雞肉源沙門氏菌血清型、藥敏性及部分耐藥基因研究

王嘉煒，肖英平，楊 華，曹晨陽，楊保偉,*

（1.西北農(nóng)林科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所，浙江 杭州 310021；3.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 浙江省植物有害生物防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310021）

雞肉源沙門氏菌血清型、藥敏性及部分耐藥基因研究

王嘉煒1，肖英平2,3，楊 華2,3，曹晨陽1，楊保偉1,*

（1.西北農(nóng)林科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所，浙江 杭州 310021；3.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 浙江省植物有害生物防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310021）

目的：研究432 株分離于陜西省楊凌及周邊城市零售雞肉中沙門氏菌的血清型分布、藥敏性及其與（氟）喹諾酮類抗菌藥物抗性相關(guān)耐藥基因的流行狀況。方法：按照玻片凝集法鑒定血清型，使用臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會推薦的瓊脂稀釋法測定沙門氏菌的藥敏性，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）方法確定沙門氏菌中與（氟）喹諾酮類抗生素耐藥相關(guān)基因。結(jié)果：432 株沙門氏菌中除36 株血清型未定外，其余396 株沙門氏菌共涵蓋37 個血清型，其中鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium，檢出率17.93%）、湯普森沙門氏菌（Salmonella thompsons，檢出率12.88%）、埃森沙門氏菌（Salmonella essen，檢出率8.84%）和嬰兒沙門氏菌（Salmonella

infants，檢出率6.57%）等血清型比較常見。沙門氏菌對磺胺異噁唑（耐藥率89.81%）耐藥最為普遍，對磺胺甲噁唑、萘啶酮酸、四環(huán)素、氨芐西林、氯霉素和阿莫西林-克拉維酸等抗生素的耐藥率均在50%以上。aac(6’)-Ib-cr基因檢出率（16.67%）最高，qnrB、qnrS和qnrA的檢出率分別為10.19%、6.71%和1.62%，且該4 種基因在不同血清型菌株中分布不同。菌株攜帶qnr和aac(6’)-Ib-cr基因越多，對（氟）喹諾酮類和氨基糖苷類協(xié)同耐藥性越強(qiáng)。結(jié)論：陜西省楊凌及周邊城市零售雞肉源沙門氏菌的血清型種類繁多，耐藥比較普遍。

沙門氏菌；血清型；（氟）喹諾酮類抗生素；耐藥基因

沙門氏菌（Salmonella）在自然界分布極為廣泛，對人和動物健康造成嚴(yán)重危害，是世界上常見的食源性致病菌之一。早在20世紀(jì)80年代，沙門氏菌引發(fā)的食品污染及對人們身體健康帶來的危害已在國內(nèi)外受到廣泛關(guān)注[1]。據(jù)報道，我國每年約3億人因感染沙門氏菌而患病，達(dá)病原菌食源性疾病總數(shù)的70%～80%[2]。

沙門氏菌血清型種類繁多、菌株復(fù)雜，自1885年被發(fā)現(xiàn)以來，迄今已有2 610 種沙門氏菌血清型被確認(rèn)。食源性致病菌監(jiān)測結(jié)果顯示，在我國主要流行的沙門氏菌與相鄰的東南亞國家和歐美國家有所不同，具有很強(qiáng)的地域性[1-3]。

