含量的變化。結果：4種不同藥材來源郁金生品及醋炙品均有7個共有特征成分峰，醋炙對郁金各成分峰均有不同程度的影響，有的峰面積增加、有的峰面積減少、有新產生的成分峰、亦有消失的成分峰；但醋炙后4種不同藥材來源郁金的共有成分沒有發(fā)生質的變化，僅色譜峰面積有增減，溫郁金、桂郁金、黃絲郁金醋炙后7個共有成分中有5個共有成分峰面積增大，而綠絲郁金醋炙后7個共有成分中僅3個共有成分峰面積增大。醋炙后4種不同藥材來源郁金水煎出物含量均增加。結論：4種不同藥材來源郁金含有7種共有成分；醋炙對其共有成分無質的影響，但會增加其色譜峰峰面積和水煎出物含量。

郁金生品；郁金醋炙品；高效液相色譜法；特征圖譜；水煎出物

郁金為姜科多年生草本植物植物溫郁金（Curcuma wenyujin Y.H.chenet C.Ling）、姜黃（Curcuma Longa L、）廣西莪術（Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang）、蓬莪術（Curcuma phaeocaulis Val.）的干燥塊根，前兩者分別習稱“溫郁金”和“黃絲郁金”，其余按性狀不同習稱“桂郁金”或“綠絲郁金”。郁金性寒，味辛、苦，歸心、肝、膽經，具有行氣化瘀、清心解郁、利膽退黃之功[1]，為臨床常用中藥。郁金為中藥分類中“同名多基源”的典型代表，4種不同藥材來源的郁金飲片在外觀性狀、化學組成和成分含量上均有較大差異[2-8]，但在臨床上卻作為同一藥物使用，是否有科學依據還未知。

目前中醫(yī)臨床常用的郁金飲片規(guī)格有生品和醋炙品兩種[9]，雖然《中國藥典》至今尚未收載醋郁金飲片，但在《全國中藥飲片炮制規(guī)范》與各地中藥炮制規(guī)范及炮制專著中均有收載[10]。郁金經醋炙后可起到引藥入肝、增強緩急止痛的作用[11]。但郁金醋炙后功效發(fā)生改變的物質基礎尚不明確。

鑒于此，本研究以4種不同藥材來源郁金生品、醋炙品水煎液（中醫(yī)臨床入藥方式）為研究對象，采用高效液相色譜（HPLC）法測得其水煎液的特征圖譜，以期找出4種不同藥材來源的郁金生品、醋炙品能作為同種藥物入藥的依據，并初步解析郁金醋炙前后功效發(fā)生改變的物質基礎，為明確臨床用郁金飲片多來源的科學性以及進一步補充和完善郁金的質量標準提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Waters 2695型HPLC儀、2996型檢測器（美國Waters公司）；XS205DU10－5型電子天平（瑞士Mettler公司）；TDL-40B型離心機（上海安亭科學儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

溫郁金飲片（浙江中醫(yī)藥大學飲片廠）、桂郁金飲片（廣西玉林藥材市場）、黃絲郁金飲片（四川省中藥飲片有限公司）、綠絲郁金飲片（四川荷花池藥材市場），經山東省中醫(yī)藥研究院林慧彬研究員鑒定以上飲片符合2015年版《中國藥典》（一部）郁金飲片項下標準；醋溫郁金飲片、醋桂郁金飲片、醋黃絲郁金飲片、醋綠絲郁金飲片為本課題組按照前期優(yōu)選的最佳醋炙工藝[12]自制；水為超純水；甲醇、乙腈為色譜純；石油醚、二氯甲烷、正丁醇、丙酮、甲醇、甲酸、氯仿、磷酸等均為分析純。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液的制備

分別取4種不同藥材來源的郁金生品、醋炙品各10 g，精密稱定，置于250 mL圓底燒瓶中，加10倍量水浸泡1 h，加熱回流提取1 h，趁熱過濾；藥渣再加10倍量水加熱回流提取1 h，趁熱過濾；合并2次濾液，以離心半徑為10 cm、3 500 r/min離心5 min，取上清液減壓濃縮至25 mL，分別得各郁金生品與醋炙品的水煎液，過0.45 μm微孔濾膜，作為供試品溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱：Lichrospher ODS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.3%磷酸（A）-乙腈（B），梯度洗脫（0～10 min，95%A；10～60 min，95%A～70%A；60～80 min，70%A；80～120 min，70%A～50%A）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：254 nm；進樣量：10 μL。

