• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    二甲雙胍對糖尿病大鼠腎臟的保護作用及其機制研究

    2017-09-19 03:45:31梅艷歐三桃
    中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志 2017年20期
    關鍵詞:細胞因子腎臟腎病

    梅艷,歐三桃

    (西南醫(yī)科大學附屬醫(yī)院 腎內(nèi)科,四川 瀘州 646000)

    二甲雙胍對糖尿病大鼠腎臟的保護作用及其機制研究

    梅艷,歐三桃

    (西南醫(yī)科大學附屬醫(yī)院 腎內(nèi)科,四川 瀘州 646000)

    目的觀察二甲雙胍對鏈脲佐菌素(STZ)誘導糖尿病腎病大鼠腎臟的影響,分析二甲雙胍的防治功效及其機制。方法選取健康雄性14周齡Wistar大鼠36只,隨機分為3組:正常對照組、糖尿病模型組和二甲雙胍干預組。利用STZ誘導大鼠糖尿病,正常對照組給予生理鹽水,第8周時大鼠糖尿病腎病模型復制成功。采用Western blot檢測各組大鼠腎臟中炎癥細胞因子[腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)]和抗炎癥細胞因子[白介素10(IL-10)]的表達。結(jié)果糖尿病模型組TNF-α、IL-1β及IL-6的表達水平高于正常對照組(P<0.05),IL-10的表達水平低于正常對照組(P<0.05);給予二甲雙胍干預后,上述結(jié)果逆轉(zhuǎn)(P<0.05)。結(jié)論二甲雙胍可通過抑制腎臟炎癥細胞因子的表達,保護STZ誘導的糖尿病大鼠的腎臟。

    二甲雙胍;糖尿?。荒I?。谎装Y細胞因子

    糖尿病腎病是糖尿病患者死亡的主要病因之一,其發(fā)病機制十分復雜,可能與代謝紊亂、腎小球血流動力學異常及遺傳易感性有關。最新研究發(fā)現(xiàn),該病往往伴隨炎癥因子表達水平的增高[1-2],甚至有學者認為,糖尿病腎病本身就是一種炎癥反應的過程[3-4]。二甲雙胍是雙胍類口服降糖藥物,是目前2型糖尿病一線用藥。據(jù)報道,二甲雙胍可有效降低糖尿病腎病患者的尿白蛋白排泄率,降低血肌酐和尿素氮水平,表現(xiàn)出較為滿意的腎臟保護作用[5-7]。但該種保護作用的機制目前并不清楚。大量研究發(fā)現(xiàn),二甲雙胍可抑制多種代謝性疾病相關的炎癥因子[8-10]。因此,筆者提出假說,二甲雙胍通過抑制炎癥因子[腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)及白介素6(interleukin-6,IL-6)]的表達,而實現(xiàn)對糖尿病腎病的保護作用。為驗證該假說,設計本研究,現(xiàn)報道如下。

    1 材料與方法

    1.1 動物

    選取健康雄性Wistar大鼠36只,2月齡,體重220~260g[西南醫(yī)科大學動物中心提供,動物許可證號:SCXK(川)2013-17],動物飼養(yǎng)室溫23℃,濕度44%,自由攝食飲水,實驗開始前測鼠尾外周血糖均正常,將動物適應性喂養(yǎng)1周后開始實驗。

    1.1.1 藥品與試劑 二甲雙胍、鏈脲佐菌素(Streptozocin,STZ)購自美國Sigma公司,TNF-α、IL-1β、IL-6及 IL-10一抗和二抗購自美國 Abcam Biotechnology公司。

    1.1.2 實驗動物分組 實驗動物分為3組:正常對照組、糖尿病模型組及二甲雙胍干預組,每組12只。單次腹腔注射STZ 65 mg/kg誘導糖尿病模型,各組大鼠均在48 h后空腹采取外周血。血糖≥16.7 mmol的大鼠模型復制成功,被視為糖尿病大鼠模型[11]。

    1.2 方法

    1.2.1 模型的復制 模型復制成功1周后,二甲雙胍干預組大鼠灌胃二甲雙胍20 mg/(kg·d),上午10∶00給藥,1次/d,連續(xù)灌胃6周,糖尿病模型組和正常對照組給予等劑量的生理鹽水NaCl灌胃,直至取材。