目前，抗生素被廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)生產(chǎn)，在預(yù)防和控制畜禽沙門氏菌病方面發(fā)揮了巨大作用[3]。但由于抗生素的廣泛使用及濫用，沙門氏菌對抗菌藥物的耐藥性趨勢逐年上升，耐藥性問題已引起國內(nèi)外廣泛重視，在全球得到高度關(guān)注[4-6]。相對而言，食源性沙門氏菌耐藥性在國外研究較為深入，對其耐藥的分子機(jī)理及耐藥基因研究較多[7-8]。在陜西省，除張芳等[9]研究了該省食源性沙門氏菌的流行狀況，郝宏珊[10]、楊保偉[11]等研究了該省雞肉源沙門氏菌對（氟）喹諾酮類抗生素的耐藥狀況及相關(guān)基因外，鮮見其他報道。由于（氟）喹諾酮類抗生素是沙門氏菌預(yù)防和臨床治療的最主要藥物之一，而qnrA、qnrB、qnrS和aac(6’)-Ib-cr等基因的編碼產(chǎn)物導(dǎo)致沙門氏菌對喹諾酮和氟喹諾酮類抗生素產(chǎn)生抗性[10-13]。本實(shí)驗(yàn)旨在獲得陜西省楊凌及周邊地區(qū)零售雞肉源沙門氏菌的血清型分布、耐藥性狀況及部分與喹諾酮和（氟）喹諾酮類抗生素耐藥相關(guān)基因，為保障食品安全提供部分參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株

432 株沙門氏菌分離于2011—2012年間采集于陜西省楊凌及周邊城市農(nóng)貿(mào)市場和超市的零售雞肉樣品。菌株的分離和鑒定按照Cui Shenghui等[14]所述方法進(jìn)行。用400 mL無菌的蛋白胨緩沖液充分洗滌雞肉樣品后，將淋洗液置于37 ℃搖床中100 r/min條件下培養(yǎng)6～8 h后，分別取10 mL和1 mL增菌液加入到100 mL四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基（tetrathionate broth base，TTB）和Rappaport-Vassiliadis（RV）增菌液中，于42 ℃搖床中100 r/min條件下培養(yǎng)18～20 h。用無菌接種環(huán)取適量TTB增菌液劃線到XLT4培養(yǎng)基表面，取RV增菌液劃線到木糖賴氨酸脫氧膽酸鈉培養(yǎng)基（xylose lysine desoxycholate medium，XLD）培養(yǎng)基表面后，于37 ℃條件下培養(yǎng)18～24 h，挑取沙門氏菌疑似菌落，再XLT4平板上純化后，使用invA引物（invA-F：5’-TATCGCCACGTTCGGGCAATCTT-3’；invA-R：5’-TCGCACCGTCAAAGGAACCACT-3’）和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）方法鑒定沙門氏菌后，再使用沙門氏菌診斷血清確認(rèn)。藥敏性測定用標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株Esherichia coli ATCC 25922和ATCC 35218，Enterococcus faecalis ATCC 29212均為中國藥品生物制品檢定研究院崔生輝博士惠贈。

1.1.2 培養(yǎng)基

蛋白胨緩沖水、四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基及相應(yīng)的添加劑、Luria-Bertani（LB）營養(yǎng)瓊脂、Rappaport-Vassiliadis培養(yǎng)基 北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司；Mueller Hinton（MH）瓊脂 北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；XLD培養(yǎng)基、XLT4培養(yǎng)基及其補(bǔ)充液美國BD公司。

1.1.3 抗生素

磺胺異噁唑（sulfisoxazole，SUL）、磺胺甲噁唑/甲氧芐啶（sulfamethoxazole/trimethoprim，SXT）、萘啶酮酸（nalidixic acid，NAL）、環(huán)丙沙星（ciprofloxacin，CIP）、氨芐西林（ampicillin，AMP）、阿莫西林/克拉維酸（amoxicillin/clavulanate potassium，AMC）、頭孢噻呋（ceftiofur，CTX）、頭孢曲松（ceftriaxone，CRO）、頭孢西丁（cefoxitin，F(xiàn)OX）、卡那霉素（kanamycin，KAN）、鏈霉素（streptomycin，STR）、慶大霉素（gentamycin，GEN）、阿米卡星（amikacin，AMK）、氯霉素（chloramphenicol，CHL）、四環(huán)素（tetracycline，TCY）（均為分析純） 美國Sigma公司。

1.1.4 引物

qnrA、qnrB、qnrS和aac(6’)-Ib-cr擴(kuò)增用引物使用Premier5軟件設(shè)計(jì)，均由上海捷銳生物工程有限公司合成（表1）。aac(6’)-Ib-cr基因擴(kuò)增后將其DNA序列在低溫條件下送至上海桑尼生物科技有限公司測序。