2.3 方法學考察

以2015年版《中國藥典》（一部）收載的第一品種溫郁金為研究對象，采用上述色譜條件進行精密度、重復性和穩(wěn)定性（室溫放置24 h）的方法學考察。結果，精密度、重復性和穩(wěn)定性試驗圖譜中特征峰峰面積、保留時間的RSD均小于3%，說明儀器精密度和重復性較好、供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.4 4種不同藥材來源郁金生品、醋炙品的HPLC特征圖譜分析

分別精密吸取上述4種不同藥材來源郁金生品、醋炙品的供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按“2.2”項下色譜條件進行測定，采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統（2004A）建立特征圖譜。4種不同藥材來源郁金生品、醋炙品的HPLC特征譜圖譜見圖1、圖2（圖中1～7號峰為4種不同藥材來源生品或醋炙品的共有峰）。

圖1 4種不同藥材來源郁金生品的HPLC特征圖譜Fig 1 HPLC characteristics spectrums of crude curcumae radix from 4 different sources

圖2 4種不同藥材來源郁金醋炙品的HPLC特征圖譜Fig 2 HPLC characteristics spectrums of vinegar roasted products of curcumae radix from 4 different sources

由圖1可見，4種不同藥材來源郁金生品水煎液的HPLC特征圖譜中存在共同或相似的色譜峰，且這些色譜峰至少有7個共有峰，說明4種不同藥材來源郁金生品確存在共有的化學成分；此外，黃絲郁金生品的色譜峰最多，桂郁金生品的色譜峰最少，黃絲郁金與其余3種郁金生品的特征圖譜差異較大。由圖2可見，4種不同藥材來源郁金醋炙品水煎液的HPLC特征圖譜中同樣存在至少7個共同或相似的色譜峰，說明4種不同藥材來源郁金醋炙品亦存在共有的化學成分；此外，黃絲郁金醋炙品的色譜峰亦最多，桂郁金醋炙品的色譜峰亦最少，黃絲郁金醋炙品亦與其他3種郁金醋炙品的特征圖譜差異較大。對4種不同藥材來源郁金生品及醋炙品的色譜峰進行統計，結果見表1。

由表1可知，4種不同藥材來源郁金生品中溫郁金、桂郁金和綠絲郁金的共有成分較多。其中，溫郁金與綠絲郁金的色譜圖相似度最高，兩者共有成分也最多，共計19個；黃絲郁金的特有色譜峰數目最多，共計14個。4種不同藥材來源郁金醋炙品中醋溫郁金、醋桂郁金和醋綠絲郁金的共有成分較多。其中，醋溫郁金與醋綠絲郁金的色譜圖相似度最高，兩者共有成分也最多，共計19個；醋黃絲郁金的特有色譜峰數目最多，共計11個。郁金醋炙品水煎液的HPLC特征圖譜與生品基本一致，未發(fā)生較為明顯的變化。醋炙后溫郁金、綠絲郁金和黃絲郁金三者之間共有特征成分峰較生品增加了4個，且均是原溫郁金與綠絲郁金生品的共有成分峰；綠絲郁金和黃絲郁金醋炙后的共有峰較生品增加了2個；溫郁金和黃絲郁金醋炙后無共有峰；綠絲郁金和黃絲郁金醋炙后單獨特有的色譜峰較生品分別減少了1、3個。

表1 4種不同藥材來源郁金生品及醋炙品的色譜峰統計結果Tab 1 Statistic results of chromatographic peaks of crude curcumae radix and the vinegar roasted products from 4 different sources

2.5 4種不同藥材來源郁金生品-醋炙品的鏡像分析

采用畫圖軟件將4種不同藥材來源郁金生品、醋炙品水煎液的HPLC特征圖譜進行鏡像對比，結果見圖3。

由圖3可知，4種不同藥材來源郁金醋炙前后HPLC特征圖譜相似，但有的色譜峰的峰面積增加了，有的色譜峰的峰面積減小甚至有的色譜峰消失了，亦有新的色譜峰產生。4種不同藥材來源郁金生品-醋炙品HPLC特征圖譜中7個共有特征成分色譜峰的峰面積變化情況見表2，4種不同藥材來源郁金醋炙前后HPLC特征圖譜所有特征成分色譜峰的變化情況見表3。

