黃艷楊雪峰陳雪云符乃光鐘霞*

（1．海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南 海口 571199；2．?？谀详戓t(yī)藥科技股份有限公司，海南 ?？?570311）

鹽酸文拉法辛膠囊的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法的建立

黃艷1楊雪峰2陳雪云2符乃光1鐘霞1*

（1．海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南 ?？?571199；2．?？谀详戓t(yī)藥科技股份有限公司，海南 ?？?570311）

目的建立高效液相色譜法測(cè)定鹽酸文拉法辛膠囊的有關(guān)物質(zhì)。方法采用symmetry C8（250 mm×4.6 mm,5 μm），乙腈-0.1mol?L-1磷酸二氫銨溶液（30∶70）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm；流速0.8 mL·min-1。結(jié)果文拉法辛與相鄰雜質(zhì)峰以及各雜質(zhì)峰之間的分離度均大于1.5，檢測(cè)限為0.4～1.6ng，定量限為1.6～6.5ng，供試品溶液8h內(nèi)有一定的降解，溶液應(yīng)臨用新制。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、靈敏和準(zhǔn)確，適用于文拉法辛膠囊有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。

高效液相色譜法；文拉法辛；有關(guān)物質(zhì)

文拉法辛為苯乙胺衍生物，是一種全新的抗重性抑郁癥藥，主要藥理機(jī)制為抑制突觸前膜對(duì)5-羥色胺(5-HT)及去甲腎上腺素(NE)的再攝取，增強(qiáng)中樞5-HT及NE神經(jīng)遞質(zhì)的功能，發(fā)揮抗抑郁作用，對(duì)于抑郁病人，可用于治療抑郁癥和廣泛性焦慮癥,具有起效快,療效可靠,不良反應(yīng)輕微,可用于長(zhǎng)期治療的特點(diǎn)[1]。一般用藥1～2周后即可出現(xiàn)明顯抗抑郁作用，比某些三環(huán)類(lèi)抗抑郁藥(TCA)起效快，且不良反應(yīng)輕微，適宜長(zhǎng)期服用[2-3]，應(yīng)用前景良好。本文建立了高效液相色譜法，對(duì)自制的文拉法辛膠囊的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢查。該法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

Agilent1220液相色譜儀，Ezchrom Elite色譜工作站，乙腈為色譜純，水為雙蒸水，磷酸二氫銨為分析純，鹽酸文拉法辛膠囊（自制，批號(hào)為140301、140302、140303）；鹽酸文拉法辛對(duì)照品（中檢院，批號(hào)為100543-200401）；雜質(zhì)a對(duì)照品（USP，批號(hào)為F01357）、雜質(zhì)b對(duì)照品（TRC，批號(hào)為3-VCP-179-1）、雜質(zhì)c對(duì)照品（TRC，批號(hào)為8-GJF-54-4）、雜質(zhì)d對(duì)照品（molcan corporation，批號(hào)為130312）、雜質(zhì)e對(duì)照品（TLC，批號(hào)為1530-034A5），雜質(zhì)f對(duì)照品（TRC，批號(hào)為4-VCP-13-3）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的配制

取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量，加流動(dòng)相制成每1ml中含鹽酸文拉法辛0.4mg的溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；精密量取適量，加流動(dòng)相制成每1ml中含4μg的溶液，作為對(duì)照溶液。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)[4-5]

色譜柱為symmetry C8（250 mm×4.6 mm,5 μm）；以乙腈-0.1mol/L磷酸二氫銨溶液（30:70）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm；流速0.8 mL·min-1。

分別精密稱取鹽酸文拉法辛及雜質(zhì)a、b、c、d、e、f對(duì)照品適量，分別加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1mL中約含各對(duì)照品10μ g的溶液，搖勻，作為對(duì)照品溶液；分別精密量上述各種對(duì)照品溶液1mL混合均勻，作為混合溶液；精密量取上述溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，混合溶液結(jié)果見(jiàn)圖1。理論塔板數(shù)按鹽酸文拉法辛主峰計(jì)算為12593，鹽酸文拉法辛與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于1.5，各雜質(zhì)峰之間的分離度均大于1.5。

圖1 混合溶液色譜圖

2.3 1%對(duì)照溶液進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

取2.1項(xiàng)下的對(duì)照溶液20μL注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次測(cè)定，結(jié)果主峰峰面積的RSD為0.26%。表明方法的進(jìn)樣精密度良好。

2.4 專屬性試驗(yàn)

2.4.1 破壞性實(shí)驗(yàn)精密稱取140301批樣品（約含鹽酸文拉法辛20mg），共6份，分別置50 mL量瓶中，按以下條件試驗(yàn)：一份加流動(dòng)相使溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液；一份加10ml流動(dòng)相使溶解，再加1%的過(guò)氧化氫溶液5ml，搖勻，室溫放置2小時(shí)，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液；一份于4500±500lx照射10天，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液；一份加10ml流動(dòng)相使溶解，加0.1mol/L鹽酸溶液5ml，搖勻，室溫放置4小時(shí)，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml中和，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液；一份加10ml流動(dòng)相使溶解，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml，搖勻，室溫放置4小時(shí)，用0.1mol/L鹽酸溶液5ml中和，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液；一份加10ml流動(dòng)相使溶解，置沸水浴中加熱1小時(shí)，取出，放冷至室溫，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液。分別精密量取上述6種溶液各20 μL注入液相色譜儀分析，結(jié)果見(jiàn)圖2（a～f）。