表1 PCR擴(kuò)增用引物Table 1 Primers used for PCR amplif i cation

1.2 試劑與儀器

Taq DNA聚合酶、ExTaq DNA聚合酶、dNTPmix、10×PCR Buffer、DL2000DNA Ladder 寶生物工程（大連）有限公司。

超凈工作臺 蘇州蘇潔凈化設(shè)備有限公司；高壓滅菌鍋 日本Tomy公司；超純水處理器 美國Millipore公司；-40 ℃低溫冰箱、-80 ℃低溫冰箱 日本Sanyo公司；恒溫?fù)u床 上海智成分析儀器制造有限公司；Mycycler PCR儀、DNA電泳、凝膠成像系統(tǒng) 美國Bio-Rad公司；移液器、高速離心機(jī) 德國Eppendorf公司；恒溫水浴 寧波賽福實(shí)驗(yàn)儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 沙門氏菌血清型鑒定

沙門氏菌血清分型研究在河南省疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行。使用泰國S&A公司生產(chǎn)的沙門氏菌診斷血清，采用玻片凝集法按照操作說明書分別確定供試菌的O抗原和H抗原類型，得到抗原式后查閱White-Kauffmann抗原表，確定沙門氏菌的血清型。

1.3.2 藥物敏感性測定

采用美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）[15]推薦的瓊脂稀釋法測定供試抗生素對沙門氏菌的最小抑制濃度（minimum inhibitory concentrations，MICs），按照CLSI標(biāo)準(zhǔn)判讀藥敏結(jié)果并確定耐藥表型。供試抗生素的使用濃度范圍及相應(yīng)的耐藥折點(diǎn)檢表2。藥敏測定中使用Escherichia coli ATCC 25922和ATCC 35218，Enterococcus faecalis ATCC 29212作為標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株。

表2 抗生素種類、使用范圍和耐藥折點(diǎn)Table 2 Concentration ranges of various antibiotics where they are used and resistance breakpoints

1.3.3 PCR擴(kuò)增

使用煮沸法制備PCR用DNA模板[16]。PCR反應(yīng)條件為94 ℃、10 min；94 ℃、1 min、相應(yīng)引物退火溫度條件下1 min、72 ℃、1 min，35 個循環(huán)；72 ℃、10 min。電泳結(jié)束后，用5 μL PCR產(chǎn)物與5 μL Loading buffer均勻混合，在0.5×TBE緩沖液中于100 V電泳30 min，使用凝膠成像系統(tǒng)照相。

2 結(jié)果與分析

2.1 沙門氏菌的血清型分析

432 株沙門氏菌中有36 株血清型未定，其余396 株菌中共鑒定出37 種血清型。以鼠傷寒沙門氏菌（S. typhimurium，檢出率（下同）17.93%）、湯普森沙門氏菌（S. thompsons，12.88%）、埃森沙門氏菌（S. essen，8.84%）、嬰兒沙門氏菌（S. infants，6.57%）、腸炎沙門氏菌（S. entertidis，5.30%）和里森沙門氏菌（S. rissen，5.05%）等比較常見。阿富拉沙門氏菌（S. afula，4.55%）和阿貢納沙門氏菌（S. agona，4.29%）等13 種血清型的沙門氏菌檢出率在1%～5%之間。契斯特沙門氏菌（S. chester，0.76%）和德爾卑沙門氏菌（S. derby，0.76%）等11 種血清型的沙門氏菌檢出率在0.5%～1.0%之間。不常見血清型有阿爾伯特沙門氏菌（S. albert，0.25%）和巴西沙門氏菌（S. brazil，0.25%）等7 種（表3）。

表3 沙門氏菌血清型分析（n=396）Table 3 Distribution of Salmonella serovars (n= 396)