    1.2.2 實驗動物組織標本的收集及檢測 在8周末時,使用代謝籠收集正常對照組、糖尿病模型組及二甲雙胍干預組大鼠12 h尿液,混勻后取6 ml,將其置于溫度<40℃的冰箱保存。然后,對糖化血紅蛋白(haemoglobin A1C,HbA1c)、尿白蛋白(Albumin,ALB)、細胞間黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、單核細胞趨化蛋白-1及視黃醇結(jié)合蛋白(retinol binding protein,RBP)進行檢測,并對各組實驗大鼠的排泄率予以合理計算;同時經(jīng)大鼠股動脈取血2ml,予以肝素抗凝血,對血紅蛋白(Haemoglobin,Hb)水平進行檢測。將實驗大鼠麻醉后,取出兩側(cè)腎臟,在4℃、NaCl中洗凈,剝?nèi)ツI包膜,4℃、NaCl溶液沖洗腎臟6次。稱其左腎重量,計算腎臟肥大指數(shù),腎臟肥大指數(shù)=左腎重/體重[12]。用德國羅氏血糖儀進行血糖檢測,Hb和尿ALB采用微柱層析法進行檢測。

    1.2.3 動物處理分析 將10%水合氯醛注射于腹腔內(nèi),麻醉完成后通過頸椎脫臼的方式使大鼠死亡,將其腎臟取出,于-80℃冷凍保存。制備蛋白樣品、RNA:①對60~100g大鼠腎臟組織予以冷凍處理,同時加入1 ml Trizol,根據(jù)說明書提取總RNA,將RNA的A260/A280控制在1.8~2.0;②取腎臟組織約200 mg,在2 ml含蛋白酶抑制劑磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffer saline,PBS)中勻漿組織,離心15 min左右;③取上清液作為總蛋白樣本。

    1.2.4 Western blot檢測 實驗通過Western blot檢測對腎臟中炎癥細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6及抗炎癥細胞因子IL-10表達量進行比較。①4℃裂解分離組織,勻漿液離心,提取蛋白,離心總蛋白,超聲波裂解,提取破解液中的生物化蛋白;②組織勻漿后,提取蛋白變性成分,用聚丙烯酰胺凝膠對蛋白樣品電泳2 h左右,將分離的蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯膜上;③將膜置于3%牛血清蛋白溶液中孵育;④加炎癥細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6及抗炎癥細胞因子IL-10一抗(1∶1 000),4℃孵育過夜,洗滌液洗一抗;⑤加二抗(1∶1 000),室溫孵40 min,洗滌液洗二抗,發(fā)光。選取NIH Image J和Imagine軟件分析圖像并統(tǒng)計數(shù)據(jù)。

    1.3 統(tǒng)計學方法

    數(shù)據(jù)分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件,計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示,多組間比較用方差分析,兩兩比較用SNK-q檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2.1 3組大鼠血糖、H bA1c比較

    3組大鼠血糖、HbA1c比較,經(jīng)方差分析,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。兩兩比較采用SNK-q檢驗,糖尿病模型組與正常對照組的血糖、HbA1c比較,差異有統(tǒng)計學意義(q=18.256和20.284,P=0.004和0.000),糖尿病模型組的血糖、HbA1c高于正常對照組;二甲雙胍干預組與糖尿病模型組的血糖、HbA1c比較,差異有統(tǒng)計學意義(q=11.933和30.203,P= 0.009和0.000),二甲雙胍干預組的血糖、HbA1c低于糖尿病模型組。見表1。

    表1 3組大鼠血糖、H bA1c水平比較 (±s)

    表1 3組大鼠血糖、H bA1c水平比較 (±s)

    組別HbA1c/%正常對照組(n=12) 5.86±0.55 5.34±0.20糖尿病模型組(n=10) 31.45±2.09 9.18±1.43二甲雙胍干預組(n=11) 18.70±2.40 8.57±1,34 F值 36.924 41.792 P值 0.000 0.000血糖/(mmol/L)

    2.2 尿生化、腎臟肥大指數(shù)比較

    3組大鼠的ALB、RBP及腎臟肥大指數(shù)比較,經(jīng)方差分析,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。兩兩比較采用SNK-q檢驗,糖尿病模型組與正常對照組的ALB、RBP及腎臟肥大指數(shù)比較,差異有統(tǒng)計學意義(q=23.940、20.810和49.117,均P=0.000),糖尿病模型組的ALB、RBP及腎臟肥大指數(shù)高于正常對照組;二甲雙胍干預組與糖尿病模型組的ALB、RBP及腎臟肥大指數(shù)比較,差異有統(tǒng)計學意義(q=19.051、23.305和36.721,均P=0.000),二甲雙胍干預組的ALB、RBP及腎臟肥大指數(shù)低于糖尿病模型組。見表2。