2.4.2 溶劑與輔料干擾實(shí)驗(yàn)按處方比例取本品的混合輔料適量，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，分別精密量取20 μL溶劑及續(xù)濾液注入液相色譜儀分析，結(jié)果見(jiàn)圖2（g～h）。結(jié)果表明：本品溶劑及空白輔料對(duì)供試品的測(cè)定不造成干擾作用。

圖2 專屬性試驗(yàn)色譜圖a.未經(jīng)破壞樣品 b.氧化破壞 c.光照破壞 d.酸破壞e.堿破壞 f.高溫破壞 g.溶劑 h.空白輔料

2.5 檢測(cè)限和定量限

分別精密稱取鹽酸文拉法辛及雜質(zhì)a、b、c、d、e、f對(duì)照品適量，分別加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1mL中約含各對(duì)照品10μ g的溶液，再分別逐級(jí)稀釋，取20 μL注入液相色譜儀，經(jīng)分析，文拉法辛的檢測(cè)限為0.4ng（S/N≈3），定量限為1.6ng（S/N≈10）；雜質(zhì)a的檢測(cè)限為1.6ng（S/N≈3），定量限6.5ng（S/N≈10）；雜質(zhì)b的檢測(cè)限為0.9ng（S/N≈3），定量限1.7ng（S/N≈10）；雜質(zhì)c的檢測(cè)限為0.4ng（S/N≈3），定量限1.6ng（S/N≈10）；雜質(zhì)d的檢測(cè)限為1.3ng（S/N≈3），定量限2.5ng（S/N≈10）；雜質(zhì)e的檢測(cè)限為0.4ng（S/N≈3），定量限1.6ng（S/N≈10）；雜質(zhì)f的檢測(cè)限為0.4ng（S/N≈3），定量限1.6ng（S/N≈10）。

2.6 重復(fù)性和溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取140301批樣品6份，精密稱定，照2.1項(xiàng)下的方法制備溶液，分別取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按面積歸一化法計(jì)算雜質(zhì)量，結(jié)果單個(gè)最大雜質(zhì)量的RSD為1.89%，總雜質(zhì)量RSD為1.76%，表明方法重復(fù)性良好。取其中一份溶液，分別放置0h、2h、4h、6h、8h后測(cè)定，結(jié)果單個(gè)最大雜質(zhì)峰面積的RSD為3.43%，總雜質(zhì)峰面積的RSD為3.55%，總雜質(zhì)有增加的趨勢(shì)，表明供試品溶液8h內(nèi)有一定的降解，溶液應(yīng)臨用新制。

2.7 耐用性試驗(yàn)

本品柱溫在25℃～35℃；流速0.6ml/min～1.0ml/min；流動(dòng)相組成比例（28:72）～（32：68）之間變動(dòng)時(shí)，未影響到本品有關(guān)物質(zhì)的檢查，表明方法的耐用性良好。

2.8 供試品有關(guān)物質(zhì)檢查

取3批供試品，照2.1項(xiàng)下的方法制備溶液，照2.2項(xiàng)下的色譜條件檢查有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果單個(gè)最大雜質(zhì)分別為0.0103%、0.0105%、0.0108%，總雜質(zhì)分別為0.0204%、0.0213%、0.0219%。

3 討論

3.1 專屬性試驗(yàn)表明，鹽酸文拉法辛在酸、堿、高溫破壞條件下均有一定的降解，采用DAD檢測(cè)器對(duì)主峰以及降解峰進(jìn)行峰純度檢測(cè)并記錄3D圖，提取230nm波長(zhǎng)處的色譜圖

通過(guò)色譜工作站提供的“全波長(zhǎng)法”分析以上色譜圖中，鹽酸文拉法辛在強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、氧化、強(qiáng)光和高溫破壞條件下，鹽酸文拉法辛主峰的純度指數(shù)值均大于990.000，表明各降解雜質(zhì)峰均與主峰的分離度良好。

3.2 有關(guān)物質(zhì)限度的確定：

通過(guò)對(duì)3批供試品有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定，并結(jié)合本品穩(wěn)定性考察結(jié)果，將本品的有關(guān)物質(zhì)限度確定為：供試品溶液的色譜圖中如顯雜質(zhì)峰，單個(gè)雜質(zhì)不得過(guò)0.2%；各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液的主峰面積（1.0%）。

[1]李煥德,李革暉.一種雜環(huán)類(lèi)抗抑郁新藥VENLAFAXINE [J].國(guó)外醫(yī)學(xué)藥學(xué)分冊(cè),1996,23(2):70.

[2]劉海濤,周立春,余立.HPLC法測(cè)定鹽酸文拉法辛膠囊有關(guān)物質(zhì)[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn),2012,13(3):178-181.

[3]鄒萬(wàn)芹.新型抗抑郁藥的臨床應(yīng)用及研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房,2008,19(14):1105-1107.

[4]中華人民共和國(guó)國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].(四部).北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015.

[5]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.鹽酸文拉法辛膠囊藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-007)-2002Z[S].

第一作者：黃艷，女，碩士，副教授，研究方向：藥品質(zhì)量控制方法的研究。

＊通訊作者：鐘霞，女，博士，副教授，研究方向：藥物合成。