2.2 雞肉源沙門氏菌的耐藥分析

沙門氏菌對磺胺異噁唑耐藥最為普遍，耐藥率達(dá)89.81%，對磺胺甲噁唑/甲氧芐啶和萘啶酮酸等6 種抗生素的耐藥率均在50%以上。相對而言，對頭孢噻呋、卡那霉素、鏈霉素、慶大霉素和環(huán)丙沙星等耐藥率較低，對阿米卡星、頭孢曲松和頭孢西丁比較敏感（表4）。

432 株沙門氏菌中，耐萘啶酮酸但環(huán)丙沙星敏感（NAL+CIP-）型菌株檢出率最高（48.84%），其次分別為對萘啶酮酸和環(huán)丙沙星同時敏感（NAL-CIP-）型菌株（27.78%）以及對萘啶酮酸和環(huán)丙沙星同時耐藥（NAL+CIP+）的菌株（23.38%）（圖1）。

在NAL+CIP-型菌株（n=211）中共檢出21 種血清型，結(jié)合圖1和表3可計(jì)算得到：鼠傷寒沙門氏菌（21.80%）、埃森沙門氏菌（14.22%）和嬰兒沙門氏菌（12.80%）比較常見。在NAL-CIP-型菌株（n=120）中共檢出18 種血清型，結(jié)合圖1、表3計(jì)算得到：阿富拉沙門氏菌（13.33%）、阿貢納沙門氏菌（11.82%）、恩吉利沙門氏菌（11.82%）、湯普森沙門氏菌（11.82%）和布拉登盧普沙門氏菌（10.00%）比較常見。在NAL+CIP+型菌株（n=101）中共檢出19 種血清型，結(jié)合圖1、表3計(jì)算得到：鼠傷寒沙門氏菌（23.76%）、湯普森沙門氏菌（18.81%）和印第安納沙門氏菌（9.90%）比較常見。

表4 沙門氏菌對15 種抗生素的耐藥率（n=432）Table 4 Resistance rates of Salmonella to 15 kinds of antibiotics (n= 432)

圖1 雞源性耐（氟）喹諾酮類抗生素沙門氏菌檢出率（n=432）Fig. 1 Detection rates of fl uoroquinolones resistant Salmonella in retail chicken (n = 432)

2.3 沙門氏菌中與（氟）喹諾酮類抗生素耐藥相關(guān)質(zhì)粒攜帶的基因

432 株沙門氏菌中，aac(6’)-Ib-cr檢出率（16.67%）最高，其次分別為qnrB（10.19%）、qnrS（6.71%）和qnrA（1.62%）。101 株NAL+CIP+沙門氏菌中，aac(6’)-Ib-cr、qnrB、qnrS和qnrA的檢出率分別為34.65%、13.86%、2.97%和0.00%。211 株NAL+CIP－沙門氏菌中，qnrS、aac(6′)-Ib-cr、qnrB和qnrA的檢出率分別為11.85%、9.95%、7.58%和1.42%。120 株NAL－CIP－沙門氏菌中，aac(6’)-Ib-cr、qnrB、qnrA和qnrS的檢出率分別為13.33%、11.67%、3.33%和0.83%（圖2）。

432 株沙門氏菌中，88 株菌種（20.37%）攜帶1 種基因，32 株菌（7.41%）同時攜帶2 種基因，未檢測到同時攜帶3 種或4 種基因的菌株。

圖2 零售雞肉源沙門氏菌中相關(guān)耐藥基因的檢出率（n=432）Fig. 2 Detection rates of antibiotic resistance-related genes in chickenborne Salmonella (n = 432)

表 5qnr和aac(6’)-Ib-cr 基因檢出與菌株耐藥狀況間的關(guān)系（n=432）Table 5 Relationship between qnrandaac(6’)-Ib-cr genes and antibiotic resistance phenotype (n= 432)