    2.3 腎臟病理學改變

    二甲雙胍干預治療6周時,正常對照組的基底膜處于同一狀態(tài),未出現(xiàn)顯著增厚,也未出現(xiàn)足突細胞融合;糖尿病模型組出現(xiàn)毛細血管基底膜增厚,結(jié)構(gòu)模糊不清,發(fā)生足突破壞、融合及消失,系膜基質(zhì)增多,且出現(xiàn)腫脹;二甲雙胍干預組出現(xiàn)少量足突融合,系膜區(qū)細胞出現(xiàn)輕度增生,胞漿腫脹變性。見圖1。

    表2 3組大鼠尿生化、腎臟肥大指數(shù)的比較 (±s)

    表2 3組大鼠尿生化、腎臟肥大指數(shù)的比較 (±s)

    組別腎臟肥大指數(shù)正常對照組(n=12) 2.45±0.39 0.043±0.004 3.43±0.67糖尿病模型組(n=10) 24.98±2.03 0.208±0.017 6.67±0.45二甲雙胍干預組(n=11) 9.87±0.45 0.089±0.02 5.67±0.65 F值 36.104 19.174 28.135 P值 0.000 0.000 0.000ALB/(μg/min)RBP/(μg/min)

    2.4 各組大鼠腎臟中TNF-α、IL-1β、I L-6及I L-10表達水平比較

    3組大鼠腎臟中TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-10表達水平比較,經(jīng)方差分析,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。兩兩比較采用SNK-q檢驗,糖尿病模型組與正常對照組TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-10表達水平比較,差異有統(tǒng)計學意義(q=15.194、28.382、19.100和9.287,P=0.002、0.000、0.000和0.007),糖尿病模型組的TNF-α、IL-1β、IL-6的表達水平高于正常對照組,而IL-10的表達水平低于正常對照組;二甲雙胍干預組與糖尿病模型組TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-10表達水平比較,差異有統(tǒng)計學意義(q= 17.828、23.092、28.124和 12.160,P=0.001、0.000、0.000和0.003),二甲雙胍干預組的TNF-α、IL-1β、IL-6的表達水平低于糖尿病模型組,而IL-10的表達水平較糖尿病模型組升高。見圖2、3。

    圖1 3組大鼠腎臟病理學改變 (電鏡×1 000)

    圖2 各組大鼠腎臟炎癥因子TNF-α、IL-1β及I L-6的表達 (±s)

    圖3 各組大鼠腎臟抗炎因子I L-10的表達 (±s)

    3 討論

    高血糖可引起蛋白質(zhì)、脂類發(fā)生生理和生化特性的改變,最終形成糖基化終末產(chǎn)物[13],其可誘導單核趨化蛋白轉(zhuǎn)化生長因子β1、結(jié)締組織生長因子及血管內(nèi)皮生長因子的產(chǎn)生,促使腎小球硬化[14-15];并且可促使血管ICAM-1與腎小管上皮細胞表達增多,導致白細胞從小管周圍毛細血管內(nèi)皮細胞遷移至腎臟間質(zhì),造成腎臟肥大,腎功能受損[16-17]。

    二甲雙胍作為一種經(jīng)典降糖藥,可有效改善糖尿病腎病患者的腎功能,這可能涉及多種機制。首先,該藥可通過多種機制降低血糖,減少糖基化終末產(chǎn)物的產(chǎn)生[18];二甲雙胍可減少谷胱甘肽過氧化物酶的表達,從而降低腎臟組織內(nèi)的氧化應激[19];另外該藥可降低血小板聚集和黏附,改善腎臟血管反應性及微循環(huán)[20]。但目前關于二甲雙胍是否通過抗炎作用來實現(xiàn)對腎臟的保護作用尚少見報道。TNF-α、IL-1β及IL-6是臨床上較為常用的炎癥因子指標,常用來反應機體炎癥反應的強弱;而IL-10為應用較為成熟的抗炎因子指標,用來反映機體的抗炎能力。因此本研究采用TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-10來反映大鼠腎臟的炎癥-抗炎反應狀態(tài)。

    本實驗模型復制成功,并且發(fā)現(xiàn)糖尿病大鼠腎臟組織炎癥細胞因子TNF-α、IL-1β及IL-6增加,抗炎癥細胞因子IL-10減少。給予二甲雙胍治療后,血糖下降,腎臟肥大改善,腎臟炎癥細胞因子與抗炎癥細胞因子失平衡也得到改善。因此,筆者推測二甲雙胍改善糖尿病腎病患者的腎功能是通過對腎臟的炎癥細胞因子的調(diào)節(jié)來實現(xiàn)。未來筆者將進一步開展相關實驗,一方面驗證抗炎治療是否對糖尿病腎病有直接的腎臟保護作用,另一方面將從細胞、基因水平進一步探究相關機制。

    總之,本研究發(fā)現(xiàn)二甲雙胍對糖尿病腎病大鼠的腎臟具有保護作用,其機制可能與抑制糖尿病大鼠腎臟炎癥細胞因子表達有關。

    [1]YAO Y,FOMISON-NURSE I C,HARRISON J C,et al.Chronic bilateral renal denervation attenuates renal injury in a transgenic rat model of diabetic nephropathy[J].American Journal of Physiology Renal Physiology,2014,307(3):F251-F262.