圖3 4種不同藥材來源郁金生品-醋炙品HPLC特征圖譜鏡像圖Fig 3 Mirror images of HPLC characteristics spectrums of crude curcumae radix-the vinegar roasted products from 4 different sources

表2 4種不同藥材來源郁金生品-醋炙品HPLC特征圖譜中7個共有特征成分色譜峰的峰面積變化Tab 2 Changes of 7 common characteristic chromatographic peak areas in HPLC characteristics spectrums of crude curcumae radix-the vinegar roasted products from 4 different sources

由表2可見，4種不同藥材來源郁金醋炙后其共有成分沒有發(fā)生質的變化，僅色譜峰的峰面積有所增減。其中，除綠絲郁金外，其他3種郁金經醋炙后，7個共有成分特征峰中有5個特征峰的峰面積增大了。由表3可見，4種不同藥材來源郁金經醋炙后，所有色譜峰的峰面積均發(fā)生了不同程度的變化，總色譜峰峰面積的變化規(guī)律與共有特征峰變化規(guī)律一致。除綠絲郁金外，其他3種郁金飲片醋炙后，70%以上的色譜峰的峰面積均增加了。此外，4種不同藥材來源郁金經醋炙后均產生了新的色譜峰，經與其他3種郁金色譜圖比較發(fā)現，新增的色譜峰在其他郁金中均存在。除溫郁金外，其他3種郁金飲片醋炙后均有色譜峰消失，經與其他郁金色譜峰比較發(fā)現，綠絲郁金醋炙后消失的3個色譜峰中有2個為其獨有成分，黃絲郁金醋炙后消失的2個色譜峰均為其獨有成分。

表3 4種不同藥材來源郁金醋炙前后HPLC特征圖譜所有特征成分色譜峰變化Tab 3 Changes of all characteristic chromatographic peak in HPLC characteristics spectrums of curcumae radix from 4 different sources before and after vinegar roasted

2.6 4種不同藥材來源郁金生品、醋炙品水煎出物含量的測定

參照2015年版《中國藥典》（四部）通則2202水溶性浸出物測定法項下熱浸法[13]進行測定。結果，溫郁金、桂郁金、綠絲郁金、黃絲郁金生品的水煎出物含量分別為5.56%、9.69%、9.79%、11.7%，醋炙后分別為9.07%、12.48%、11.85%、12.51%，均較生品有所增加。

3 討論

本課題組在試驗過程中分別對甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.3%磷酸水溶液以及乙腈-0.3%磷酸水溶液為流動相進行了優(yōu)選，結果以乙腈-0.3%磷酸水溶液為流動相時分離情況為佳；通過多次摸索流動相的組成比例和洗脫時間后確定最佳梯度洗脫條件及分析測定時間；采用二極管陣列檢測器檢視，發(fā)現檢測波長為254 nm時色譜峰較多且峰形較好。在優(yōu)選的色譜條件下測得的HPLC特征圖譜中各色譜峰的分離效果相對較好，且保留時間適中，能較為全面地反映4種不同藥材來源郁金飲片的成分特征。

4種不同藥材來源郁金生品、醋炙品分別存在7種共有成分，亦有交互存在的成分，其中4種不同藥材來源郁金生品中有2種以上交互存在的成分達25種，醋炙品中有2種以上交互存在的成分達26種。筆者認為這些共有成分和交互存在的成分就是其在臨床上可以作為同一種藥物使用的物質基礎。

4種不同藥材來源郁金生品飲片經醋炙后，其水煎出物含量均增加了，這應是郁金醋炙后功效改變的根本所在。采用HPLC法測定特征圖譜后發(fā)現各色譜峰均發(fā)生了不同程度的變化，有的色譜峰的峰面積增加了，有的峰面積減小了，還有產生新的色譜峰，亦有消失的色譜峰，且消失的成分有的是其獨有成分，說明醋炙可使郁金的色譜軌跡趨于一致。筆者認為4種不同藥材來源郁金飲片醋炙前后各成分的變化應為其功效改變的物質基礎之一。

由于目前郁金中的已知成分較少，在前期試驗中筆者采用本研究中優(yōu)選的色譜條件分別以吉馬酮、姜黃素、莪術醇、莪術二酮、去甲氧基姜黃素等為對照品進行測定，結果均未檢測到，因此本研究未設標準品圖譜。而4種不同藥材來源郁金生品、醋炙品水煎液的特征圖譜表明，其存在共有成分，亦存在交互存在的成分。因此，筆者在下一步工作中將對這些成分進行重點研究，以期分離得到其共有成分，并建立其含量測定方法，以填補目前藥典收載郁金項下無含量測定項的空白。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：208.