由表5可知，未檢出耐藥基因的菌株（n=312）總體上對抗生素比較敏感，約51%的菌株可耐供試抗生素的數(shù)量不超過4 種，約75%的菌株可耐受供試氨基糖胺類和（氟）喹諾酮類抗生素的數(shù)量不超過3 種。檢測出1 種基因的菌株（n=88）中，可耐5～10 種供試抗生素的菌株比例為51.14%，28.41%的菌株可耐11～15 種抗生素，78.41%的菌株至少可耐受1 種供試氨基糖胺類和（氟）喹諾酮類抗生素。檢測出2 種基因的菌株（n=32）中，耐11～15 種藥物的菌株比例為56.25%，46.88%的菌株可耐4～6 種供試氨基糖胺類和（氟）喹諾酮類抗生素。隨著qnr和aac(6’)-Ib-cr基因檢出數(shù)的增加，菌株對（氟）喹諾酮和氨基糖苷類抗生素的耐藥數(shù)也隨之增加。

2.4 耐藥基因在不同血清型沙門氏菌中的分布

120 株攜帶qnrA、qnrB、qnrS和aac(6’)-Ib-cr基因的沙門氏菌共涵蓋28 種血清型。4 種基因在湯普森沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌中均有檢出，其他血清型沙門氏菌攜帶該4 種基因的情況不同。除湯普森沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌外，只在阿貢納沙門氏菌中檢出qnrA，分別在安尼達(dá)爾沙門氏菌、布拉登魯普沙門氏菌和巴西沙門氏菌等共14 個血清型的菌株中檢出qnrB，分別在阿貢納沙門氏菌、病牛沙門氏菌和腸炎沙門氏菌等共9 個血清型的菌株中檢出qnrS，分別在埃森沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌和印第安納沙門氏菌等共25 個血清型的菌株中檢出aac(6’)-Ib-cr（表6）。

表7 耐藥基因在不同血清型沙門氏菌中的分布Table 6 Distribution of antibiotic resistance genes in different Salmonella serovars

3 討 論

沙門氏菌是一種寄生于人和動物腸道，能引起沙門氏菌病，對人畜健康產(chǎn)生威脅的主要食源性和人畜共患病致病菌之一[17]。在各類食源性病原菌污染事件中，30%食源性細(xì)菌污染由沙門氏菌引起[18]。沙門氏菌能在人與動物間交叉?zhèn)鞑?，?dǎo)致食物中毒，對公共衛(wèi)生安全造成威脅[19]。

沙門氏菌血清型種類繁多、菌株復(fù)雜，且其菌型分布具有很強(qiáng)的區(qū)域特點(diǎn)。世界各國流行的沙門氏菌雖有所差異，但大多以腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、印第安納沙門氏菌和德爾卑沙門氏菌等為主[20-21]。

本研究從陜西省楊凌及周邊城市農(nóng)貿(mào)市場和超市零售雞肉中分離出的沙門氏菌的主要為鼠傷寒沙門氏菌（共71 株，檢出率17.93%），與施開創(chuàng)[3]、張茂棠[22]、張秀麗[23]等分別對廣西、深圳市和河南省雞源、生雞肉源和生肉中沙門氏菌血清分型研究結(jié)果一致，也與趙玉林等[24]對陜西省西安、寶雞和楊凌3 個地區(qū)雞肉、豬肉、牛肉和羊肉中沙門氏菌的血清型分布狀況相似。表明鼠傷寒沙門氏菌作為引起食物中毒的主要血清型在我國肉類食品中流行相當(dāng)廣泛，要嚴(yán)格預(yù)防控制[25]。除鼠傷寒沙門氏菌外，本研究中湯普森沙門氏菌的檢出率（12.88%）也較高，與現(xiàn)有報道有所不同[26]。此外，雖然本研究調(diào)查的范圍不是很大，但可以定型的396 株沙門氏菌卻涵蓋了37 個血清型，有2 種血清型，即Salmonella koessen和Salmonella every Ⅲb目前尚未查到中文名稱的報道，表明楊凌及周邊地區(qū)零售雞肉源沙門氏菌的血清型具有非常高的多樣性。