    [2]HE Y,XU Z,ZHOU M,et al.Reversal of early diabetic nephropathy by islet transplantation under the kidney capsule in a rat model[J].2016,2016(4):1-12.

    [3]VERAg,LóPEZ-MIRANDA V,HERRADóN E,et al.Characterization of cannabinoid-induced relief of neuropathic pain in rat models of type 1 and type 2 diabetes[J].Pharmacology Biochemistry Behavior,2012,102(2):335-343.

    [4]HUANG L Y,TSUI D Y,WILLIAMS C M,et al.The furoxan nitric oxide donor,PRG150,evokes dose-dependent analgesia in a rat model of painful diabetic neuropathy(PDN)[J].Clinical Experimental Pharmacology Physiology,2015,42(9):921-929.

    [5]肖雪娜,王瑩,馬彩娟,等.二甲雙胍和阿卡波糖治療早期糖尿病腎病療效比較[J].中日友好醫(yī)院學報,2012,12(2):86-89.

    [6]陳淼,婁寧,陳福蓮,等.二甲雙胍對糖尿病腎病患者腎功能的影響[J].南京醫(yī)科大學學報(自然科學版),2010,30(5):713-716.

    [7]張永剛,任寧衛(wèi).二甲雙胍聯(lián)合益氣補血法對2型糖尿病合并糖尿病腎病患者HGF、肌酐清除率及臨床療效影響[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報,2016,18(8):211-213.

    [8]YUE W,YANG C S,DIPAOLA R S,et al.Repurposing of metformin and aspirin by targeting AMPK-mTOR and inflammation for pancreatic cancer prevention and treatment[J].Cancer Prevention Research,2014,7(4):388-397.

    [9]SAISHO Y.Metformin and Inflammation:its potential beyondglucose-lowering effect[J].Endocr Metab Immune Disord Drug Targets,2015,15(3):196-205.

    [10]趙富利,亓民,劉輝.利拉魯肽聯(lián)合二甲雙胍治療2型糖尿病伴肥胖患者療效及對微炎癥狀態(tài)的影響[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志, 2015,25(15):43-46.

    [11]CUI F,ZOU D,GAO Y,et al.Effect of tongxinluo on nephrin expression via inhibition of notch1/snail pathway in diabetic rats[J]. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine,2015, 2015(7):1-11.

    [12]BISHNOI M,BOSGRAAF C A,ABOOJ M,et al.Streptozotocin-induced early thermalhyperalgesia is independentofglycemic state of rats:role of transient receptor potential vanilloid 1(TRPV1)and inflammatory mediators[J].Molecular Pain, 2011,7(1):3278-3294.

    [13]LI X,LI C,LI X,et al.Involvement of histone lysine methylation in p21gene expression in rat kidneyin vivoand rat mesan-gial cellsin vitrounder diabetic conditions[J].Journal of Diabetes Research,2016,2016(10):1-12.

    [14]JIANG S,DU P,AN L,et al.Anti-diabetic effect of coptis chinensis polysaccharide in high-fat diet with STZ-induced diabetic mice[J].International Journal of Biological Macromolecules, 2013,55(3):118-122.

    [15]LAMBA H S,BHARGAVA C S,THAKUR M,et al.α-glucosidase and aldose reductase inhibitory activity in vitro and antidiabetic activity in vivo of tribulus terrestris L (dunal)[J]. International Journal of Pharmacy Pharmaceutical Sciences, 2011,3(3):270-272.

    [16]HUANGg,LV J,LI T,et al.Notoginsenoside R1 ameliorates podocyte injury in rats with diabetic nephropathy by activating the PI3K/Aktsignaling pathway[J].InternationalJournalof Molecular Medicine,2016,38(4):1179-1189.

    [17]LOPEZPARRA V,MALLAVIA B,LOPEZFRANCO O,et al. Fcγ receptordeficiency attenuatesdiabetic nephropathy[J]. Journal of the American Society of Nephrology,2012,23(9):1518-1527.