[2] 呂文英，呂品.中藥郁金、川芎中8種無機元素含量的測定[J].微量元素和健康研究，2002，19（3）：30-31.

[3] 李琤.郁金的現代研究及臨床應用[J].醫(yī)藥衛(wèi)生，2007，36（1）：210.

[4] 蘭鳳英.郁金的藥理作用及臨床應用[J].長春中醫(yī)藥大學學報，2009，25（1）：27-28.

[5] 王見賓，張毅.中藥郁金的臨床應用概況[J].江蘇中醫(yī)藥，2005，26（6）：59-61.

[6] 李艷萍.中藥郁金的化學成分研究[J].西北大學學報：自然科學版，2000，30（5）：411-414.

[7] 葛躍偉，高慧敏，王維皓，等.桂郁金化學成分研究：Ⅰ[J].中國藥學雜志，2007，42（11）：822-824.

[8] 張娜，李敏，俸世洪.綠絲郁金HPLC指紋圖譜初步研究[J].成都中醫(yī)藥大學學報，2009，32（4）：66-68.

[9] 李敏，張娜，林琪宇，等.黃絲郁金的質量標準研究[J].成都中醫(yī)藥大學學報，2008，31（1）：55-59.

[10] 山東省食品藥品監(jiān)督管理局.山東省中藥飲片炮制規(guī)范：下冊[S].2012年版.濟南：山東科學技術出版社，2013：393.

[11] 衛(wèi)生部藥政管理局.全國中藥炮制規(guī)范[S].北京：人民衛(wèi)生出版社，1988：67.

[12] 石典花，蘇本正，孫立立，等.正交試驗法優(yōu)選郁金醋炙工藝的研究[J].中國中藥雜志，2011，36（9）：5-8.

[13] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：202.

Analysis of HPLC Characteristic Spectrum and Comparison of Water Decoction Content of Curcumae Radix Decoction Pieces from 4 Different Sources before and after Vinegar Roasted

ZHANG Jun，SU Benzheng，SHI Dianhua，SUN Lili（Shandong Academy of Chinese Medicine，Jinan 250014，China）

OBJECTIVE：To study the common characteristic component peaks in water decoction of crude curcumae radix and the vinegar roasted products from 4 different sources，compare the contents of its water decoction，and provide reference for resolving the multi-source of curcumae radix piece in clinical application，complementing and improving the quality standard of curcumae radix.METHODS：HPLC was used to determine the characteristic spectrums of crude curcumae radix and the vinegar roasted products from different sources（Curcuma wenyujin，Curcuma kwangsiensis，Curcuma longa，Curcuma phaeocaulis），and component analysis was conducted by using fingerprint software and mirror comparison.And the changes of water decoction content before and after vinegar roasted were compared.RESULTS：Both crude curcumae radix and the vinegar roasted products from 4 different sources had 7 common characteristic component peaks.Vinegar roasted had effect on peaks in different degree，some peaks areas were increased，some peaks areas were reduced，some peaks were generated，and some peaks were disappeared.However，the common components of curcumae radix from different sources showed no qualitative changes after vinegar roasted，except the increase or decrease in peak areas.Areas of 5 common component peaks were increased in the 7 common components of C.wenyujin，C.kwangsiensis and C.longa after vinegar roasted，and only 3 in C.phaeocaulis after vinegar roasted.Contents of 4 water decoctions were increased after vinegar roasted.CONCLUSIONS：There are 7 common components in curcumae radix from 4 different sources.Vinegar roasted has no qualitative effect on common components，while it can increase the chromatographic peak areas and contents of water decoction.

Crude curcuma radix；Vinegar roasted curcuma radix；HPLC；Characteristic spectrums；Water decoction

R283

A

1001-0408（2017）22-3040-04

2016-12-07

2017-03-29）

（編輯：林 靜）

國家自然科學基金資助項目（No.81503255）；山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計劃項目（No.2013-115，2011-170）

＊助理研究員。研究方向：中藥炮制。電話：0531-82949800。E-mail：sdzyybgs@sina.com

#通信作者：副研究員。研究方向：中藥炮制。電話：0531-82949829。E-mail：shidianhua81@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.22.05