世界衛(wèi)生組織2001年統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，每年約有12 000 t和900 t抗生素分別作為飼料添加劑和食品性動物治療，僅有1 300 t抗生素用于人類治療[27]。隨著抗生素在人和動物上的廣泛使用、甚至濫用，沙門氏菌耐藥性正在逐年增強(qiáng)，尤其是多重耐藥現(xiàn)象的出現(xiàn)，給食品安全及公共衛(wèi)生問題帶來了極大的威脅[28]。劉渠等[29]對69 株分離于720 份生肉類樣品沙門氏菌耐藥性測定發(fā)現(xiàn)，88.6%、34.77%和5.80%的分離株分別對1、5 種和11 種以上抗生素產(chǎn)生抗性。吳云鳳等[30]對分離于204 份肉雞胴體的71 株沙門氏菌的藥敏性檢測結(jié)果表明沙門氏菌至少對3 種以上抗生素耐藥，耐3～7 種藥物的菌株達(dá)33.8%，耐8～12 種藥物的達(dá)26.8%，耐13～16 種藥物的達(dá)36.6%。本研究結(jié)果與上述結(jié)果以及與潘志明[31]、代娟娟[32]、謝一俊[33]等的研究比較相似，表明食源性特別是雞肉源沙門氏菌耐藥譜不斷增寬、多重耐藥現(xiàn)象已經(jīng)比較普遍，已成為當(dāng)前食品安全和公共安全衛(wèi)生領(lǐng)域的核心問題之一。

郝宏姍等[10]研究表明，63.59%和21.28%的雞肉源沙門氏菌分別對萘啶酮酸和環(huán)丙沙星產(chǎn)生抗性。戴建華等[34]研究表明72.73%的禽源沙門氏菌對萘啶酮酸產(chǎn)生抗性，9.09%對環(huán)丙沙星產(chǎn)生抗性。本研究分離到的432 株沙門氏菌中，70.37%的菌株對萘啶酮酸產(chǎn)生抗性，耐環(huán)丙沙星的菌株占22.69%，與上述報道結(jié)果基本一致。由于（氟）喹諾酮類抗生素是人畜沙門氏菌病預(yù)防和治療的主要藥物之一，本研究中沙門氏菌對（氟）喹諾酮類抗生素產(chǎn)生抗性使食品安全形勢處于比較嚴(yán)峻的局面。

質(zhì)粒介導(dǎo)的（氟）喹諾酮耐藥是沙門氏菌耐藥性產(chǎn)生的一個重要機(jī)制[35]。質(zhì)粒攜帶的與（氟）喹諾酮類藥物耐藥相關(guān)的基因既可縱向傳播，也可橫向傳播（主要通過接合轉(zhuǎn)移方式傳給其他細(xì)菌）。除攜帶（氟）喹諾酮類抗生素耐藥基因外，這些質(zhì)粒通常還攜帶可引起其他類抗生素耐藥的附加基因[36]。國內(nèi)外對沙門氏菌質(zhì)粒介導(dǎo)（氟）喹諾酮類耐藥相關(guān)基因檢測結(jié)果顯示，aac(6’)-Ib-cr檢出率為0.05‰～37.1%[12,37]、qnrA檢出率為0.05‰～2.77%[12,38-39]、qnrB檢出率為0.026‰～11.34%[12-13,38-39]、qnrS檢出率為0.57‰～10.29%[12-13,38-39]。本研究中，aac(6’)-Ib-cr的檢出率（16.67%）明顯高于其他3 種qnr（qnrA、qnrB和qnrS的檢出率分別為1.62%、10.19%和6.71%）基因，與現(xiàn)有研究結(jié)果比較一致。

本研究在涵蓋29 種血清型的沙門氏菌中檢出qnrA、qnrB、qnrS和aac(6’)-Ib-cr基因，這4 種基因在湯普森和鼠傷寒沙門氏菌中均有檢出，在嬰兒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌和埃森沙門氏菌中均未檢出qnrA。鄒明等[40]研究發(fā)現(xiàn)沙門氏菌血清型、耐藥表型和耐藥基因攜帶率之間有著復(fù)雜關(guān)系，表明沙門氏菌耐藥性的產(chǎn)生是一個復(fù)雜過程，可能是多種途徑共同作用的結(jié)果。