    [18]PERNICOVA I,KORBONITS M.Metformin-mode of action and clinical implications for diabetes and cancer[J].Nature Reviews Endocrinology,2014,10(3):143.

    [19]施鵬,李婉湘.鹽酸二甲雙胍片對2型糖尿病神經(jīng)病變患者氧化應激的作用[J].中國實用神經(jīng)疾病雜志,2014(8):19-21.

    [20]SOLINI A,ROSSI C,DURANTI E,et al.Saxagliptin prevents vascular remodeling and oxidative stress in db/db mice.Role of endothelial nitric oxide synthase uncoupling and cyclooxygenase[J]. Vascular Pharmacology,2015,76(666):62-71.

    (童穎丹 編輯)

    Protective effect of Metformin on Streptozotocin-induced nephropathy in diabetic rats

    Yan Mei,San-tao Ou
    (Department of Nephrology,the Affiliated Hospital of Southwest Medical University, Luzhou,Sichuan 646000,China)

    Objective To observe the effectofMetformin on diabetic nephropathy induced by Streptozotocin in rats,and to explore its preventive and therapeutic effect on diabetic nephropathy.MethodsThirty-six healthy male 14-week-old Wistar rats were randomly divided into threegroups,i.e.normal controlgroup,diabeticgroup and Metformin interventiongroup.Streptozotocin was used to induce diabetic rat model. TNF-α,IL-1β,IL-6 and anti-inflammatory cytokine IL-10 in the renal tissues were detected by Western blot.MethodsThe levels of TNF-α,IL-6 and IL-1β in the renal tissues of the diabetic rats were significantly higher than those in the normal controls,while the IL-10 level was significantly lower than that in the controlgroup (P<0.05).After treatment with Metformin,the levels of TNF-α,IL-6 and IL-1β in the renal tissues decreased while the IL-10 level increased in the diabetic rats (P<0.05).ConclusionsMetformin can ameliorate diabetic nephropathy induced by Streptozotocin in rats by inhibiting the expression of inflammatory cytokines.

    Metformin;diabetes;nephropathy;inflammatory cytokine

    R587.1

    A

    2017-01-10

    歐三桃,E-mail:422216756@qq.com

    10.3969/j.issn.1005-8982.2017.20.001

    1005-8982(2017)20-0001-05

    猜你喜歡
    細胞因子腎臟腎病
    保護腎臟從體檢開始
    中老年保健(2022年3期)2022-08-24 02:58:10
    3種冠狀病毒感染后的腎臟損傷研究概述
    預防腎病,維護自己和家人的健康
    中老年保健(2021年4期)2021-08-22 07:07:58
    抗GD2抗體聯(lián)合細胞因子在高危NB治療中的研究進展
    中醫(yī)怎樣治腎病?
    腎病防治莫入誤區(qū)
    哪些藥最傷腎臟
    “重女輕男”的腎病
    憑什么要捐出我的腎臟
    特別健康(2018年9期)2018-09-26 05:45:46
    急性心肌梗死病人細胞因子表達及臨床意義
    国产永久视频网站| 国产午夜精品一二区理论片| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲色图综合在线观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 精品一品国产午夜福利视频| 18禁动态无遮挡网站| 免费观看的影片在线观看| 午夜免费鲁丝| 九色成人免费人妻av| 亚洲av成人精品一二三区| 国产 一区精品| 这个男人来自地球电影免费观看 | 欧美 日韩 精品 国产| 九色亚洲精品在线播放| 一本大道久久a久久精品| 美女cb高潮喷水在线观看| 精品国产国语对白av| 中国国产av一级| 日韩三级伦理在线观看| 日韩大片免费观看网站| 美女国产视频在线观看| 日韩中字成人| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲成色77777| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产在线视频一区二区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 午夜91福利影院| 观看美女的网站| 少妇的逼好多水| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久这里有精品视频免费| 欧美3d第一页| 好男人视频免费观看在线| 免费av中文字幕在线| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 哪个播放器可以免费观看大片| 久久国产精品大桥未久av| 国产成人freesex在线| 精品久久久噜噜| 尾随美女入室| av线在线观看网站| a级毛片黄视频| 亚洲色图综合在线观看| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲av中文av极速乱| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| h视频一区二区三区| 欧美成人精品欧美一级黄| 在线 av 中文字幕| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲av福利一区| 欧美日韩精品成人综合77777| 久久99精品国语久久久| 成人亚洲精品一区在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 波野结衣二区三区在线| 国产免费福利视频在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 2022亚洲国产成人精品| 边亲边吃奶的免费视频| 全区人妻精品视频| 天堂中文最新版在线下载| 欧美三级亚洲精品| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲无线观看免费| 麻豆成人av视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 如何舔出高潮| 国产精品国产三级国产专区5o| 日韩免费高清中文字幕av| 成人影院久久| 最新中文字幕久久久久| 18在线观看网站| 麻豆成人av视频| 一级爰片在线观看| 一级黄片播放器| av在线播放精品| 色婷婷av一区二区三区视频| 满18在线观看网站| 国产精品不卡视频一区二区| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 亚洲av免费高清在线观看| 最新的欧美精品一区二区| 日韩视频在线欧美| 人妻人人澡人人爽人人| 亚洲综合色网址| 插逼视频在线观看| 久久狼人影院| 久久久久久人妻| 91成人精品电影| 另类精品久久| 国产日韩欧美亚洲二区| 欧美97在线视频| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲欧美色中文字幕在线| 超碰97精品在线观看| 99久国产av精品国产电影| 国产成人av激情在线播放 | 91精品国产国语对白视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 日韩大片免费观看网站| 久久久久久久久大av| 少妇丰满av| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 男人操女人黄网站| 观看av在线不卡| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲一区二区三区欧美精品| 91久久精品电影网| 亚洲精品aⅴ在线观看| av.在线天堂| 午夜福利网站1000一区二区三区| 制服丝袜香蕉在线| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲第一区二区三区不卡| 欧美日韩综合久久久久久| 久久久久久久久久成人| 国产精品不卡视频一区二区| 日韩欧美一区视频在线观看| 18+在线观看网站| 久久av网站| 亚洲经典国产精华液单| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 高清午夜精品一区二区三区| 国产有黄有色有爽视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 免费观看在线日韩| 免费观看av网站的网址| 高清午夜精品一区二区三区| 欧美xxⅹ黑人| 国产一级毛片在线| 99热全是精品| 男人爽女人下面视频在线观看| 大香蕉97超碰在线| 插阴视频在线观看视频| 人妻人人澡人人爽人人| 丰满迷人的少妇在线观看| 草草在线视频免费看| 热99久久久久精品小说推荐| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 中文字幕制服av| 国产成人aa在线观看| 伦理电影免费视频| 久久久久久久久大av| 成人毛片60女人毛片免费| 男女无遮挡免费网站观看| 99热全是精品| 九九在线视频观看精品| 三上悠亚av全集在线观看| 久久精品国产a三级三级三级| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产精品久久久久久久电影| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 超色免费av| 伦理电影免费视频| 丰满少妇做爰视频| 人妻少妇偷人精品九色| 国产精品国产三级国产专区5o| 午夜福利视频在线观看免费| 两个人免费观看高清视频| 国产午夜精品一二区理论片| 黑丝袜美女国产一区| 99视频精品全部免费 在线| 中文天堂在线官网| 街头女战士在线观看网站| 五月玫瑰六月丁香| 天美传媒精品一区二区| 美女国产高潮福利片在线看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 午夜福利,免费看| 国产免费福利视频在线观看| 一区二区三区精品91| 久久久久久久久大av| 午夜激情久久久久久久| 精品一区在线观看国产| 国产成人免费无遮挡视频| 日韩欧美精品免费久久| 九九爱精品视频在线观看| 精品人妻在线不人妻| 人妻 亚洲 视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产成人精品在线电影| av网站免费在线观看视频| 这个男人来自地球电影免费观看 | 美女脱内裤让男人舔精品视频| 欧美三级亚洲精品| 久久免费观看电影| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 欧美老熟妇乱子伦牲交| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 在线精品无人区一区二区三| 波野结衣二区三区在线| 日本-黄色视频高清免费观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 超色免费av| 国产国语露脸激情在线看| 各种免费的搞黄视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 精品少妇久久久久久888优播| 曰老女人黄片| 国产成人精品一,二区| 国产成人一区二区在线| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 日本午夜av视频| 一级毛片电影观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 三上悠亚av全集在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲欧洲国产日韩| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 美女国产高潮福利片在线看| 在线观看一区二区三区激情| av.