綜上，楊凌及周邊地區(qū)雞肉源沙門氏菌血清型種類豐富，多數(shù)菌株對常用于沙門氏菌病預(yù)防和治療的（氟）喹諾酮類藥物產(chǎn)生抗性，多重耐藥現(xiàn)象比較普遍。檢測出qnrA、qnrB、qnrS和aac(6’)-Ib-cr等與（氟）喹諾酮類抗生素耐藥相關(guān)基因，可能為沙門氏菌對（氟）喹諾酮類抗生素產(chǎn)生耐藥性的原因之一。

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Serotyping, Antibiotic Susceptibility and Some Genes Associated with Quinolones and Fluoroquinolines Resistance of Chicken-Borne Salmonella

WANG Jiawei1, XIAO Yingping2,3, YANG Hua2,3, CAO Chenyang1, YANG Baowei1,*
(1. College of Food Science and Engineering, Northwest A & F University, Yangling 712100, China;
2. Institute of Quality and Standard for Agro-Products, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310021, China; 3. State Key Laboratory Breeding Base for Zhejiang Sustainable Pest and Disease Control, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310021, China)

Objective: In this study, the serotyping, antibiotic susceptibility and some genes associated with quinolone and fluoroquinolones resistance of 432 chicken-borne Salmonella isolates in and around Yangling, Shaanxi province were studied for better understanding the epidemiological characteristics of Salmonella serovars. Methods: Salmonella serovars were determined using slide agglutination method. Antibiotic susceptibility was tested by the agar dilution method recommended by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). The resistant genes of qnrA, qnrB, qnrS and aac(6’) -Ib-cr, commonly carried by plasmid and associated with resistance to quinolone and fl uoroquinolones, were identif i ed using PCR and DNA sequencing. Results: Totally 37 serotypes were identif i ed among 396 Salmonella isolates, and the other 36 isolates were unidentif i ed. The most prevalent serotype was Salmonella typhimurium (17.93%), followed by S. thompson (12.88%), S. essen (8.84%) and S. infantis (6.57%). Among 432 Salmonellae isolates, antibiotic resistance was commonly found to sulfafurazole (89.81%), and approximately 50% of the isolates were resistant to sulfamethoxazole, naladixic acid, tetracycline, ampicillin, chloramphenicol, and amoxicillin/clavulanate potassium. aac(6’)-Ib-cr (16.67%) was most frequently detected, and the detection rates of qnrB, qnrS and qnrA were 10.19%, 6.71% and 1.62%, respectively. The distribution of these four genes differed in different serotypes of isolates. More qnr and aac(6’)-Ib-cr genes were detectedin the isolates found to be more resistant to both fluoroquinolones and aminoglycosides. Conclusion: The serotype of Salmonella isolates from retail chicken in Yangling and its surrounding areas was diverse, and qnr and aac(6’)-Ib-cr genes were commonly found in these isolates that were resistant to many antibiotics.

Salmonella; serotype; fl uoroquinolones; antibiotic resistant genes

2016-07-08

浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院“農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全”中美國際合作項(xiàng)目；國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（31171682）

王嘉煒（1995—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭吃葱灾虏【鷻z測。E-mail：1271208221@qq.com

*通信作者：楊保偉（1974—），男，教授，博士，研究方向?yàn)槭吃葱灾虏【焖贆z測和多重耐藥機(jī)理。E-mail：ybw090925@163.com

10.7506/spkx1002-6630-201715023

TS201.3

A

1002-6630（2017）15-0140-07

王嘉煒, 肖英平, 楊華, 等. 雞肉源沙門氏菌血清型、藥敏性及部分耐藥基因研究[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(15): 140-146. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201715023. http://www.spkx.net.cn

WANG Jiawei, XIAO Yingping, YANG Hua, et al. Serotyping, antibiotic susceptibility and some genes associated with quinolones and fluoroquinolines resistance of chicken-borne Salmonella[J]. Food Science, 2017, 38(15): 140-146. (in Chinese with English abstract)

10.7506/spkx1002-6630-201715023. http://www.spkx.net.cn