在线天堂| 我的女老师完整版在线观看| 久久 成人 亚洲| 日韩 亚洲 欧美在线| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产高清三级在线| 中国美白少妇内射xxxbb| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久免费观看电影| 精品久久久久久电影网| 欧美少妇被猛烈插入视频| 精品国产国语对白av| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 午夜日本视频在线| av又黄又爽大尺度在线免费看| av国产精品久久久久影院| 老司机亚洲免费影院| 免费看av在线观看网站| 亚洲国产日韩一区二区| h视频一区二区三区| 大话2 男鬼变身卡| 亚洲国产欧美在线一区| av卡一久久| 亚洲成人一二三区av| 美女中出高潮动态图| 九九在线视频观看精品| 久久精品国产自在天天线| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲综合精品二区| 国产亚洲一区二区精品| 少妇的逼水好多| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美日韩在线观看h| 精品久久久久久久久av| 精品国产国语对白av| 亚洲精品中文字幕在线视频| h视频一区二区三区| 母亲3免费完整高清在线观看 | 午夜免费观看性视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 在线观看免费日韩欧美大片 | 国产深夜福利视频在线观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 波野结衣二区三区在线| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲国产av新网站| 国产亚洲最大av| 国产精品一区www在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲精品一二三| 国产黄色免费在线视频| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 2018国产大陆天天弄谢| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产av精品麻豆| 亚洲美女视频黄频| 国产成人a∨麻豆精品| 国产爽快片一区二区三区| 女人久久www免费人成看片| av免费观看日本| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲第一av免费看| 亚洲av二区三区四区| 少妇被粗大猛烈的视频| 久久久久人妻精品一区果冻| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产高清不卡午夜福利| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 免费高清在线观看视频在线观看| 久久久久视频综合| 热re99久久国产66热| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲无线观看免费| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲精品乱久久久久久| 精品少妇内射三级| 国产精品久久久久久精品古装| 久久这里有精品视频免费| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 少妇人妻 视频| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产成人aa在线观看| 午夜影院在线不卡| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲欧洲国产日韩| 久久久久久久精品精品| 51国产日韩欧美| 亚洲三级黄色毛片| 99视频精品全部免费 在线| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 九九在线视频观看精品| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| av电影中文网址| 老女人水多毛片| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲国产欧美在线一区| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 久久狼人影院| 制服丝袜香蕉在线| 精品午夜福利在线看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 成年女人在线观看亚洲视频| 久久久久久久久久久久大奶| 欧美少妇被猛烈插入视频| 免费黄色在线免费观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产国语露脸激情在线看| 一区二区三区四区激情视频| 国产精品久久久久久精品古装| 人妻一区二区av| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲国产欧美在线一区| 我要看黄色一级片免费的| 亚洲精品一区蜜桃| 在线天堂最新版资源| 一级毛片 在线播放| 黄色毛片三级朝国网站| 国产深夜福利视频在线观看| 美女中出高潮动态图| 亚洲国产日韩一区二区| 超色免费av| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲精品成人av观看孕妇| 色5月婷婷丁香| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 精品久久国产蜜桃| 日本欧美国产在线视频| 一个人免费看片子| 日本免费在线观看一区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 一区二区三区免费毛片| 亚洲图色成人| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲欧洲国产日韩| 99久久综合免费| 亚洲图色成人| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲国产av影院在线观看| 丝袜美足系列| 亚洲精品一区蜜桃| 99国产综合亚洲精品| 女人精品久久久久毛片| 午夜福利影视在线免费观看| 在线观看人妻少妇| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产综合精华液| 国产精品久久久久久久久免| 在线观看人妻少妇| 人妻 亚洲 视频| 欧美bdsm另类| 一级毛片我不卡| 亚洲人成网站在线观看播放| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 午夜老司机福利剧场| h视频一区二区三区| 日韩伦理黄色片| 美女cb高潮喷水在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 看非洲黑人一级黄片| 高清欧美精品videossex| 在线播放无遮挡| 99热网站在线观看| 国产日韩欧美视频二区| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 精品一区二区免费观看| 日韩亚洲欧美综合| 蜜桃在线观看..| 精品国产乱码久久久久久小说| videossex国产| 国产免费又黄又爽又色| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产成人av激情在线播放 | 欧美97在线视频| av在线观看视频网站免费| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 自线自在国产av| 日本-黄色视频高清免费观看| 欧美少妇被猛烈插入视频| 999精品在线视频| 大陆偷拍与自拍| 午夜久久久在线观看| 在线观看www视频免费| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲精品乱久久久久久| 在线免费观看不下载黄p国产| 色94色欧美一区二区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产高清有码在线观看视频| 日本欧美视频一区| 国产精品国产三级专区第一集| av卡一久久| 精品视频人人做人人爽| av福利片在线| 国产精品嫩草影院av在线观看| 蜜桃在线观看..| 最黄视频免费看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | a级毛片免费高清观看在线播放| 久久久久久久大尺度免费视频| 日韩av不卡免费在线播放| 99久久综合免费| 精品一品国产午夜福利视频| 国产熟女午夜一区二区三区 | av有码第一页| 精品午夜福利在线看| 欧美 日韩 精品 国产| 天天操日日干夜夜撸| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产一区有黄有色的免费视频| 两个人的视频大全免费| 精品久久久久久电影网| 久久久久网色| 国产男女超爽视频在线观看| 在线观看三级黄色| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲人成网站在线播| 久久国产精品大桥未久av| 久久久久人妻精品一区果冻| av黄色大香蕉| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 不卡视频在线观看欧美| 国产成人精品婷婷| 国产精品久久久久久久久免| 制服丝袜香蕉在线| 天美传媒精品一区二区| 国产一区有黄有色的免费视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 最近手机中文字幕大全| 午夜福利,免费看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| a级毛色黄片| 国产免费福利视频在线观看| 久久99热这里只频精品6学生| h视频一区二区三区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产成人aa在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲国产欧美在线一区| 韩国av在线不卡| 精品国产露脸久久av麻豆| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产一区二区三区av在线| 大香蕉97超碰在线| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 国产一区亚洲一区在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 99热国产这里只有精品6| 男人爽女人下面视频在线观看| 最近中文字幕2019免费版| 久久97久久精品| 国产伦理片在线播放av一区| 欧美精品国产亚洲| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 三级国产精品欧美在线观看| 久久精品久久精品一区二区三区| 日韩在线高清观看一区二区三区| 啦啦啦在线观看免费高清www| 久久精品国产亚洲av天美| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲综合色惰| 欧美日韩亚洲高清精品| 伊人亚洲综合成人网| 午夜91福利影院| 午夜福利视频在线观看免费| 久久99一区二区三区| 精品国产国语对白av| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产精品久久久久久精品古装| 久久热精品热| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲在久久综合| 女人精品久久久久毛片| 18禁动态无遮挡网站| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| a级毛片黄视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 人妻少妇偷人精品九色| 久久久久国产网址| 久久午夜综合久久蜜桃| 日韩电影二区| 我的女老师完整版在线观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产日韩欧美亚洲二区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日本wwww免费看| 久久久久久久国产电影| 欧美精品一区二区免费开放| 国产黄色视频一区二区在线观看| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲综合精品二区| 久久久久久久久久人人人人人人| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲久久久国产精品| 在线观看国产h片| 另类亚洲欧美激情| 九色成人免费人妻av| tube8黄色片| 成人国产av品久久久| 国产免费一级a男人的天堂| 美女内射精品一级片tv| 黄色一级大片看看| 校园人妻丝袜中文字幕| 伦精品一区二区三区| 中文字幕最新亚洲高清| 少妇被粗大的猛进出69影院 | av在线观看视频网站免费| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲精品自拍成人| 国产视频内射| av播播在线观看一区| 妹子高潮喷水视频| 久久99精品国语久久久| 国产亚洲一区二区精品| 国产一区二区三区av在线| 亚洲成人一二三区av| 亚洲精品日韩av片在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 精品一区二区免费观看| 亚洲少妇的诱惑av| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 啦啦啦在线观看免费高清www| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 久久久久视频综合| av在线app专区| 少妇人妻 视频| 中文字幕亚洲精品专区| 日本午夜av视频| 婷婷色av中文字幕| 亚洲精品,欧美精品| 麻豆乱淫一区二区| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产精品久久久久久久电影| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲中文av在线| 国产免费视频播放在线视频| 国产成人精品福利久久| 国产高清有码在线观看视频| 国产精品99久久久久久久久| 国产片内射在线| 国产精品国产av在线观看| 欧美少妇被猛烈插入视频| 赤兔流量卡办理| 欧美少妇被猛烈插入视频| av视频免费观看在线观看| 国产片内射在线| 熟女av电影| 国产综合精华液| 精品酒店卫生间| 丰满少妇做爰视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| av电影中文网址| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 一区二区三区免费毛片| 插逼视频在线观看| 最近手机中文字幕大全| 大话2 男鬼变身卡| 秋霞伦理黄片| av一本久久久久| 午夜福利,免费看| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲中文av在线| 精品卡一卡二卡四卡免费| 99国产综合亚洲精品| 国产精品久久久久成人av| 国产成人精品久久久久久| 亚洲av免费高清在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 母亲3免费完整高清在线观看 | 夜夜爽夜夜爽视频| 久久久国产一区二区| 热99久久久久精品小说推荐| 青春草亚洲视频在线观看| 成年人免费黄色播放视频| videossex国产| 成人毛片60女人毛片免费|